三种HIV 抗原/抗体检测方法对HIV 早期感染检测的诊断研究

常俊峰 (天水四〇七医院，天水 741000)

艾滋病是一种全球性的严重危害人类健康的传染病，其主要通过输血、性接触、吸毒等途径传播，由于艾滋病会造成全身免疫力的下降，从而引发多种并发症而死亡，目前临床多用抗原抗体检查方法对HIV 病毒进行筛查，具有敏感性高、特异性强的特点，但是第三代HIV 抗体检测试剂对HIV 抗体产生前的感染无法诊断［1，2］，第四代HIV 检测试剂检测HIV p24 抗原和抗体，大大地提高了检测的效能，不同试剂盒有不同的检测效果，本研究分别使用两个第四代HIV 检测试剂盒对检验中心怀疑HIV 感染的血液样本进行检测，结果汇报如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2010 年1 月至2013 年8 月送至本实验中心共采集吸毒人员及性服务工作者的血液标本3 863 份，血液标本的分离、保存、离心均严格按照实验室相关规范进行操作。BBI 阳转血清盘(购自美国的BBI 公司)4 套，每套含有4～8 份系列样品。分别使用两种第4 代HIV 试剂盒(英国Abbott公司生产的Murex HIV Ag/Ab 检测试剂:编号为A;荷兰Organon 公司Vironostika HIV Uni-FormⅡAg/Ab 检测试剂:编号为B)，一种第3 代HIV 试剂盒［英国Abbott 公司生产的Murex HIV-1.2.O 试剂:(编号为C)］及HIV 间接荧光抗体试验试剂盒［普瑞麦迪(北京)实验室技术有限公司］对上述血液样本和BBI 阳转血清盘进行检测。

1.2 试剂与仪器 罗氏ELECSYS 2010 变色龙酶免仪，雅培Axsym 化学发光免疫分析仪，Bio-Rad MODEL1575 型洗板机，法国梅里埃公司(bioMerieux)mini-VIDAS 分析仪。

1.3 实验方法 对所有的血液样本分别使用两种试剂盒通过快速法与ELISA 法平行检测HIV，检测结果如果不同，将血液标本及阳性血样进行双孔复试，确定HIV 的感染状态。检测完成后，所有样品使用间接荧光抗体试验法重新确认，所有操作严格按照试剂盒说明书进行。对初次检测出阳性样本的采样时间进行统计，比较两种试剂盒检测的窗口期的差异，并对BBI 转阳血清盘检测结果进行描述。

1.4 统计学方法 在SPSS10.0 中进行统计分析，计数资料建立四格表并采用χ2检验比较几种试剂盒检测结果是否存在差异，检验水准取α=0.05。灵敏度=筛检试验阳性人数/确诊阳性人数×100%，特异度=筛检试验阴性人数/确诊阴性人数×100%，误诊率=1 -特异度，漏诊率=1-灵敏度。

2 结果

2.1 试剂盒A 和B 检测HIV 的诊断学评价指标 P24 检测3 863 份血液样本共确诊54 份HIV 感染阳性样本，试剂盒A 和B 对3 863 份样本进行同步检测，结果:试剂盒A、B 均完全检出54 例HIV 感染阳性的血液样本，试剂A 检出的灵敏度=100%，特异度=99.61%，漏诊率=0，误诊率=0.39%;试剂盒B 检出的灵敏度=100%，特异度=99.37%，漏诊率=0，误诊率=0.63%。详见表1、2。

2.2 两种第4 代试剂检出结果比较 试剂A 和试剂B 检出结果进行比较，结果差异不显著(P ＞0.05)。详见表3。

2.3 不同试剂对不同BBI 阳转血清盘检出窗口期的情况 分别对4 套BBI 阳转血清盘采用A、B、C、P24 进行检测，不同厂家生产的第4 代HIV 抗体试剂盒A、B，第三代试剂盒C 检测早期HIV 感染的窗口期存在差别，A 试剂、B 试剂分别较C 试剂的检测窗口期提前5.5 和3.7 d，但是与P24 抗原试剂盒的检出窗口期却滞后4.25 至6.05 d。各种试剂盒检测HIV 感染的窗口期详见表4。

表1 试剂A 与P24 检出结果的比较Tab.1 Comparison of results of A and P24

表2 试剂B 与P24 检出结果的比较Tab.2 Comparison of results of B and P24

表3 两种第4 代试剂检出结果比较Tab.3 Comparison of detection results of fourth two generation reagents

表4 各种试剂盒检测HIV 感染的窗口期Tab.4 All kits window period of HIV infection

3 讨论

艾滋病，又称获得性免疫缺陷综合征，是反转录病毒HIV 感染导致全身免疫系统的破坏，促成很多疾病的发生，可以通过接触黏膜组织的口腔、生殖器、肛门等或者接触带有病毒的血液、精液等分泌物物而传染。艾滋病累及消化系统、泌尿系统、呼吸系统、神经系统等全身多个器官，并且造成病毒、细菌、真菌等多种感染和恶性肿瘤，很多患者因为得不到及时的治疗而死亡或者残疾，病毒感染者不仅自身受到社会的歧视，还可能会造成病毒的继续传播，因此对病毒感染者进行早期诊断是治疗和防护艾滋病的重要手段。

1985 年针对艾滋病病毒(HIV)抗体的诊断试剂问世，经过不断的改进已经发展至第四代，诊断试剂的敏感性和特异性不断提高［3］。涉及的检测方法主要为HIV 抗体检测、HIV 抗原抗体联合检测、HIV 核酸检测等［4］，HIV 检测的窗口问题依然是技术人员面临的难题，也是HIV 早期诊断的难题［5］。第三代试剂使用ELISA 检测，敏感性和特异性较第一代和第二代有所提高，由于抗体的产生需要有一定的过程，无法检测到抗体产生前的早期HIV 感染［6］。第四代试剂盒在第三代的基础上，可以同时检测抗体和P24 抗原，大大缩短了窗口期，检测时间较第三代诊断试剂提前了8～10 d［7］。但是不同的公司的诊断试剂的灵敏度和特异性是否存在差别，选择合适的诊断试剂对患者至关重要。

目前市场上第四代检测试剂主要由法国BioMerieux 公司、美国Abbott 公司、荷兰Organon 公司等生产，在本研究中分别使用英国Abbott 公司生产的Murex HIV Ag/Ab 检测试剂和荷兰Organon 公司Vironostika HIV Uni-FormⅡAg/Ab 检测试剂对血清样本进行检测，结果显示3 863 份血清样本，A 试剂、B 试剂和P24 抗原检测都检出了54 份阳性血清样本，A、B 试剂盒检测的灵敏度都是100%，显示第四代试剂灵敏度很高，可能原因为:第四代试剂不是抗原和抗体检测的简单相加，而是将HIV-1/2 抗体检测和P24 抗原检测两个反应集于一个微孔内同时反应，使得一次实验可以检测两种标志物，同时在P24 抗原检测系统中加入了生物素-链亲和素放大系统，使得ELISA 的反应灵敏度进一步加大，同时不影响P24 抗原的检测［8］。本研究中显示B 试剂的漏诊率为0.63%，高于A 试剂的漏诊率0.39%，但是两者比较差异没有统计学意义，这种情况可能与第四代试剂盒本身将两种检测中和在一个实验中的设计有关，同一个实验结合两类不同的成分，比单独检测抗原或者抗体增加了非特异反应的潜在风险，从而影响了检测的特异性，不同的公司对抗原-抗体两种成分的结合可能存在不同，导致两者检测结果的差异［9］。

HIV 阳转血清盘是评价HIV 早期感染检测方法的有效工具，可以反映各种试剂检测的窗口期［10］。本研究结果显示第四代试剂盒A、B 的窗口期较第三代试剂盒明显缩短，却较P24 抗原检测延迟4.25～6.0 d，因此说明对于HIV 患者的早期诊断，第四代试剂盒可以检测到艾滋病毒的早期感染，虽然二者没有显著的差异，A 试剂的窗口期较B 试剂的窗口期短，可能A 试剂的检测效果较好。

综上所述，采用第四代HIV 检测试剂盒对早期HIV 感染进行诊断是行之有效的策略，但是随着艾滋病疫情的蔓延，处于感染早期的被检者将增多，若此类病例漏检，将会因为得不到及时的管理而造成二代传播，因此使用检测效果好的第四代试剂同时对检测阴性的患者进行免疫印迹确认是防止漏检的重要策略。

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