不同试剂参数下CA-1500血凝仪检测血浆D-二聚体结果的可比性研究

徐正良，李亚山，李德璇，刘光彩，沈 乾

(云南省第三人民医院/大理学院昆明附属医院检验科，昆明 650031)



·论 著·

不同试剂参数下CA-1500血凝仪检测血浆D-二聚体结果的可比性研究

徐正良，李亚山，李德璇△，刘光彩，沈 乾

(云南省第三人民医院/大理学院昆明附属医院检验科，昆明 650031)

目的 比较不同试剂参数下CA-1500血凝仪检测血浆D-二聚体(DD)结果的可比性。方法 依据美国临床实验室标准化委员会(CLSI)颁布的EP9-A2文件，在CA-1500血凝仪上修改DD-Innovance试剂参数，比较修改参数前后的血浆DD检测值，评价二者的可比性。结果 以参数修改前所测DD结果为X，参数修改后所测DD结果为Y，对结果进行回归分析，所得方程为Y=0.959 7X+0.046 5，r=0.998，修改参数前后的DD检测结果具有可比性。结论 在保证仪器检测质量的前提下，可以通过调整检测系统的检测参数，缩减试剂用量，节约分析成本。

D-二聚体； 定量检测； 试剂参数

血浆D-二聚体(DD)是纤维蛋白原经凝血酶降解为纤维蛋白单体，然后经活化因子交联后，再经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物，是一个特异性的纤溶过程标记物。采用血浆DD定量测定对深静脉血栓和肺栓塞的排除，弥散性血管内凝血(DIC)的诊断和溶栓疗效监测是一个很好的评价指标，但是目前常用的检测试剂为原装进口的DD-Innovance试剂，价格比较昂贵，限制了该项目在云南地区的开展。本文从节约试剂成本的角度出发，按照美国临床实验室标准化委员会(CLSI)EP9-A2文件的要求[1]，比较DD-Innovance试剂参数修改前后的血浆DD检测结果，以探索是否可以在保证仪器检测结果的前提下，通过调整检测系统的检测参数，减少试剂用量，实现节约试剂成本的目的。

1 资料与方法

1.1 一般资料 每日收集本院住院患者枸橼酸钠抗凝(1∶9)血标本8份，连续收集5 d共40例，其中男24例，女16例，平均56.7岁。标本要求抗凝比例符合要求(标本量不少于2.7 mL或多于3.3 mL),尽量避免标本溶血、脂血和黄疸。标本采集后尽快离心，并在4 h内测试完毕[2]。

1.2 仪器与试剂 仪器为日本希森美康生产的CA-1500血凝仪。血浆DD检测试剂为德国西门子医疗诊断公司生产的DD-Innovance试剂，包括：乳胶试剂4.0 mL×6瓶/盒；稀释液5.0 mL×6瓶/盒；缓冲液5.0 mL×6瓶/盒；封闭液2.6 mL×6瓶/盒。质控物和校准品均为检测试剂原装配套。

1.3 方法

1.3.1 试验前的准备 为保证结果的准确性和可重复性，要求室温在18～24 ℃[2]，湿度低于80%。试验前对CA-1500血凝仪进行日常维护保养。

1.3.2 未修改参数前血浆DD定量检测 按照试剂说明书设置DD检测的各项试剂参数：乳胶试剂56 μL，稀释液32 μL，缓冲液60 μL，封闭液24 μL，标本用量16 μL。设置好试剂及标本用量参数后，按照要求进行定标和质控，然后选取8份不同DD浓度水平的患者血浆按照CA-1500血凝仪操作流程分别按1～8和8～1的顺序各测定1次。按照上述操作持续检测5 d，共测试40例标本。如果按照上述试剂说明书的用量操作则理论上每盒试剂可以做426次测试。

1.3.3 修改参数后血浆DD定量检测 在CA-1500血凝仪上把各试剂用量设为:乳胶试剂48 μL，稀释液27 μL，缓冲液53 μL，封闭液21 μL，标本用量为14 μL。设置完试剂及标本用量后，按照1.3.2标本处理要求同样测试上述40例标本。如果按照修改参数后的试剂用量操作则理论上每盒试剂可以做500次测试。

1.4 统计学处理 采用SPSS17.0统计软件对数据进行处理，以参数修改前所测结果为X，参数修改后所测结果为Y进行相关性分析和回归分析，r≥0.975或r2≥0.95则认为Y的取值范围合适，相关性较好，数据满足临床要求，则说明Y值是可接受的。另外采用配对t检验分析截距a与0是否存在统计学差异，如无统计学意义差异，且斜率b在1±0.05范围内，则说明在某一定浓度范围内二者是呈线性关系的。

2 结 果

以参数修改前所测DD结果为X，参数修改后所测结果为Y，回归方程为：Y=0.959 7X+0.046 5，r=0.998，见图1。r>0.975，截距a=0.046 5，经配对t检验，截距a与0差异无统计学意义(t=0.149，P>0.05)，斜率b=0.959 7，在1±0.05范围内。说明在线性范围0～10 mg/L内，修改试剂参数前后，CA-1500血凝仪检测DD的结果具有可比性。

图1 修改参数前后DD检测结果的相关性

3 讨 论

早在1972年Gaffney首先提出了DD检测。1983年Rylatt等首先报道了用单克隆抗体DD-386/22检测DD。20世纪90年代，酶联免疫吸附试验、乳胶增强型免疫分析法等开始逐步应用于DD检测。直到20世纪90年代末，免疫比浊法在血凝仪上才实现了自动化，从而实现了快速、单样本、定量、高敏感性的DD检测。但目前尚无统一的DD检测国际标准，不同厂家生产的检测试剂所含的单克隆抗体不同，所检测的DD片段也不同。目前市售的DD检测试剂涉及20多种单克隆抗体，检测方法有30多种，尚无统一的国际标准品[5]。由于不同品牌检测试剂中的单克隆抗体是针对不同相对分子质量的纤维蛋白降解片段制备的，因此不同试剂间DD检测结果差异显著，可比性较低。本实验室所用的试剂为DD-Innovance试剂，仪器为CA-1500血凝分析仪，本研究中的试剂参数仅限用于CA-1500血凝分析仪上设置的DD线性范围内(0～10 mg/L)使用，对于超出线性范围时，两种参数下DD检测结果是否具有相关性，还有待进一步验证。

[1]CLSI.EP9-A2 Method comparison and bias estimation using patient samples;Approved guideline[S].Wayne,PA:CLSI,2002.

[2]彭明婷,李臣宾.出凝血检验卫生行业标准与质量改进[J].检验医学,2015,30(4):308-310.

[3]徐正良,李德璇,刘光彩,等.用SysmexCA-7000 血凝仪测量血浆 D-二聚体全量法与减量法的比较[J].国际检验医学杂志,2013,34(3):344-346.

[4]Haas FJLM,Schutgens REG,Biesma DH.An age-adapted approach for the use of D-dimers in the exclusion of deep venous thrombosis[J].Am J Hematol,2009,84(8):488-491.

[5]门剑龙,任静.D-二聚体临床应用及标准化分析进展[J].中华检验医学杂志,2010,33(8):793-797.

Study on comparability of results of Sysmex CA-1500 coagulation analyzer for detecting plasma D-dimer with different reagent parameters

XUZheng-liang,LIYa-shan,LIDe-xuan△,LIUGuang-cai,SHENQian

(DepartmentofClinicalLaboratory,YunnanProvincialThirdPeople′sHospital/AffiliatedKunmingHospitalofDaliUniversity,Kunming,Yunnan650031,China)

Objective To compare the comparability of the Sysmex CA-1500 coagulation analyzer for detecting plasma D-dimer(DD) under different reagent parameters.Methods According to the EP9-A2 file issued by CLSI,the DD-Innovance reagent parameters were modified in the Sysmex CA-1500 blood coagulation analyzer.The detection values were compared between before and after modification for evaluating their comparability.Results With the DD detection results before the parameter modification asXand which after the parameter modification asY,the detection results were performed the regression analysis,the obtained equation wasY=0.959 7X+0.046 5,r=0.998,showing that the DD detection results had the comparability between before and after the parameter modification.Conclusion Under the premise of ensuring the instrument detection quality,adjusting the detection parameter of the detection system can reduce the reagent consumption and save the analytical costs.

D-dimer; quantitative detection; reagent parameters

徐正良，男，本科，主管技师，主要从事临床检验研究。

△通讯作者，E-mail:147347278@qq.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.19.019

A

1672-9455(2015)19-2861-02

2015-03-20

2015-06-25)