44 例犬乳腺肿瘤的病理学分析及p53 和HER-2 的蛋白表达

姚 薇，杨 超，梁伟峰，刘 云

（东北农业大学动物医学学院，黑龙江 哈尔滨 150030）

犬乳腺肿瘤的发病率仅次于皮肤肿瘤[1]，其中良性肿瘤占50%以上，但恶性肿瘤的发病率逐年上升，是造成病犬死亡的重要原因。乳腺肿瘤多发生于母犬，是母犬全部肿瘤性疾病的50%，占母犬生殖系统疾病的82%[2]。有文献报道，表皮生长因子受体-2（HER-2）在肿瘤的形成及生长过程中起着重要的调控作用，其超表达能阻止肿瘤细胞凋亡并促进其生长[3]。抑癌基因p53 与人类的半数肿瘤相关，当该基因受到刺激后可发挥细胞周期阻滞、细胞凋亡、维持基因组稳定等功能[4]。这两种基因在正常情况下表达量极低，不易检测，而在肿瘤发生的时候有明显的蛋白过表达，在恶性肿瘤中表达量更高。虽然这两种基因的蛋白检测在临床上已经有所应用，却并没有资料显示肿瘤类型与两种基因的过表达的关系。本文通过观察44 例犬乳腺肿瘤的组织学形态，将其分类，并用免疫组化法检测HER-2 与p53 的蛋白表达，分析两种基因的表达与犬乳腺肿瘤的病理学关系，旨在分析肿瘤类型与两种基因的表达量及表达强度的关系。

1 材料与方法

1.1 材料 本材料来源于东北农业大学附属动物医院。一抗：RAB-0156 即用型C-erbB-2 兔抗人多克隆抗体，购自Maixin 公司；BS6437 p53 多克隆抗体，购自Bioword 公司。

SA1022 兔IGg-免疫组化试剂盒（SABC即用型），购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 组织学形态的观察 将肿瘤组织分割成大小约1 cm 左右的小块，用4%多聚甲醛溶液固定24 h后，进行修块、脱水处理，石蜡包埋，备用。蜡块作4 μm 连续切片。H.E.染色，常规病理学观察。

1.2.2 HER-2、p53 蛋白表达的检测 免疫组化法检测HER-2、p53 蛋白的表达，按试剂盒说明书操作。

1.3 试验结果判读标准 病理分类：肿瘤的病理分类根据WHO分类标准[5]。

免疫组化：p53 以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性；HER-2 以细胞膜出现棕黄色颗粒为阳性。高倍视野下随意计数100 个肿瘤细胞，（-）完全没有着色或少于10%肿瘤细胞有细胞膜着色；（+）大于10%的肿瘤细胞呈现微弱、不完整的细胞膜着色；（++）大于10%的肿瘤细胞呈现弱至中度完整的细胞膜着色；（+++）大于10%的肿瘤细胞呈现强的、完整的细胞膜着色[6]。

2 试验结果

2.1 组织形态学观察 44 例犬乳腺肿瘤病理组织切片中，通过H.E.染色共观察到9 种类型肿瘤，其分类及所占比例如表1 所示。

2.2 HER-2、p53 蛋白表达 42 例犬乳腺肿瘤中HER-2、p53 蛋白的表达情况如图2 所示，从表2中可以发现HER-2 在良性肿瘤中无表达，在恶性肿瘤中的表达率为38.9%；p53 在犬乳腺肿瘤中的表达可达78.6%，而在恶性肿瘤中的表达更是高达100%。从表达强度来看，p53 在18 例恶性肿瘤中15 例为（+++），3 例（++）；在24 例良性肿瘤中，有20 例为（+）。HER-2 在18 例恶性肿瘤中，3 例（+），4 例（++）。

表1 44例犬乳腺肿瘤分类情况

表2 HER-2与p53在犬乳腺肿瘤中的表达情况

3 讨论

姚华等曾在试验中发现恶性肿瘤的发病率远远高于良性[7]。本试验所收集的44 例乳腺肿瘤中，良性肿瘤占54.5%，恶性达45.5%，两者比例相接近。肿瘤的分类及恶性程度对预后有一定影响。患良性肿瘤的犬在切除后基本无复发，恶性肿瘤的犬则有不同程度的复发。肿瘤的大小对其是否复发有很大影响，如肿瘤大于5 cm，其复发较快且复发率高；对于有淋巴转移的患犬，往往在手术后很快复发，且1-2年内死亡；浸润性癌在预后方面效果不佳。

研究表明，30%的人类肿瘤中存在HER-2 基因的扩增/过表达，乳腺癌中HER-2 的扩增和过表达，对于评价预后、预测化疗与内分泌治疗反应及是否选择Herceptin 治疗意义重大[8]。临床经验表明，HER-2 的表达较低且全部出现于恶性肿瘤中，对临床诊断有相当的价值。本试验结果显示，HER-2 在良性肿瘤中无表达，在恶性肿瘤的阳性表达为38.9%。这一结果与Dutra AP[9]和Gama A[10]报道的结果相似。在恶性肿瘤的表达中，浸润性癌、黏液癌及混合样癌中均有HER-2 的表达，但在髓样癌中无表达；在表达强度上，浸润性癌和混合样癌中表达量较高且强，HER-2 的检测可在这两种类型的肿瘤的诊断上有指导意义。

Helal 等（2000）研究发现，p53 的表达与肿瘤组织的恶性程度有关，王坤等[11]测得正常乳腺组织中p53 蛋白呈阴性，而在乳腺癌中p53 蛋白的阳性表达率为65.63%。本试验结果显示，p53 在各类型的恶性肿瘤中均有表达，其表达量可达100%；强阳性（+++）结果出现在小叶癌、导管癌和髓样癌中，占全部恶性肿瘤中的83.3%。，可见p53 的表达强度与乳腺肿瘤的恶性度及肿瘤类型有关，可用作乳腺肿瘤诊断与分级的参考指标，对临床预后判断有一定意义。

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