双波长HPLC法测定益心舒胶囊中4种成分的含量Δ

2015-03-09王绍志张熙洁付连浩刘晓红唐山市工人医院河北唐山063000

中国药房 2015年27期

王绍志，张熙洁，付连浩，刘晓红（唐山市工人医院，河北唐山 063000）

益心舒胶囊是由人参、麦冬、五味子、黄芪、丹参、川芎、山楂等七味中药组成的复方制剂，该制剂组方以生脉饮方为基础，增加了黄芪、丹参、川芎、山楂四味药，提高了益气复脉、养阴生津的功效，增加了活血化瘀的作用。因此，药理作用较生脉饮方更胜一筹，是目前治疗缺血性心血管疾病、心律失常及抗休克的中成药。该药已收录于2010年版《中国药典》（一部）成方制剂部分[1]，目前其质控定量标准已有采用高效液相色谱（HPLC）法测定1～3种成分[2-8]，以及对益心舒片的脂溶性成分测定[9-10]的报道。为更好地控制本制剂内在质量，笔者参考了相关文献[11-12]，采用双波长HPLC-二极管阵列检测（DAD）法，建立了测定益心舒胶囊中4 种水溶性有效成分（丹参素、原儿茶醛、阿魏酸、丹酚酸B）的定量分析方法，并对3 个批次药品进行含量测定。

1 材料

1200 系列HPLC 仪，包括G1315D DAD 器、G1311A 四元泵、G1329A 自动进样器、G1316A 柱温箱、G1322A 脱气机、化学工作站B.03.02版（美国Agilent公司）；细胞型1810D摩尔纯水机（上海摩勒科学仪器有限公司）；CP225D 型电子天平（德国Sartorius 公司）；80-2 型离心沉淀机（上海手术器械厂）；FS-150N型超声波处理器（上海生析超声仪器有限公司）。

益心舒胶囊（贵州信邦制药股份有限公司，批号：20120211、20121110、20121209，规格：0.4 g×36 粒/盒）；丹参素、原儿茶醛、阿魏酸、丹酚酸B对照品（均购于中国食品药品检定研究院，批号分别为110855-200507、110810-200205、0773-9910、111562-201212，纯度均为100%）；甲醇、乙腈均为色谱纯，甲酸、冰醋酸、磷酸均为分析纯，水为超纯水（摩尔纯水机自制）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Eclipse XDB-C18（150 mm ×4.6 mm，5μm）；流动相：0.5%磷酸水溶液（A）-甲醇（B）-乙腈（C），梯度洗脱（洗脱程序详见表1）；流速：1.0 ml/min；检测波长：280 nm（丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B）、320 nm（阿魏酸）；柱温：30 ℃；进样量：10 μl。

2.2 溶液的制备

表1 梯度洗脱程序Tab 1 Gradient elution program

2.2.1 混合对照品溶液分别精密称取丹参素、原儿茶醛、阿魏酸、丹酚酸B对照品适量，置于同一10 ml量瓶中，用75%甲醇溶解定容，经0.45 μm 有机膜滤过，即得含各成分质量浓度分别为0.212、0.35、0.2、3 mg/ml的混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液取益心舒胶囊约0.3 g，精密称定，置于10 ml 量瓶中，加75%甲醇稀释至刻度，超声（功率：80 W，频率：20 kHz）处理30 min 后，冷却，再用75%甲醇补足减失的质量，以半径为5 cm、3 500 r/min 离心10 min，吸取上清液，经0.45 μm有机膜滤过，即得供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液按益心舒胶囊组方工艺分别制成不含丹参、川芎的两种阴性对照制剂，再按“2.2.2”项下方法制成阴性对照溶液，即得。

2.3 专属性试验

分别取“2.2”项下混合对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μl，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱，详见图1。由图1可见，丹参素、原儿茶醛、阿魏酸、丹酚酸B峰形良好，保留时间分别在8、12、31、40 min 左右，理论板数均大于10 000，与其相邻色谱峰分离度均大于1.5。对阴性对照溶液进样分析，将所得色谱图与供试品图进行比较，发现阴性对照溶液对所测组分的测定无干扰。

2.4 线性关系考察

精密量取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量，用75%甲醇溶液倍比稀释成系列混合对照品标准溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以质量浓度（x，μg/ml）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，回归方程和线性范围详见表2。

2.5 最低检测限

取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量，逐倍稀释，精密吸取10 μl，按“2.1”项下色谱条件进样测定，以信噪比为3计算丹参素、原儿茶醛、阿魏酸、丹酚酸B 的最低检测限分别为1.06、0.10、0.03、150 ng/ml。

2.6 精密度试验

取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量，按“2.1”项下色谱条件连续测定6 次，记录峰面积。结果，丹参素、原儿茶醛、阿魏酸、丹酚酸B 峰面积的RSD 分别为0.74%、1.70%、0.85%、1.50%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验

取供试品溶液（批号：20120211）适量，分别于放置1、2、4、8、10、12 h 时按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，丹参素、原儿茶醛、阿魏酸、丹酚酸B 峰面积的RSD 分别为0.97%、0.89%、1.30%、1.60%（n＝6），表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.8 重复性试验

图1 高效液相色谱图A.混合对照品；B.供试品；C.缺丹参的阴性对照品；D.缺川芎的阴性对照品；1.丹参素；2.原儿茶醛；3.阿魏酸；4.丹酚酸BFig 1 HPLC chromatogramsA.mixed reference substance；B.test sample；C.negative sample without Salvia miltiorrhiza；D.negative sample without Ligusticum chuanxiong；1.tanshinol；2.protocatechuic aldehyde；3.ferulic acid；4.salvianolic acid B

表2 回归方程和线性范围Tab 2 Regression equations and linear ranges

取同一批样品（批号：20120211）6 份，每份约0.3 g，精密称定，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，丹参素、原儿茶醛、阿魏酸、丹酚酸B 峰面积的RSD 分别为1.10%、1.30%、0.82%、1.90%（n＝6），表明本方法重复性良好。