S100A12在强直性脊柱炎患者血清中的表达和临床意义

S100A12在强直性脊柱炎患者血清中的表达和临床意义

刘欢1，杨晓平2， 杨晓凌1*

(1.上海市长宁区光华中西医结合医院，上海200052；2.第二军医大学附属上海长征医院 风湿免疫科)

强直性脊柱炎是一种以中轴关节慢性炎症反应为主要特征的全身性疾病[1]，在我国发病率约为0.26%，主要症状是反复发作的顽固性腰痛、腰骶部僵硬感，晚期可发生脊柱强直、畸形甚至严重的功能障碍，强直性脊柱炎起病比较隐匿，病程较长，具有很高的误诊率[2]，由于其发病机制尚不明确，目前临床上尚缺乏特效性的药物，因此早期明确诊断对于强直性脊柱炎的治疗具有重要的临床意义，本文通过测定强直性脊柱炎患者血清中S100A12蛋白表达水平的变化，以期为临床上强直性脊柱炎的早期诊断及治疗提供指导。

1对象与方法

1.1研究对象

选取2010年2月至2013年10月在我院接受治疗的强直性脊柱炎患者32例，其中男19例，女13例，年龄22-49岁，平均体重指数22.1±3.9，病程1-19天。对照组为我院体检健康者32例，两组之间一般资料均无显著差异(P均>0.05)。

本研究均经患者知情和同意，该试验方案均经过我院伦理委员会批准。

1.2疾病活动性和生存质量的评估

使用强直性脊柱炎疾病活动指数(Bath Ankylosing Spondylitis Disease Activity Index ，BASDAI)进行疾病活动性的评估，强直性脊柱炎功能指数(Bath Ankylosing Spondylitis Functional Index,BASFI)法进行患者运动功能的评估，使用强直性脊柱炎的生活质量问卷调查法(Ankylosing Spondylitis Quality of Life，ASQoL)进行患者生存质量的评估，具体方法参考相关文献报道[3]。

1.3方法

两组患者均于清晨空腹抽取肘静脉血10 ml于肝素抗凝管中，3 000 r/min离心10 min，分离血清于-80℃冰箱中保存待检。患者血清中S100A12蛋白的检测采用western blot法测定三组对象血清中的S100A12蛋白的表达，取蛋白样品35微克，电泳后转膜，5%的脱脂奶粉封闭1 h，GAPDH和S100A12抗体用5%牛奶稀释(1∶200)，4℃过夜，TBST洗膜，5%的牛奶稀释的辣根过氧化物酶标记的兔抗羊二抗，洗膜后，按照ECL说明书，1∶1配置发光工作液，凝胶成像仪成像，Image J软件进行灰度分析。血清中ESR和CRP表达量检测采用免疫比浊法测定C反应蛋白(CRP)与魏氏法测定血沉(ESR)。

1.4统计学方法

2结果

2.1血清中S100A12的蛋白水平变化

与正常对照组相比(图1和表1)，强直性脊柱炎患者血清中S100A12蛋白表达水平明显升高，两组相比有显著统计学差异(P>0.05)。

图1　western blot检测S100A12的蛋白表达水平

正常(32例)强直性脊柱炎患者(32例)P值S100A12(S100A12/GAPDH)0.55±0.290.82±0.41*0.003ESR(mm/h)10.91±6.0222.52±12.35*<0.001CRP(mg/dl)0.45±0.212.12±0.32*<0.001

*与正常组相比P<0.05;

2.3血清中S100A12、ESR和CRP的表达及与临床病理参数之间的关系

与正常对照组相比(表2)，强直性脊柱炎患者血清中的CRP和ESR水平明显增加(P<0.05);S100A12的表达水平与CRP和ESR的水平无明显相关性(P>0.05)，与BASDAI、BASFI和ASQoL无显著相关性(P>0.05)。

表3　临床实验室检查和病理参数之间的相关性分析

*P<0.05

3讨论

S100A12是一种具有手型EF结构的钙结合蛋白，主要由中性粒细胞合成和分泌，最早是在牛肺组织液中被发现，S100A12由92个氨基酸组成，其相对分子量大小为10.575 KD，以二聚体及六聚体形式存在[4]。研究表明S100A12是晚期糖基化终末产物受体RAGE最稳定的典型配体，S100A12与RAGE结合后激活MAPK和NF-κB信号通路，导致大量炎性因子TNF-α，IL-1β和IL-6的产生[5]，强直性脊柱炎患者的骶髂关节及周围关节滑膜在局部产生的大量细胞因子，通过直接或间接途径促进破骨细胞的分化和成熟，增强破骨细胞的功能，参与了骨质破坏，它们都是延缓或阻断强直性脊柱炎骨质侵蚀作用的治疗靶点[6]，此外，研究发现，TNF-α、IL-1β和IL-6在强直性脊柱炎患者血清中的表达水平明显增加，目前临床上针对TNF-α等炎性因子的靶样抑制已成为治疗强直性脊柱炎新兴的治疗手段[7]，提示阻断炎症因子的产生对于强直性脊柱炎的治疗具有重要意义。

最近研究表明S100A12不仅在川崎病[9]、在类风湿性关节炎[10]等自身性免疫疾病中表达增加，还在糖尿病血管并发症、炎症性肠病以及哮喘等一系列免疫相关性疾病患者病变部位也存在异常表达。研究还发现S100A12的异常表达不仅局限于病变部位，在肿瘤性疾病、神经变性性疾病和代谢障碍等疾病患者的血清中的也存在异常表达，这为通过血清学检查来判断患者的病情变化提供了重大便利。综合以上文献报道，我们在本研究中通过检测强直性脊柱炎患者血清中S100A12的表达，并与患者疾病活动程度和生活质量做一个相关性的分析，本研究结果发现，与正常对照组相比，强直性脊柱炎患者的ESR和CRP水平显著增加，S100A12在强直性脊柱炎患者的血清中表达也明显升高，但是其表达量与患者疾病的活动程度和生活质量无相关性，由于本组研究中病例量较少，因此结果可能与实际情况存在一定误差，尚不足以证实其与临床病理特征的真实关系，今后需要进一步行大样本、多中心的研究来进一步探讨S100A12异常表达的临床意义。

综上所述，S100A12在强直性脊柱炎患者的血清中存在异常表达，可能在强直性脊柱炎疾病的发生发展中发挥重要的作用，未来需要进一步行体内和体外实验研究S100A12作为强直性脊柱炎治疗靶点的可能性。

参考文献：

[1]Piga M,Chessa E,Ibba V,et al.Biologics-induced autoimmune renal disorders in chronic inflammatory rheumatic diseases:Systematic literature review and analysis of a monocentric cohort[J].Autoimmun Rev，2014，13(8):873.

[2]Ravinsky RA,Ouellet JA,Brodt ED,et al.Vertebral Osteotomies in Ankylosing Spondylitis-Comparison of Outcomes Following Closing Wedge Osteotomy versus Opening Wedge Osteotomy:A Systematic Review[J].Evid Based Spine Care J,2013,4(1):18.

[3]Oktayoglu P,Em S,Tahtasiz M,et al.Elevated serum levels of high mobility group box protein 1 (HMGB1) in patients with ankylosing spondylitis and its association with disease activity and quality of life[J].Rheumatol Int,2013,33(5):1327.

[4]van de Logt F,Day AS.S100A12:a noninvasive marker of inflammation in inflammatory bowel disease[J].J Dig Dis,2013,14(2):62.

[5]Goyette J,Geczy CL.Inflammation-associated S100 proteins:new mechanisms that regulate function[J].Amino Acids,2011,41(4):821.

[6]Hreggvidsdottir HS,Noordenbos T,Baeten DL.Inflammatory pathways in spondyloarthritis[J].Mol Immunol,2014,57(1):28.

[7]Selmi C.Diagnosis and classification of autoimmune uveitis[J].Autoimmun Rev,2014,13(4-5):591.

[8]Kessel C,Holzinger D,Foell D.Phagocyte-derived S100 proteins in autoinflammation:putative role in pathogenesis and usefulness as biomarkers[J].Clin Immunol,2013,147(3):229.

[9]Foell D,Ichida F,Vogl T,et al.S100A12 (EN-RAGE) in monitoring Kawasaki disease[J].Lancet,2003,361(9365):1270.

[10]Baillet A,Trocme C,Berthier S,et al.Synovial fluid proteomic fingerprint:S100A8,S100A9 and S100A12 proteins discriminate rheumatoid arthritis from other inflammatory joint diseases[J].Rheumatology (Oxford),2010,49(4):671.

收稿日期：(2014-03-22)

作者简介：刘欢(1978-)，女，江苏人，硕士，主治医师，研究方向：风湿病学；杨晓凌(1969-)，女，上海人，本科，副主任医师， 研究方向：风湿病学。

文章编号：1007-4287(2015)03-0466-02

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