鼻息肉组织Th细胞分化诱导因子IL-12 和IL-4的表达及临床意义

王 艳张 健.吉林省吉林市人民医院耳鼻咽喉科，吉林吉林300；.吉林省吉林市中心医院胸外乳腺甲状腺科，吉林吉林30

鼻息肉组织Th细胞分化诱导因子IL-12 和IL-4的表达及临床意义

王 艳1张 健2
1.吉林省吉林市人民医院耳鼻咽喉科，吉林吉林132001；2.吉林省吉林市中心医院胸外乳腺甲状腺科，吉林吉林132011

[摘要]目的 分析鼻息肉组织中的Th1与Th2细胞和其分化诱导因子IL-12与IL-4的表达，进一步研究鼻息肉组织的T细胞活化程度和组织免疫状态。 方法 在我院2011年2月～2014年12月鼻息肉患者病例中随机选择41例作为实验组，另选同期行鼻中矫正手术病例41例作为对照组，分析两组患者的Th1与Th2细胞反应的具体特征。 结果 实验组的Th1、Th2辅助细胞平均百分率、IL-12与IL-4水平均高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。鼻息肉病例中，IL-12白细胞介素与Th1辅助细胞平均百分率、IL-4白细胞介素与Th2辅助细胞平均百分率呈正相关关系；IL-12白细胞介素同IL-4白细胞介素呈负相关关系。结论 Th1细胞亚群是鼻息肉组织里的主要细胞群体，感染因素与鼻息肉的发生密切相关；同时由Th2 辅助细胞介导产生的变态反应因素与鼻息肉的发生也有关联。

[关键词]鼻息肉组织；Th细胞；IL-12；IL-4；表达

鼻息肉是鼻科中发病比例较高的疾病，该病可由真菌、细菌和病毒等触发因素引起，其发病机制具有不确定性[1-2]。目前普遍认为炎症细胞与细胞因子是鼻腔局部微环境的重要构成部分，深入研究Th细胞亚群显得尤为重要。本研究分析鼻息肉组织的Th细胞亚群和免疫状态。

1 资料与方法

1.1 一般资料

在我院2011年2月～2014年12月鼻息肉患者病例中随机选择41例为实验组，另选同期行鼻中矫正手术病例41例为对照组。实验患者均符合鼻息肉疾病的鼻镜（包括鼻内镜）和CT分型诊断标准，均采用了病理活检进行确诊，在进行息肉标本采集之前1～2周，全部停止使用抗生素、皮质固醇激素。排除标准为：有哮喘史、慢性鼻窦炎、呼吸系统重疾、全身重疾或对阿司匹林不耐受等情况。对照组纳入标准：无变应性鼻炎、鼻息肉、哮喘、慢性鼻窦炎和全身重大疾病。实验组男30例，女11例，年龄位于15～20岁间17例，21～48岁24例；对照组男32例，女9例，年龄位于15～20岁20例，21～48岁21例。将两组患者的性别、年龄等一般资料做比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 标本采集与处理

全部新鲜标本均置入胎牛血清含量为10%的DMEM培养液里，使用磷酸缓冲液进行反复清洗。将磷酸缓冲液中的标本充分剪碎后，放置在100目尼龙网中轻轻摩擦，并使用260目的镍锌网进行过滤，重悬后置于离心管内，离心半径为8cm，以1200r/min速度进行，操作5min，并使用清洗磷酸缓冲液清洗2～3次备用[3-4]。

取经手术切除的实验组患者的鼻息肉组织和对照组患者的中鼻甲组织作为观察标本，利用生理盐水将标本洗净和擦干后，置于零下80℃环境中低温保存；在检测前待标本经常温熔化恢复常态后，立即使用天平称取1g，并在存放冰水的平皿中剪成碎片，添加1mL的磷酸缓冲溶液后，在玻璃匀浆器中进行充分研磨，离心半径为8cm，以3000r/min速度进行，操作20min，待浆液磨匀后取清液以备检测。

1.3 观察和测定方法

（1）Th1、Th2百分率：集齐全部的标本悬液之后，可开始刺激、培养，进行细胞膜打孔，荧光抗体进行染色标记，全部完成后再上机检测。采用流式细胞仪对Th1、Th2细胞计数统计CD4+细胞内产生的IFN-γ是Th1细胞，产生的IL-4是Th2细胞，并用软件CELL Quest作分析。

（2）IL-12与IL-4：使用ELISA对白细胞介素IL-4 、IL-12进行测定，实验按照试剂盒的说明步骤操作，按照标准曲线对标本匀浆里的IL-4 、IL-12含量（单位：pg/mL）进行推算。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两组的Th1、Th2辅助细胞百分率测定

实验组的Th1、Th2辅助细胞平均百分率均高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1　两组Th1、Th2辅助细胞百分率测定（±s，%）

表1　两组Th1、Th2辅助细胞百分率测定（±s，%）

组别　n　Th1辅助细胞平均百分率　Th2辅助细胞平均百分率实验组　41　56.64±5.87　7.18±0.89对照组　41　20.37±2.14　3.05±0.33 t 9.64　8.72 P ＜0.05　　＜0.05

2.2 两组的IL-12与IL-4表达比较

实验组的IL-12与IL-4水平要高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2　两组患者的IL-12与IL-4表达比较（±s，pg/mL）

表2　两组患者的IL-12与IL-4表达比较（±s，pg/mL）

组别　n　IL-12水平　IL-4水平实验组　41　50.17±4.94　64.52±5.21对照组　41　 8.66±1.15　30.42±2.56 t 11.76　10.64 P ＜0.05　　＜0.05

2.3 相关性分析

IL-12白细胞介素与Th1 辅助细胞平均百分率呈明显的正相关（r=0.900，P＜0.05）；IL-4白细胞介素与Th2 辅助细胞平均百分率呈明显的正相关（r=0.945，P＜0.05）；IL-12白细胞介素同IL-4白细胞介素呈明显的负相关（r=-0.974，P＜0.05）。

3 讨论

尽管目前的研究没有对鼻息肉的发病机制进行明确的说明，但大量的研究表明淋巴细胞在炎性反应中发挥了主要作用，是促进患者鼻息肉形成的重要因素[5-9]。人体的鼻息肉组织存在着大量的T细胞淋巴，CD4+T细胞（即Th辅助细胞）的数量比CD8+细胞的数量要多。根据产生细胞因子分类以及功能划分的结果，Th细胞可分为Th1与Th2细胞，它们的存在，对于临床基础免疫学有着重大意义[10-11]。实验组的Th1、Th2辅助细胞平均百分率、IL-12与IL-4水平均要高于对照组，组间对比具有统计学意义（P＜0.05）。鼻息肉病例中，IL-12白细胞介素与Th1辅助细胞平均百分率、IL-4白细胞介素与Th2辅助细胞平均百分率呈明显的正相关；IL-12白细胞介素同IL-4白细胞介素呈明显的负相关。目前大量的实验结果证明了Th1与Th2细胞可为平衡免疫应答发挥关键性作用，两种细胞的平衡状态直接关系到免疫类疾病的转归。对于正常人的鼻黏膜，Th1与Th2辅助细胞可能刚好保持着平衡状态[12]。

分析实验结果可知，Th1细胞亚群是鼻息肉组织里的主要细胞群体，其Th1细胞亚群比正常的中鼻甲黏膜要高，表示感染因素与鼻息肉的发生密切相关；同时Th2辅助细胞百分率也高于正常的中鼻甲黏膜，表示由Th2 辅助细胞介导产生的变态反应因素与鼻息肉的发生也有关联[13-15]。加强对Th细胞亚群的观察和研究，有助于进一步探讨鼻息肉组织的T细胞活化程度和组织免疫状态，观察Th1与Th2细胞反应的具体特征，并了解鼻息肉组织里的Th细胞亚群及其免疫类型等存在的明显差异。Th1辅助细胞可分泌 IL-2和IFN-γ，对于抵抗细菌、病毒和寄生虫等方面发挥着极其重要的作用；Th1辅助细胞可分泌 IL-4、IL-5、IL-6 与IL- 10，对B细胞增殖有刺激作用，产生抗体，与人体的体液免疫有着密切关系[16-17]。目前已有学者借助流式细胞仪探究发现鼻息肉患者的Th1与Th2细胞均要高于正常人；并且Th1与Th2辅助细胞百分率存在的差别也比较明显，一般情况下，前者百分率要高于后者。还有研究发现关于T细胞亚群，鼻息肉组织同外周血存在着一定的差别，有分析认为鼻息肉组织里的淋巴细胞不仅是由外周血的淋巴细胞迁移而来，而且可能与局部黏膜的免疫系统存在着紧密联系。

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Expression of Th cell differentiation inducing factors IL-12 and IL-4 in nasal polyps and clinical significance

WANG Yan1ZHANG Jian2
1.Department of Otorhinolaryngology, Jilin People's Hospital, Jilin 132001, China; 2.Department of Thoracic External Breast Thyroid, Jilin Central Hospital, Jilin 132011, China

[Abstract]Objective To analyze Th1 and Th2 cells in nasal polyps tissue and expression of differentiation inducing factors IL-12 and IL-4 to further research activation degree and tissue immune status of T cell in nasal polyps tissue. Methods 41 patients with nasal polyps who were admitted to our hospital from February 2011 to December 2014 were randomly selected as the experimental group and 41 patients who were received nasal correction surgery in the same period were set as the control group. Specific characteristics of Th1 and Th2 cells reaction of patients in two groups were analyzed. Results The mean percentage of Th1 and Th2 auxiliary cells, IL-12 and IL-4 levels of the experimental group were higher than those of the control group which had statistical significance when compared (P＜0.05). In cases of nasal polyps, IL-12 interleukin had a positive correlation with the mean percentage of Th1 auxiliary cells. And IL-14 interleukin had a positive correlation with the mean percentage of Th2 auxiliary cells. But IL-12 interleukin had a negative correlation with IL-14 interleukin. Conclusion Th1 cell subsets are main cell population in nasal polyp tissue. Infection factors are closely related to the occurrence of nasal polyps. At the same time, allergic reaction factors mediated by Th2 auxiliary cells have correlation with the occurrence of nasal polyps.

[Key words]Nasal polyp tissue; Th cells; IL-12; IL-4; Expression

收稿日期：（2015-08-09）

[中图分类号]R765.25

[文献标识码]B

[文章编号]2095-0616（2015）20-191-03