悬灸“大椎”穴对哮喘神经源性炎症的影响*

★　张伟　焦琳　李海澜　(江西中医药大学附属医院　南昌 330006)

悬灸“大椎”穴对哮喘神经源性炎症的影响*

★张伟*第一作者:张伟(1978—)，女，博士，副主任中医师，讲师。研究方向：腧穴敏化规律。焦琳李海澜(江西中医药大学附属医院南昌 330006)

摘要：目的:探讨悬灸“大椎”穴对哮喘大鼠神经源性炎症相关因子的影响。方法:悬灸大鼠“大椎”穴，运用ELISA双抗体夹心法测定大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中的NGF、pERK、NKA、NKB、SP、CGRP等神经源性炎症相关因子的含量。结果:模型组中NGF、pERK、NKA、NKB、SP、CGRP的含量较空白组有非常显著性升高((P<0.01)，而治疗组各因子的含量与模型组比较有非常显著性降低(P<0.01)。结论:哮喘的发作可能与神经生长因子介导的神经源性炎症有非常密切的相关性，而悬灸“大椎”穴可通过抑制其相关级联反应来降低神经源性炎症，从而降低哮喘的炎症反应。

关键词：悬灸；大椎；哮喘；神经生长因子

支气管哮喘是一种以气管高反应性和气管变态性炎症为特征的慢性气管炎症。在以往的研究中，哮喘的免疫源性因素被研究颇多，但近年来神经源性因素的影响渐渐成了研究的热点，神经-免疫的综合作用可能为哮喘发作的重要途径。

神经生长因子(NGF)在神经源性哮喘的发作中起到核心的作用。它是第一个被发现的神经营养因子。它具有促进神经细胞存活和生长发育的作用。NGF可通过与其高亲和力受体TrkA结合，通过细胞外调节蛋白激酶(ERK)途径，参与合成某些促进哮喘的神经肽类物质[1]，如神经激肽A(NKA)、神经激肽B、(NKB)P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)等神经肽类物质，这些物质会加重气道炎症反应、增强气道高阻性。

本研究拟通过观察悬灸法对哮喘大鼠的神经源性炎症相关因子的改善作用，探讨艾灸治疗哮喘的神经源性炎症相关机制。

1材料与方法

1.1动物与分组由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供的清洁级雄性SD大鼠36只，体重200～220g，许可证号：SCXK(湘)2013-0005。由江西中医药大学灸疗研究实验室饲养，良好的通风条件，室温25℃，空气湿度为50%。按随机数字表法分为对照组、模型组、治疗组3组，每组12只。

1.2主要试剂和仪器大鼠NGF、磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)、NKA、NKB和SP、CGRP酶联免疫吸附试剂盒(上海伟进生物科技有限公司)，超声雾化器(型号：402AI，上海鱼跃医疗设备有限公司)，酶标仪(型号：Multiskan mk3，芬兰雷勃公司)，艾条：4mm×10mm(江西中医药大学附属医院生产)。

1.3造模方法[2]大鼠于第1d、第8d腹腔注射10%卵白蛋白(OVA)和氢氧化铝(AL(OH)3)溶液0.2mL，2次致敏，于实验第15d起开始雾化吸入1%OVA溶液30min诱喘，雾化流量3mL/min。空白组用注射用水代替卵清白蛋白液进行注射和雾化吸入。以大鼠出现烦躁、打喷嚏、呛咳、呼吸幅度加大、频率加快，腹式呼吸或点头运动，甚者出现呼吸减慢或节律不整，行动迟滞或俯伏不动、四肢瘫软、反应迟钝等症状为激发成功。

1.4艾灸方法造模成功后，开始介入艾灸治疗。用固定夹将大鼠固定后，选取大鼠大椎穴，定位取穴按照胡元亮所编《实用动物针灸手册》，取第七颈椎与第1胸椎之间背部正中。用1支艾条悬于大椎穴上约2cm处先回旋灸2min预热局部皮肤，再固定于大椎穴施行温和灸，于实施者将食指放于大椎穴处有温热感为宜。每日于早10:00时起，对治疗组悬灸30min，共治疗7d。

1.5样本采集及检测各组大鼠在治疗结束2h内，用1%戊巴比妥钠(90mg/kg)腹膜腔注射麻醉，暴露肺组织，分离气管，结扎右主支气管，向左肺匀速注入4mL无菌生理盐水，反复回抽3次，回收BALF并计量，回收率大于80%，采集BALF后，离心10min(1 000r/min)，取其上清液。NGF、pERK、NKA、NKB和SP、CGRP采用生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测。

2结果

2.1各组大鼠BALF中NGF、pERK含量的对比见表1、图1。

组别NGF/pg·mL-1pERK/U·mL-1空白组37.63±8.1421.13±4.49模型组162.36±37.18●130.47±26.58●治疗组83.02±17.69▲52.84±10.61▲

注：与空白组比较，●P<0.01；与模型组比较，▲P<0.01。

结果表明：模型组BALF中NGF、pERK的含量明显高于空白组(P<0.01)，说明哮喘的发作与NGF、pERK的含量有显著相关性；治疗组与模型组比较，BALF中NGF、pERK的含量有非常显著性降低(P<0.01)，说明悬灸治疗对降低NGF、pERK的含量具有显著作用。

图1　BALF中NGF、pERK含量比较

2.2各组大鼠BALF中SP、CGRP、NKA、NKB含量的对比见表2、图2。

表2　各组大鼠BALF中

注：与空白组比较，●P<0.01；与模型组比较，▲P<0.01。

结果表明，模型组大鼠BALF中SP、CGRP、NKA、NKB含量明显高于空白组(P<0.01)，说明SP、CGRP、NKA、NKB参与了哮喘的发作；治疗组BALF中SP、CGRP、NKA、NKB的含量与模型组比较亦有非常显著性差异(P<0.01)，说明悬灸大椎穴可降低此类神经肽类物质的含量，从而减轻哮喘的发作。

图2　BALF中SP、CGRP、NKA、NKB含量对比

3讨论

哮喘气道的炎性反应，以往对其免疫源性因素研究颇多，近年来神经源性因素的作用越来越被重视。NGF是最早发现的神经生长因子家族成员，它不仅调控神经发育、存活及维护其功能，也参与免疫炎症调控，以及复杂的神经-免疫相互作用[3]。如它可促使大鼠皮肤血管通透性增强，使肥大细胞数量增多并促其快速脱颗粒等。所以当病毒、细菌或其他变应原刺激气道的炎症细胞时，可促进炎症细胞释放NGF，这些NGF可通过一系列的级联反应，释放其下游活性物质-神经肽类物质，如NKA、NKB、SP、CGRP等，此类神经肽类物质可以促进气道黏液高分泌、促进炎症介质释放、收缩气道平滑肌及增加气道高反应性等作用，因而认为它们可能参与哮喘的生理病理过程[4-7]。

目前认为，NGF最可能通过细胞外信号调节激酶转导途径来诱发哮喘。NGF与其高新和力受体TrkA结合进入细胞内，通过Ras-Raf-MEK一系列级连反应导致ERK磷酸化，激活的ERK进入细胞核，将细胞信号传导到细胞核内，参与转录。有研究[1]初步证实了哮喘豚鼠初级传入神经元(C7-T5脊神经节神经元)的NGF被过度激活，NGF可上调其活化ERK的表达，而应用anti-NGF后，活化ERK的表达下调。过度激活的ERK进入细胞核，激活转录因子，参与合成促进哮喘发作的某些神经肽类物质。

支气管哮喘属于中医学“哮病”“喘证”范畴，中医认为哮喘为外因或外邪引触宿痰，以致肺失肃降，痰阻气道，气道挛急所致。其病因主要是由于肺、脾、肾三脏不能布散、运化、蒸腾气化津液，以致聚湿成痰，伏藏于肺，成为发病的潜在夙根，因各种诱因而引发，故其病位虽在肺，但与肾、脾关系密切。督脉为阳脉之海，总督一身之阳，为机体的动力之源，而大椎穴位于督脉第七颈椎棘突下，手足三阳的阳热之气由此汇入本穴并与督脉的阳气上行头颈，有温阳补虚、宣肺平喘之功，多治疗肺之疾病，如感冒、咳喘、寒热不调等。艾灸大椎是临床治疗哮喘的常用方法。

本研究发现，模型组的大鼠BALF中NGF、pERK、NKA、NK、BSP、CGRP含量较空白组有非常显著性升高(P<0.01)，说明哮喘的发生可能与NGF引起的神经源性炎症有密切相关，且NGF可能与细胞外信号调节激酶转导途径(ERK途径)有关，细胞外信号调节激酶被磷酸化(pERK)后进入细胞核，促进哮喘发作的神经肽类物质(NKA、NKB、SP、CGRP)的释放；治疗组与模型组比较，大鼠BALF中神经源性炎症相关因子含量皆有非常显著性降低(P<0.01)，说明悬灸大椎穴可以通过降低哮喘大鼠的神经源性炎症来改善气道的炎性反应和气道高阻性。

参考文献

[1]曹德寿,刘晓湘,方秀斌.哮喘豚鼠初级传入神经元ERK的表达及NGF的调节作用[J].解剖科学进展,2004,10(1):23-26.

[2]朱敏敏,傅诚章,周钦海.大鼠过敏性哮喘模型的建立[J].实用临床医药杂志,2003,7(1):71-72.

[3]Olgart Hglund C,Frossard N.Nerve growth factor and asthma [J].Pulm Pharmacol Ther,2002,15(1):51-60.

[4]Hunter DD,Myers AC,Undem BJ.Nerve growth factor-induced phenotypic switch in guinea pig airway sensory neurons[J].Am J Respir Crit Care Med,2000,161(6): 1 985-1 990.

[5]Dinh QT,Groneberg DA,Peiser C,et al.Nerve growth factor-induced substance P in capsaicin-insensitive vagal neurons innervating the lower mouse airway[J].Clin Exp Allergy,2004,34(9):

1 474-1 479.

[6]尚云晓,张晗,叶丽红,等.感觉神经肽在不同程度哮喘时肺组织中含量变化及相关研究[J].小儿急救医学,2014,11(1):16-18.

[7]欧阳若芸,胡成平,朱锦琪,等.神经生长因子及其受体在哮喘大鼠肺组织的变化以及对气道炎症的影响[J].中南大学学报(医学版),2005,30(6):660-665.

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The Influence of Suspended Moxibustion "Da-zhui" Point on Neurogenic Inflammation of Asthma

ZHANG Wei, JIAO Lin, LI Hai-lan

TheAffiliatedHospitalofJiangxiUniversityofTCM，Nanchang330006,China.

Abstract:Objective：To explore the effect of suspended moxibustion "Da-zhui" point on neurogenic inflammation mechanism of asthma rats. Method：Suspend "Da-zhui" point of the rats,then use the method of ELISA(enzyme-linked immuno sorbent assay) assaying the levels of related factors to neurogenic inflammation such as NGF、pERK、NKA、NKB、SP、CGRP in bronchoalveolar lavage(BALF). Results：The levels of NGF、pERK、NKA、NKB、SP、CGRP of model group were much higher than blank control group (P<0.01),while the levels of correlated factors of treatment group were much lower than model group(P<0.01). Conclusion：The attack of asthma may have close correlation with neurogenic inflammation mediated by nerve growth factor,while moxibustion can reduce neurogenic inflammation by restraining related cascade reaction.

Key words:Suspended Moxibustion；"Da-zhui" Point；Asthma；Nerve Growth Factor

收稿日期：(2015-04-27)编辑：秦小珑

中图分类号：R245.8

文献标识码：B

基金项目：*江西省自然科学 (20122BAB205092)。