紫外分光光度法测定枇芩颗粒剂中总黄酮含量

王庆芬，倪晓霞，刘晓玲，高惠真

（中国人民解放军第一七五医院·厦门大学附属东南医院制剂科，福建 漳州 363000）

紫外分光光度法测定枇芩颗粒剂中总黄酮含量

王庆芬，倪晓霞，刘晓玲，高惠真

（中国人民解放军第一七五医院·厦门大学附属东南医院制剂科，福建 漳州 363000）

目的 建立测定枇芩颗粒剂中总黄酮含量的紫外分光光度法。方法 以芦丁为对照品，采用70%的乙醇溶液加热回流提取总黄酮，于509 nm波长处测定总黄酮含量。结果 芦丁质量浓度在12.72～76.32 mg/L范围内与吸光度有良好的线性关系，回归方程为A=0.019 C+0.010 7（r=0.999 5）。结论 该法操作简便、结果可靠，可为枇芩颗粒剂的质量控制提供依据。

枇芩颗粒剂；紫外分光光度法；总黄酮；含量

枇芩颗粒剂是我院自制中药复方制剂，由枇杷叶、黄芩、白花 蛇舌草等13味中药组方，君药黄芩中的黄芩苷、黄芩素[1]，白花蛇舌草中的山柰酚、槲皮素等均为黄酮类化合物[2]。黄酮类化合物具有抗氧化、抗菌、抗炎、解热等作用。现代药理研究表明，白花蛇舌草含有的总黄酮具有抗肿瘤、抗菌、抗炎、增强免疫力等作用，是一类极具开发价值的天然活性物质[3]。茵陈中的色原酮类、黄酮类、香豆酸及挥发油等具清热利湿、利胆退黄之功效，在体外对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用，对痢疾杆菌、溶血性链球菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、脑膜炎双球菌等有不同程度的抑制作用[4]。因此，黄酮类化合物一直备受关注。本试验中建立了紫外分光光度法用于测定枇芩颗粒剂中总黄酮的含量，为其质量控制提供了依据。

1 仪器与试药

UV-2550微机型紫外分光光度计（日本岛津公司）；AUX220型电子分析天平（日本岛津公司）；HH-2型数显恒温水浴锅（江苏省金坛市江南仪器厂）。芦丁对照品（批号为100080-200707，中国食品药品检定研究院）；95%乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等试剂均为分析纯。

2 方法与结果[5]

2.1 溶液制备

精密称取芦丁对照品 0.015 9 g，加65%乙醇溶解（少量多次），定容至50 mL容量瓶中，摇匀，得对照品溶液（芦丁含量为0.318 g/L）[6]。精密称取枇芩颗粒剂5.0 g，以适量70%乙醇回流提取2 h，冷却过滤，收集滤液，定容于100 mL容量瓶中[7]，得供试品溶液。

2.2 测定波长选择

取适量的芦丁对照品与供试品溶液，分别置25 mL容量瓶中，加65%乙醇至10.0 mL，再加入5%亚硝酸钠溶液0.8 mL，摇匀，放置6 min，再加入10%硝酸铝溶液0.8 mL，摇匀，放置8 min，加入4%氢氧化钠溶液8.0 mL，用蒸馏水定容至刻度，摇匀放置15 min显色，以65%乙醇为空白，立即测定，在300～600 nm波长范围内扫描[8]。结果对照品溶液与供试品溶液在509 nm均有最大吸收，故选择509 nm为测定波长。色谱图见图1。

图1 紫外吸收光谱图

2.3 方法学考察

线性关系考察：精密量取芦丁对照品溶液 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL，分别置25 mL容量瓶中，加65%乙醇至10.0 mL，加入5%亚硝酸钠溶液0.8 mL，摇匀，放置6 min，再加入10%硝酸铝溶液0.8 mL，摇匀，放置8 min，加入4%氢氧化钠溶液8.0 mL，用蒸馏水定容至刻度，摇匀放置15 mim，以相应试剂为空白，在509 nm波长处测定吸光度（A）[9]。以 A为纵坐标、质量浓度（C）为横坐标，得回归方程 A=0.019 C+0.010 7(r=0.999 5)。结果表明，芦丁质量浓度在12.72～76.32 mg/L范围内与吸光度线性关系良好。

精密度试验：精密量取对照品溶液 1 mL，置 25 mL容量瓶中，依法操作，并以相应试剂为空白，连续5次。结果测得质量浓度分别为31.571，31.668，31.713，31.696，31.997 mg/L，RSD为0.502%（n=5），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液(批号为140220)，按拟订方法分别于0，10，20，30，40，50，60 min时测定吸光度。结果分别为31.835，31.537，31.185，31.712，31.407，31.066，31.918 mg/L，RSD为1.082%（n=7），表明供试品溶液在60 min内稳定性良好。

重复性试验：精密称取同一批样品（批号为140220）5份，每份5.0 g，按供试品溶液制备方法平行制备，依法测定。结果分别为31.536，31.725，31.085，31.642，31.545 mg/L，RSD为 0.79%（n=5），表明该方法重复性良好。

加样回收试验：精密吸取已知含量的芦丁对照品溶液1 mL (0.318 g/L)，分别加入9份各0.5 mL已知含量的供试品溶液中(批号为140220)，按供试品溶液制备方法制备，依法操作。结果见表1。

表1 芦丁加样回收试验结果（n=9）

2.4 样品含量测定

精密称取3批样品各5 g，依法制备供试品溶液并测定吸光度，计算总黄酮的含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

枇芩颗粒剂处方涉及中药材组分众多，有效成分复杂。黄酮类药是该制剂的主要有效成分之一，且处方中多味中药含有黄酮成分，因此需对总黄酮进行质量控制，确保药品的质量。

本试验中采用紫外分光光度法测定枇芩颗粒剂中总黄酮的含量，采用比色法，即向供试品溶液中加入显色剂后测定吸光度以测定其含量[10-11]。黄酮类化合物分子中具有3-羟基、5-羟基或邻二酚羟基，易与金属盐类如铝盐、锆盐、镁盐等反应，生成有色金属络合物，这些络合物作用在光谱上能产生明显变化，如吸收峰红移，常用金属试剂为硝酸铝溶液。芦丁为黄酮苷，能与铝离子生成黄色配合物，在亚硝酸钠碱性溶液中呈红色，在509 nm波长处有最大吸收，故本试验中试剂为亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠溶液[12]。以芦丁为对照品，测出总黄酮含量较稳定，此法简便、准确、灵敏度高，可为枇芩颗粒剂的质量控制提供参考。

本试验中，枇芩颗粒剂的总黄酮溶液提取采用70%的乙醇溶液回流2 h再过滤，试验过程时曾与等处方枇芩溶液等量时测得的总黄酮收得率无明显差别，表明此方法提取完全。

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Determination of Total Flavonoids from Piqin Granules by UV Spectrophotometry

Wang Qingfen,Ni Xiaoxia,Liu Xiaoling,Gao Huizhen (Department of Pharmacy,175 Hospital of PLA/Affiliated Southeast Hospital of Xiamen University,Zhangzhou,Fujian,China 363000)

Objective To establish a UV spectrophotometry method for determining the content of total flavonoids from Piqin Granules.M ethods With rutin as the reference substance,total flavonoids were extracted from Piqin Granules by the 70% ethanol solution heating reflux extraction.Then,the content of total flavonoids was detected at 509 nm by UV Spectrophotometry.Results The rutin mass concentration in the range of 12.72-76.32 mg/L showed the good linear relationship with absorbancy.The regression equation wasA=0.019 C+0.010 7(r=0.999 5).Conclusion This method is simple to operate and reliable in the detection results,and can provide the basis for the quality control of Piqin Granules.

Piqin Granules;UV Spectrophotometry;total flavonoids;content

王庆芬，大学本科，主管药师，主要从事医院制剂检验，（电子信箱）wqf0596＠163.com。

2014-10-28)

医院青年苗圃基金资助项目，项目编号:13Y016。

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)13-0031-03