CD68+、CD163+巨噬细胞对食管癌浸润及预后的影响

张志斌,朱 艳,席俊峰

(陕西省榆林市第一医院,陕西 榆林 719000)

CD68+、CD163+巨噬细胞对食管癌浸润及预后的影响

张志斌,朱 艳,席俊峰

(陕西省榆林市第一医院,陕西 榆林 719000)

目的 探讨CD68+、CD163+巨噬细胞对食管癌浸润及预后的影响。方法 收集手术切除的食管癌组织标本84例、食管癌旁组织标本49例，采用免疫组化法检测组织标本中CD68+、CD163+巨噬细胞浸润密度，并对患者预后进行分析。结果 食管癌组织中CD68+、CD163+巨噬细胞浸润密度每视野(35.69±14.50)个和(29.78±12.36)个，中位数分别为32.8个和27.1个；癌旁正常组织中CD68+、CD163+巨噬细胞浸润密度每视野(4.26±2.30)个和(2.33±1.71)个，中位数分别为3.4个和2.2个。 食管癌组织中CD68+、CD163+巨噬细胞浸润密度明显高于癌旁正常组织(P均<0.05)。 TNMⅢ期者、有淋巴结转移者、低分化程度者CD68+、CD163+巨噬细胞浸润密度明显高于TNM Ⅰ～Ⅱ期者、无淋巴结转移者、高中分化程度者(P均<0.05)；患者术后1年、3年、5年生存率分别为83%，67%，46%，中位生存时间为44.21个月。Spearman相关分析显示，CD68+、CD163+巨噬细胞浸润密度与患者生存时间呈现负相关性(P<0.05)；多因素Cox回归分析TNM分期、淋巴结转移、分化程度、CD163+巨噬细胞浸润密度是影响患者预后的独立危险因素(P均<0.05)。结论 食管癌患者局部病灶组织中CD68+、CD163+巨噬细胞浸润密度明显增高，CD163+巨噬细胞浸润密度增高是影响患者预后的独立因素。

食管癌；CD68+巨噬细胞；CD163+巨噬细胞；浸润；预后

在肿瘤组织及其周围浸润的巨噬细胞被称为肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages，TAMs)，此类巨噬细胞的浸润多少与胃癌等肿瘤的预后关系密切[1-2]，可能是通过影响淋巴管生成及血管生成等环节影响肿瘤的预后[3]。目前研究显示CD68+、CD163+巨噬细胞在胃癌、乳腺癌、平滑肌肉瘤等恶性肿瘤中浸润密度对患者预后存在一定影响，可作为预测以上恶性肿瘤疾病进展、转移及复发的预测因子[4-5]，但是关于CD68+、CD163+巨噬细胞对食管癌浸润及预后影响的研究相对较少。为探讨CD68+、CD163+巨噬细胞对食管癌浸润及预后的影响，笔者对我院近年来收治的食管癌手术患者肿瘤组织标本及癌旁组织标本中CD68+、CD163+巨噬细胞的浸润情况进行了检测，并对患者预后进行了追踪随访，现将结果报道如下。

1 临床资料

1.1一般资料 收集我院2008年1月—2011年12月手术切除的食管癌组织标本84例，食管癌旁组织标本49例。患者均病理证实为原发性食管癌，在术前未接受过任何化疗、放疗等治疗，未合并有甲状腺功能亢进、类风湿、糖尿病等疾病，有随访条件且依从性较好。排除妊娠期及哺乳期妇女。入选食管癌组织标本病例中男53例，女31例；年龄42～91(63.49±8.33)岁；TNM分期Ⅰ期6例，Ⅱ期54例,Ⅲ期24例；鳞癌82例,腺癌2例；高分化20例,中分化25例,低分化39例；有淋巴结转移36例,无淋巴结转移48例。

1.2所用试剂 检测试剂包括DAB显色试剂盒、PV-9000试剂盒、鼠抗人CD68单克隆抗体、鼠抗人CD163单克隆抗体，均购自北京中杉金桥生物技术公司。

1.3实验方法 在术中取得食管癌病灶组织标本、癌旁组织标本，立即采用10%甲醛溶液进行固定，送病理实验室进行常规石蜡包埋，切片机连续切片，切片厚度为4 μm。CD68+、CD163+表达检测方法采用免疫组化染色法，检测操作流程严格按照试剂盒说明进行，所用阳性对照为已知的食管癌阳性组织切片，PBS取代一抗作为阴性对照。

1.4结果判读标准 由2位主治医生资格病理医生进行读片，在细胞质内出现黄褐色或棕褐色颗粒即为CD68+、CD163+巨噬细胞浸润，对5个不重叠的间质及癌巢在高倍视野下进行观察，并对阳性细胞进行计数。

1.5随访 从患者术后出院起开始随访，主要采用为门诊及电话随访，随访截止时间为2013年12月或死亡，生存时间为患者手术之日起到最后随访时间或死亡时间，死亡不包括意外死亡者。

1.6统计学方法 采用SPSS 17.0统计学软件进行统计分析，计数资料采用卡方检验，计量资料采用t检验，进行Spearman相关分析及多因素Cox回归分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1CD68+、CD163+巨噬细胞浸润密度 食管癌组织中CD68+、CD163+巨噬细胞浸润密度明显高于癌旁正常组织中浸润密度，食管癌组织中CD68+、CD163+巨噬细胞浸润密度每视野为(35.69±14.50)个和(29.78±12.36)个，中位数分别为32.8个和27.1个；癌旁正常组织中CD68+、CD163+巨噬细胞浸润密度每视野为(4.26±2.30)个和(2.33±1.71)个，中位数分别为3.4个和2.2个。食管癌组织中CD68+、CD163+巨噬细胞浸润密度明显高于癌旁正常组织中浸润密度(t=15.04，t=15.44，P均<0.05)。

2.2不同临床病理特征时CD68+、CD163+巨噬细胞浸润密度 TNM Ⅲ期者、有淋巴结转移者、低分化程度者CD68+、CD163+巨噬细胞浸润密度明显高于TNM Ⅰ～Ⅱ期者、无淋巴结转移者、高中分化程度者(P均<0.05)，不同性别、年龄、分型、分化程度患者CD68+、CD163+巨噬细胞浸润密度比较差异无统计学意义(P均>0.05)。见表1。

表1 不同临床病理特征时CD68+、CD163+巨噬细胞浸润密度比较±s，个)

2.3患者随访时间及生存率 84例患者随访时间最长58个月，最短22个月，平均48.23个月。患者生存时间3～58个月，中位生存时间44.21个月。患者1年、3年、5年失访人数分别为2例、6例、11例，死亡人数分别为12例、22例、34例;1年、3年、5年生存率分别为83%(70/84)、67%(56/84)和46%(39/84)。

2.4CD68+、CD163+巨噬细胞浸润密度与生存时间的相关性 Spearman相关分析结果显示，CD68+、CD163+巨噬细胞浸润密度与患者生存时间呈负相关(r=-0.30，r=-0.35，P均<0.05)。

2.5患者预后的多因素影响因素分析 以患者TNM分期、淋巴结转移、分化程度及CD68+、CD163+巨噬细胞浸润密度为自变量，以患者死亡为因变量，多因素Cox回归分析结果显示TNM分期、淋巴结转移、分化程度、CD163+巨噬细胞浸润密度是影响患者预后的独立危险因素(P<0.05)。见表2。

表2 食管癌患者预后的多因素影响因素分析

3 讨 论

肿瘤在发展过程中有炎细胞浸润现象存在，巨噬细胞是主要浸润炎性细胞，肿瘤相关巨噬细胞的浸润被认为与抗肿瘤免疫反应有关，胃癌、口腔癌等恶性肿瘤组织中高水平的巨噬细胞浸润均影响到患者预后[2-3，6]，因而近年来各种肿瘤组织中肿瘤相关巨噬细胞浸润的研究成为临床研究热点。

巨噬细胞包括经典活化巨噬细胞与替代性活化巨噬细胞。研究发现在不同的微环境下巨噬细胞会发生不同变化，如果微环境中细菌产物或肿瘤坏死因子γ等物质刺激会诱导巨噬细胞向经典活化巨噬细胞分化，从而引起白细胞介素-12等物质释放，参与Th1型免疫应答；如果微环境中白细胞介素-10、白细胞介素-4等物质刺激会导致巨噬细胞向替代性活化巨噬细胞分化，此时会诱导白细胞介素-10等释放，参与Th2型免疫应答，无论是经典活化巨噬细胞还是替代性活化巨噬细胞均会影响到肿瘤的浸润及转移过程[7-10]。CD68+、CD163+巨噬细胞分别属于经典活化巨噬细胞、替代性活化巨噬细胞，本研究结果显示在食管癌组织中CD68+、CD163+巨噬细胞浸润密度均明显高于癌旁正常组织，证实食管癌组织中存在肿瘤相关巨噬细胞的浸润；将患者不同病理特征时CD68+、CD163+巨噬细胞浸润密度进行分析，结果显示TNM Ⅲ期者、有淋巴结转移者、低分化程度者CD68+、CD163+巨噬细胞浸润密度明显高于TNM Ⅰ～Ⅱ期者、无淋巴结转移者、高中分化程度者，并且多因素分析结果显示TNM分期、淋巴结转移、分化程度、CD163+巨噬细胞浸润密度是影响患者预后的独立危险因素，Spearman相关分析结果也显示CD68+、CD163+巨噬细胞浸润密度与患者生存时间呈负相关，表明CD163+巨噬细胞浸润密度对食管癌患者预后有影响，与文献[11-12]研究结果一致。CD68+巨噬细胞浸润密度对患者的预后的影响尚不能完全肯定，但是临床大多数研究认为CD68+巨噬细胞浸润对实体肿瘤预后有影响[13-15]，因而CD68+巨噬细胞浸润对预后的影响尚需要进一步研究。

综上所述，食管癌患者局部病灶组织中CD68+、CD163+巨噬细胞浸润密度明显增高，CD163+巨噬细胞浸润密度增高是影响患者预后的独立因素。

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Influence of CD68+and CD163+macrophages on the infiltration of esophageal carcinoma and its prognosis

ZHANG Zhibin, ZHU Yan, XI Junfeng

(The First Hospital of Yulin City, Yulin 719000, Shaanxi, China)

Objective It is to approach the influence of CD68+, CD163+macrophage on the infiltration of esophageal cancer and its prognosis. Methods 84 cases of specimens of esophageal carcinoma in resection operation and 49 cases of esophageal paracancerous tissues were collected, the infiltration density of CD68+, CD163+macrophage in the specimens were detected by immunohistochemistry method, and the prognosis of the patients were analyzed. Results The every field mean density of CD68+, CD163+macrophages infiltrating in esophageal cancer tissue was 35.69±14.50 and 29.78±12.36 respectively, the median was 32.8 and 27.1. The results in paracancerous tissues was 4.26±2.30 and 2.33±1.71, the median was 3.4 and 2.2 respectively, the median was 32.8 and 27.1. The infiltration density of CD68+and CD163+macrophage in esophageal cancer tissue was significantly higher than that in paracancerous tissues (allP<0.05). The infiltration density of CD68+, CD163+macrophage with TNM Ⅲ stages, lymph node metastasis, or low differentiation degree, was significantly higher than that with TNM stage Ⅰ to Ⅱ, without lymph node metastasis, and high differentiation degree (allP<0.05). The survival rates after operation of 1 year, 3 years, 5 years were 83%, 67% and 46%, the median survival time was 44.21 months. Spearman correlation analysis showed that there was negative correlation between the infiltration density of CD68+, CD163+macrophage and the survival time of patients (P<0.05); multivariate Cox regression analysis showed that the TNM stage, lymph node metastasis, differentiation, CD163+macrophage infiltration density affects the prognosis of patients with independent risk factors ( allP<0.05). Conclusion The CD68+, CD163+macrophage infiltration density in local lesion tissue of patients with esophageal cancer are increased significantly, the increase of CD163+macrophages infiltration density is an independent factor to influence the prognostic.

macrophages; infiltration; prognosis; esophageal carcinoma

张志斌，男，主治医师，研究方向为食管癌综合治疗。

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.06.007

R735.1

A

1008-8849(2015)06-0590-03

2013-05-10