Roche Cobas e411检测心肌损伤标志物和降钙素原性能验证*

王丽萍,刘玲玲,褚福禄,张炳昌(山东大学附属省立医院检验科，济南 250021)



·论 著·

Roche Cobas e411检测心肌损伤标志物和降钙素原性能验证*

王丽萍,刘玲玲,褚福禄,张炳昌△
(山东大学附属省立医院检验科，济南 250021)

目的 验证Roche Cobas e411电化学发光免疫分析法(ECLIA)检测心肌损伤标志物超敏肌钙蛋白T(hs-cTnT)、肌酸激酶同工酶质量(CK-MB mass)、肌红蛋白(MYO)、脑利钠肽前体氨基末端(NT-proBNP)和降钙素原(PCT)的分析性能。方法 参照美国临床和实验室标准化委员会(NCCLS)相关文件，对Cobas e411检测hs-cTnT、CK-MB mass、MYO、NT-proBNP和PCT的准确度、精密度、携带污染率、线性范围进行验证。结果 按照EP9-A2、EP5-A2、EP7-A2、EP6-A2文件要求验证得到各检测项目精密度的变异系数(CV)均小于3%，携带污染率小于0.1%；所验证项目的相关系数(r)>0.99；验证hs-cTnT的功能灵敏度为3 pg/mL；与厂家声明一致。结论 Roche Cobas e411全自动电化学发光分析仪检测心肌损伤标志物和PCT的主要分析性能与厂家声明一致，适用于临床医学实验室用于这些项目的检测。

降钙素原； 超敏肌钙蛋白T； 肌酸激酶同工酶质量； 肌红蛋白； 脑利钠肽前体氨基末端

电化学发光免疫分析(ECLIA)是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫之后的新一代免疫标记测定技术，其原理是采用双抗体夹心法，将形成的抗原抗体复合物通过生物素与链霉素亲和素间的反应结合到磁性微粒上，在测量池中磁性微粒(带电荷的三联吡啶钌)通过磁铁吸附到电极上，经清洗电极加电压产生化学发光，光电倍增管将其测定到的发光强度自动对应到标准曲线得出结果。根据ISO:15189[1](CNAS-CL02，2012)实验室认可的条款要求和《医疗机构临床实验室管理办法》[2]的要求，为了保证检验质量，本文参照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)相关文件EP9-A2[3]、EP5-A2[4](EP15-A2[5])、EP6-A2[6]等的要求，在新引入仪器设备或开展新项目或每年需要对仪器设备的性能进行方法学验证，包括准确度、精密度、携带污染率、线性范围等方面。按照实验室标准化管理的要求，本科对Cobas e411所开展的超敏肌钙蛋白T(hs-cTnT)、肌酸激酶同工酶质量(CK-MB mass)、肌红蛋白(MYO)、脑利钠肽前体氨基末端(NT-proBNP)和降钙素原(PCT)5个项目进行了方法学性能验证。现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器 Cobas e411全自动化学发光分析仪，来自美国Roche公司。

1.2 试剂 Roche 原装试剂：hs-cTnT (批号17949102)、CK-MB mass (批号17690701)、MYO (批号17695501)、NT-proBNP (批号17804801)和PCT (批号17764104)；心肌质控品(批号17458902)、hs-cTnT质控品(批号17296804)、PCT质控品(批号17764104)。

1.3 标本来源 收集50例标本，来自2014年6月山东省立医院门诊患者，溶血、黄疸、脂血等标本剔除，均经Cobas e411测定了hs-cTnT、CK-MB mass、MYO、NT-proBNP和PCT，用于线性验证，上述所有标本均为常规检测的剩余标本，本研究不采集与患者隐私相关的任何医疗信息。

1.4 方法

1.4.2 测定线性范围 根据EP6-A2和EP7-A2文件将接近分析仪检测上限的高值标本和检测下限的低值标本混合成，6个不同浓度的标本，浓度分别为100%低值，80%低值+20%高值，60%低值+40%高值，40%低值+60%高值，20%低值+80%高值，100%高值。混合后将各浓度标本分别测定3次后取均值定为预期值，采用直线回归方程进行数据分析，直线回归方程为Y=aX+b，要求a值在0.97～1.03、r≥0.975。

1.4.3 携带污染率 根据EP10-A2文件要求，选取一份接近分析仪检测上限的高浓度标本(H)和一份检测下限的低浓度标本(L)，按国际血液学标准化委员会制定的程序，将高值标本连续测定3次(H1、H2、H3)，紧接着连续测定低值标本3次(L1、L2、L3)，携带污染率计算公式为[(L1-L3)/(H3-L3)]×100%，携带污染率小于0.5%为合格。

1.4.4 测定功能灵敏度 检测低限验证：以日内重复CV为20%时,对应检测限样品具有的平均浓度，确定为检测系统或方法可定量报告分析物的最低浓度的限值，可用来证明测量范围最低限值的可重复性。取已知浓度的患者标本进行稀释，连续检测，最少20次，根据批间CV≤20%时的最大稀释管浓度作为功能灵敏度。本实验室所开展项目中肌钙蛋白T属于超敏系列，根据临床实际需要，只验证hs-cTnT的功能灵敏度。

2 结 果

2.1 准确度结果 本实验室参加2014年卫生部临检中心心肌标志物和NT-proBNP的室间质评，各项目质评结果得分均为100%，当前性能解释为“满意”，累计性能解释为“成功”。PCT参加了2014年朗道RIQAS的immunoassayspeciality1 全球室间质评，12次的结果均为满意。

2.2 精密度结果hs-cTnT、CK-MBmass、MYO、NT-proBNP和PCT5个项目的精密度结果如表1所示。

表1 精密度统计结果(%)

注：厂方说明书的精密度是按NCCLS的EP5-A2执行，采用标准血浆，两个浓度水平，每天分别测定4次，连续测定21d。本科室按照实验室验证的NCCLS-EP5-A2(两个浓度水平，每天分别测定2次或4次，连续测定10d或5d)和EP15-A2(两个浓度水平，每天分别测定3次，连续测定5d)文件，但EP15-A2验证结果都偏大于厂商说明，而EP5-A2验证结果都符合厂商说明。因此，建议实验室按照EP5-A2文件验证。

2.3 线性范围验证 经计算得BNP、PCT、MYO、CK-MB、hs-cTnT的回归系数分别为0.986 0、0.985 6、1.001 0、0.994 6、1.015 1，r为0.994 1、0.999 4、0.999 9、0.999 6、0.996 1。以BNP项目为例，统计和分析结果见表2、图1。

表2 BNP线性统计结果(pg/mL)

2.4 携带污染率 经统计得BNP、PCT、MYO、CK-MB、Hs-cTnT的携带污染率分别为0.00%、0.00%、0.06%、0.01%、0.02%。以BNP项目为例，携带污染率的统计结果见表3。

2.5 功能灵敏度验证 经验证，hs-cTnT检测灵敏度为3pg/mL,日内重复CV%为18.33%<20%，与试剂说明书要求符合，验证合格。

图1 BNP的线性分析图

项目高值测定结果H1H2H3低值测定结果L1L2L3高值干扰L1-L3低值干扰H3-L3BNP3181432260319737．537．398．63-1．2431964．37

根据携带污染率计算公式计算：(L1-L3)/ (H3-L3)×100%=1.24/31 964.37×100%=0.00%。

3 讨 论

RocheCobase411分析仪是应用ECLIA的原理[7]进行肿瘤标志物、甲状腺功能、激素、心肌标志物等检测，其通过罗氏封闭检测系统来完成对各检测项目的检测，说明书中提供的所有参数都是厂家在国外的最佳条件下完成的，这与本科室的水质、电压的稳定性、实验室环境温湿度、实验室操作人员的素质等实际的外部条件存在差异，因此，对本科在Cobase411上开展的hs-cTnT、CK-MBmass、MYO、NT-proBNP和PCT共5个项目进行了的方法学性能验证。

3.1 精密度 由表1可以看出，按照NCCLS的EP5-A2文件所有5个项目的批内及批间精密度都能满足厂家声明的性能，与苏维等[8]结论一致，但与杨苹等[9]的结论不一致，可能与检测项目不同，试剂盒性能也有差异有关。按照EP15-A2验证的精密度不能满足厂家声明的性能，与欧阳能良等[10]结论相似。因此，建议实验室按照EP5-A2文件验证。通过验证结果可以看出，在精密度验证上，CK-MBmass验证结果偏差最大，可能与CK-MB属于酶类，易受很多因素影响而活性改变有关，而本试验验证过程使用的非同一试剂盒，该试剂的瓶间差较其他4种试剂偏大。

3.2 线性范围 由表2可以看出，本研究验证的5个检测项目的线性范围与厂家声明的一致，与苏维等[8]结论一致。

3.3 携带污染Cobase411在加入标本和试剂前，会自动冲洗加样针，且标本检测时，一个标本一个吸头，一个项目一个杯子，携带污染率低及抗干扰能力强，由表3可以看出，本次验证的5个检测项目与厂家声明的一致，检测结果准确、可靠。

3.4 功能灵敏度 根据临床实际应用需要，本研究只进行了hs-cTnT功能灵敏度的验证，结果与厂家声明的一致。Rochecobase411是全自动、随机的异相免疫分析系统。该系统采用最先进的电化学发光免疫分析技术,具有高灵敏度、高特异性、高亲和力、高准确度、线性范围宽、自动化程度高、无放射线污染、操作简便快速等特点。实验结果显示RocheCobase411全自动化学发光分析仪检测hs-cTnT、CK-MBmass、MYO、NT-proBNP和PCT的主要分析性能良好，与厂家声明一致，能够满足临床检测的性能要求，适用于临床标本的检测。

[1]ISO15189.Medicallaboratories-Requirementsforqualityandcompetence[S].Geneva,Switzerland：InternationalOrganizationforStandardizaion,2012.

[2]中华人民共和国卫生部.医疗机构临床实验室管理办法[S].2006-02-27.

[3]NCCLS.EP9-A2.Methodcomparisionandbiascitimationusingpatientsamples.ApprovedGuideline-secondedition[S].Wayne，PA，USA：NCCLS，2002.

[4]NCCLS.EP5-A2.Evaluationofprecisionperformanceofquantitativemeasurementmethods;approvedguideline-secondedition[S].Wayne,PA,USA:NCCLS,2004.

[5]CLSI.EP15-A2.Userverificationofperformanceforprecisionandtrueness;approvedguideline-secondedition[S].Wayne,PA,USA:CLSI,2005.

[6]NCCLS.EP6-A2.Evaluationofthelinearityofquantitativemeasurementprocedures[S].Wayne,PA,USA:NCCLS，2003.

[7]董伟.新型的电化学发光免疫分析及临床应用[M].标记免疫分析与临床，2001,8(1):31-32.

[8]苏维,李明,王淑仙,等.罗氏CobasE601检测糖原抗原的方法学性能评价[J].国际检验医学杂志,2013,34(6)：716-718.

[9]杨苹,周爱娥,张莉萍,等.罗氏MODULARE170全自动电化学发光免疫分析仪性能验证[J].重庆医学，2013,38(19)：2395-2397.

[10]欧阳能良,王伟佳,李飞,等.应用CLSIEP15-A2文件评价BNP和NT-proBNP的精密度性能[J].国际检验医学杂志，2011,32(5)：538-540.

Performance verification of Roche Cobas e411 ECLIA analyzer in detecting biomarkers of myocardial injury and PCT*

WANGLi-ping,LIULing-ling,CHUFu-lu，ZHANGBing-chang△
(DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedProvincialHospital,ShandongUniversity,Jinan,Shandong250021,China)

Objective To verify the analytical performance of the electrochemiluminescence immunoassay (ECLIA) system in the Roche Cobas e411 analyzer for detecting hs-cTnT,CK-MB mass,MYO,NT-proBNP and PCT.Methods The accuracy,precision,contamination carryover rate and linear range of ECLIA system in the detection of hs-cTnT，CK-MB mass，MYO,NT-proBNP and PCT were analyzed according to the NCCLS evaluation protocols related guidelines.Results CV of precision of each item was all less than 3% according to the requirements of EP9-A2,EP5-A2,EP7-A2 and EP6-A2 documents.The contamination carryover rate of each item was less than 0.1%.rof each item was more than 0.99.The functional sensitivity of hs-cTnT was 3 pg/mL,which was consistent with manufacturer′s claim.Conclusion The main analytical performance of the Roche Cobas e411 analyzer in the detection of hs-cTnT，CK-MB mass，MYO,NT-proBNP and PCT is consistent with manufacturer′s claim,applicable to clinical laboratory routine testing.

myocardial injury biomarkers; PCT; performance verification

山东省临床重点专科建设项目经费资助项目(鲁卫医字[2013]26号)。

王丽萍，女，检验师，本科，主要从事临床检验工作。△

，E-mail:707154036@qq.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.21.006

A

1672-9455(2015)21-3147-03

2015-03-13

2015-08-17)