通天草水提物对阿尔茨海默病小鼠海马白介素-1β水平的影响

杜 徽，费洪新，张英博，仲丽丽，王晓源，刘 斌，韩玉生，李宝龙，孙 博，丑小月，周忠光

（黑龙江中医药大学，哈尔滨 150040）

阿尔茨海默病(Al z h e i m er's d i s ea s e，A D)是一种临床上常见的老年性疾病，其炎症介质受到了广泛的关注，许多炎症介质例如白介素-6(I L-1β)、肿瘤坏死因子-α(TN F-α)、白介素-8(I L-8)等参与了A D的发生发展过程［1］。本课题组前期研究表明通天草水提物(Aqueous Extract from Waternut Herb，AEWH)具有改善学习记忆功能［2］、降低 A D 大鼠血清 I L-1β 水平［3］。而A EW H对A D小鼠海马I L-1β的研究国内外未见文献报道。基于这些,本实验采用A D小鼠模型为研究对象，观察A EW H对A D小鼠海马I L-1β水平的影响，以期为临床治疗A D提供理论依据。

1 材料

1.1 动物

雄性、7月龄清洁级C57小鼠，体重(23±2)g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK(京2012-0001)。

1.2 药品

AEW H由黑龙江中医药大学周忠光教授购买，田明教授制备成水煎剂、烘干后制备成干粉、-20℃保存于冰箱中备用。实验使用时加热，临时配制成A EW H溶液。吡拉西坦由湖南迪诺制药有限公司生产，批号∶130325。

1.3 仪器

TGL-16G台式离心机：上海安亭科学仪器厂生产；PLZOZ-S型电子天平：梅特勒-托利多仪器有限公司生产；6100型RT-雷杜酶标仪：美国R T公司生产。

1.4 试剂

Aβ1-42：S i g m a公司生产；I L-1β酶联免疫试剂盒：南京建成生物工程研究所生产，批号：20140401；其他试剂均为国产分析纯。

2 方法

2.1 AEWH的提取

实验称取300g通天草放高颈烧瓶中，加5 000m L蒸馏水，搅匀，浸泡2h，煎煮2h，含通天草的药液用干净纱布过滤、拧干，得到第一次滤液。第一次水提物残渣再放入高颈烧瓶中，再加入5 000m L蒸馏水，重复上面的过程，会得到第二次的滤液。合并2次滤液，浓缩，制备成干膏、干粉，-20℃保存备用。

2.2 A D模型的复制

C57小鼠水合氯醛麻醉后，小鼠双侧脑室一次性注入5μL凝聚态Aβ1-42(浓度为80p mol·μL-1)。同时对照组C57小鼠双侧脑室注射等量生理盐水。

2.3 分组

复制A D模型小鼠共24只，随机分为4组，其中模型组6只、吡拉西坦组6只、A EW H高剂量组6只、AEWH低剂量组6只。另设对照组C57小鼠6只。

2.4 给药

选择对照组、模型组给予生理盐水灌胃；吡拉西坦组给予吡拉西坦 0.62g·kg-1·d--1灌胃；A EW H 高剂量组给予 A EW H 2.0g·kg-1·d-1灌胃；A EW H 低剂量组给予 A EW H 0.5g·kg-1·d-1灌胃，灌胃持续时间 18d。

2.5 海马I L-1β的检测

实验结束后冰台上操作，小鼠断头迅速取海马，匀浆，静置 1h，4℃离心机 3 000r o min-1离心 20m in，吸取上清液，分装E P小管中，-20℃低温保存于冰箱中备用。按酶联免疫试剂盒说明书进行操作，450n m波长处测定各孔吸光度(A)，根据标准曲线求出I L-1β的含量。

3 结果

根据标准曲线求出方程：Y=0.002 3 X+0.420 6，R 2=0.874 2，计算出小鼠海马组织IL-1β含量(见图1)。结果表明，与对照组比较，模型组小鼠海马组织I L-1β含量明显升高(P＜0.05)；与模型组比较，吡拉西坦组(0.62g·kg-1·d-1)、A EW H 高剂量组(2.0g·kg-1·d-1)小鼠海马组织I L-1β含量明显降低(P＜0.05)；与模型组比较，A EW H低剂量组 (0.5g·kg-1·d-1)小鼠海马组织I L-1β的含量降低不明显(P＞0.05)(见表1)。

图1 小鼠海马IL-1β的标准曲线Fig.1 Mice hippocampus beta IL-1 standard curve

表1 AEWH对AD小鼠海马IL-1β的影响(±s)Tab.1 AEWH impacton beta ADmice hippocampus IL-1(+s)

4 讨论

采用酶联免疫的方法检测I L-1β的结果表明，与对照组比较，模型组小鼠海马组织I L-1β含量明显升高(P＜0.05)，提示模型组海马组织I L-1β含量明显升高，产生明显的炎症反应，引发A D疾病；与模型组比较，A EW H高剂量组 (2.0g·kg-1·d-1)小鼠海马组织I L-1β含量明显降低(P＜0.05)，说明高剂量的A EW H可通过影响I L-1β的水平改善A D临床症状；而与模型组比较，A EW H 低剂量组(0.5g·kg-1·d-1)小鼠海马组织I L-1β的含量降低不明显 (P＞0.05)，说明低剂量A EW H不可通过影响I L-1β的水平改善A D临床症状。以上综合提示采用A EW H高剂量(2.0g·kg-1·d-1)治疗A D效果较好，A EW H可以通过抑制I L-1β来达到治疗A D的目的。

［1］ 孙博，费洪新，姜波，等.阿尔茨海默病发病机制初探［J］.中医药信息，2014，31（3）：26.

［2］ 魏铁花，李宝龙，刘旭，等.通天草提取物对拟阿尔茨海默氏病模型大鼠学习记忆能力及其海马区组织相关蛋白表达的影响［J］.吉林中医药，2013，33（2）：179-181.

［3］ 邱文兴，贾博宇，刘永武，等.通天草提取物对Aβ1-40所致AD大鼠血清与海马组织中细胞因子含量的影响［J］.中医药信息，2012，29（2）：24-25.