鸡肌肉瘤病理形态学观察

刘晓丹周小林刘 洋

（1.南充市动物疫病预防控制中心，四川南充 637000；2.南充市农牧业局，四川南充 637000）

鸡肌肉瘤病理形态学观察

刘晓丹1周小林1刘 洋2

（1.南充市动物疫病预防控制中心，四川南充 637000；2.南充市农牧业局，四川南充 637000）

禽肿瘤性疾病作为世界范围发生的疾病，严重危害养禽业的发展。其中，危害最严重的主要包括马立克氏病（Marek′s disease，MD）、禽白血病（Avian leukaemia，AL）和网状内皮组织增生症（Reticuloendotheliosis，RE）三种。禽群中肿瘤的发生率和重要性只能进行大概估计，肿瘤的发生率各异，从3%到19%不等。肌肉瘤是以肌肉组织形成肿瘤实质的成熟型肿瘤。其中，由平滑肌组织构成的肌肉瘤称为平滑肌瘤；由横纹肌发生的肌肉瘤称为横纹肌瘤。平滑肌瘤属于膨胀性生长，且生长缓慢的一种成熟型肿瘤；横纹肌瘤是由未成熟的横纹肌构成的恶性肿瘤。本病例经实验室病理学诊断为平滑肌瘤，是于2014年5月发生于南充一蛋鸡场，其发病率为40%，死亡率高达60%，对生产上造成了严重的经济损失，对当地养殖业造成了严重的影响，且本病易误诊为马立克。

1 材料和方法

1.1 材料及用具

南充某养殖场100日龄病鸡；酒精，纯净水，甲醛，二甲苯，石蜡，蛋白胶，苏木紫，1%盐酸酒精；切片刀，熔蜡箱，真空泵。

1.2 实验方法

1.2.1 实验材料的获取

首先对发病鸡进行详细的临床症状观察，然后选择病变明显，有典型肿瘤性病变的病鸡作为取材对象，对其进行系统剖解，观察其大体病变情况。接着选取病鸡的肾、胃、肝、脾、肌肉、肺、卵巢等主要病变部位作为制作组织切片的材料。

1.2.2 实验材料的固定

打开病鸡的腹腔取出其内脏器官肝、脾、肺、肾、卵巢、肌肉、肌肉和卵巢上的肿块等，粗略选取大小约为2cm×2cm×1cm的病理组织材料用刀片切下来，立即投入盛有固定液体的标本瓶中，贴上标签，注明固定日期、固定液名称。固定4～12 h。

1.2.3 制作切片

固定后的材料，先用流水缓慢冲洗1～2 h，采用逐渐提高酒精浓度来减少材料中水分的含量的办法，这样可避免组织过度的收缩。只需最后再脱去酒精，则可直接使用病料。本次试验所采用的浓度和作用时间依次是：75%（6～12 h），85%（6～12 h），95%（过夜），100%Ⅰ（1～2 h），100%Ⅱ（1～2）之后吸干酒精。然后将组织置于透明剂（为二甲苯，需二次更换）中，二甲苯Ⅰ（1～2），二甲苯Ⅱ（1～2）小时，使组织变得透明。在恒温箱中温度保持高于石蜡熔点1℃左右（一般为62℃）。甲苯石蜡（甲苯：石蜡为1∶1）30 min→第一纯石蜡1 h→第二纯石蜡1 h。最后，进行包埋时应切面向下，且多块组织间每块间距为1 cm左右。将切好的蜡片贴附至玻片后，入烘箱烤12 h左右，温度以低于包埋蜡熔点为佳。

1.2.4 切片的染色

采用苏木紫染色得到的结果为胞核蓝色，胞浆浅红色；结缔组织鲜红色，肌纤维深红色。最后进行切片的固定：滴一滴树胶在组织上，加盖盖玻片。

1.2.5 切片观察

将制作好的病鸡各病理组织切片置于光学显微镜下进行细致的观察，并与正常禽类组织切片进行比较，了解并掌握鸡肿瘤性疾病镜下的主要典型病理变化。

2 实验结果

2.1 病鸡的解剖眼观病变

腿部肌肉、胸部肌肉等全身多处肌肉均见到块状、结节状和少量境界不明显的肿块，切面呈鱼肉状，灰白色和灰红色。卵巢外也有大小不一的肿块，质地变实。其他组织器官无明显异常。

2.2 切片观察结果

2.2.1 肝

肝细胞胞体较大，界限清楚，肝小叶间结缔组织较少，肝小叶分界不明显，中央静脉、小叶间胆管、小叶间静脉、小叶间动脉、清晰可见。有的炎症细胞浸润。

2.2.2 肾

切片观察到大量红细胞存在于皮质和髓质中，皮质和髓质血管扩张、出血、瘀血。肾小管上皮肿胀，部分出现空泡变性。肾小球肿大、瘀血，间质静脉扩张。另有细胞浸润。

2.2.3 卵巢

大量肿瘤细胞存在于组织中，散布性的细胞浸润现象出现，正常组织被大量肿瘤细胞替代。

2.2.4 肺

组织出血严重，毛细血管壁增厚，静脉瘀血，肿瘤细胞浸润。

2.2.5 肌肉

全身多处肌肉切片观察，均可见大量不同于正常肌细胞的细胞浸润。肌纤维中的横纹不均匀，有的甚至没有。瘤细胞则应以梭形细胞为主，呈明显的多形性，伴有多角形和圆形或者带状瘤细胞。瘤细胞胞浆内，有纵行肌原纤维。横纹只见于纤维和细胞的边缘于尖端。中央部由均质的肌浆构成，也见少量纵纹。胞核大小不一。详见图1和图2。

图1 部分肌肉组织被肿瘤细胞替代（×400）（some muscle tissue replaced by tumor cells）

图2 病变灶区（×400）

2.2.6 肿瘤

分为实质和间质两部分。实质差异为大量肿瘤细胞，其特点是胞核和胞体的比例和正常组织有显著的差异。胞核于胞浆相比，核和核仁较大，核染色质丰富，且在高倍镜下能看到较多的核分裂现象。间质由结缔组织和血管构成，血管数量较多，结缔组织较少，肿瘤细胞贴近血管，实质于间质分界不是很明显。详见图3和图4。

图3 肌组织完全被肿瘤细胞替代（×400）（in the malignant lesion the muscle tissue completely replaced by tumor cells）

图4 肌组织完全被肿瘤细胞替代（×400）（in the malignant lesion the muscle tissue completely replaced by tumor cells）

2.2.7 脾

被膜、小梁、白髓、红髓等结构均清晰可见。脾小结的数量略有增加，有少量的细胞浸润。

3 讨论和结论

3.1 讨论

3.1.1 肌瘤与纤维瘤的区别

肌细胞边界清楚，胞浆丰富、色深粉红，有肌原纤维；胞核两端较钝，常有栅栏状排列。在Van Gieson染色下，纤维呈红色，肌肉呈黄色。纤维肉瘤无完整包膜，质地比较柔软，色泽淡红，富有光泽。已分化的纤维肉瘤瘤细胞胞浆很少，胞核呈枣核状，核染色质为粗颗粒状，分布不均匀，核仁大小不一，核膜清晰，胶原纤维多。

3.1.2 肌瘤与马立克的区别

马立克病是由疱疹病毒引起的一种传染性的淋巴组织增生疾病。患马立克的病鸡其外周神经由大量的增生的成淋巴细胞组成或炎症反应，特别以小淋巴细胞和浆细胞的弥散，以及轻微至中度的细胞浸润为显著特征，通常还伴有部分水肿。病鸡另外一个最常见的变化眼部的虹膜单核细胞浸润，在眼肌，特别是外直肌和睫状肌中也常见浸润，前房常伴有颗粒或无定型物的存在。

而内脏器官的淋巴瘤性病变性质则表现很一致，都是增生性的。细胞成分很像神经的增生性病变，由弥散性小到中等增生的淋巴细胞、成淋巴细胞和活化了的及原始的网状细胞所组成，很少见浆细胞。

3.1.3 肿瘤和炎症、增生性病变的区别

肿瘤和周围组织有分界、无过渡、无组织上的连接，而增生、慢性炎症的增生则常和周围组织无界限、有过渡、有组织上的连接。肿瘤的细胞种类、形态、排列、生长方式等，有它们的相对一致性，而炎症、增生，细胞类型较多，主要为各种炎细胞、成纤维细胞、纤维细胞和脉管内皮细胞。炎症、增生常不持续增长，可自然消退，肿瘤呈持续性增长，一般不会自然消退。

3.1.4 肌瘤与禽白血病的区别

禽白血病是指由反转录病毒科中的禽反转录病毒属的成员引起的鸡的各种可传播的良性和恶性肿瘤。其特征是瘤细胞体积较大，细胞核大，核中央呈空泡状，胞质中含有大量的核糖核酸。肝、脾、骨髓等组织中有大量的成红细胞堆积。成红细胞的主要形态特征为胞体较大，细胞形态不规则，表面有突起。

3.2 结论

根据对病鸡的病史调查、剖解观察、切片观察后诊断结论为肌肉瘤。

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