吸烟和β3-肾上腺素能受体基因Trp64Arg、 锰超氧化物歧化酶9Ala/Val基因多态性与 非酒精性脂肪性肝病的相关性

张超贤, 郭李柯，郭晓凤

(1. 新乡医学院第一附属医院消化内科，河南卫辉 453100；2. 新乡医学院 第一附属医院口腔科，河南卫辉 453100；3. 杭州市第六人民医院肝病科，浙江杭州 310014)

◇临床研究◇

吸烟和β3-肾上腺素能受体基因Trp64Arg、 锰超氧化物歧化酶9Ala/Val基因多态性与 非酒精性脂肪性肝病的相关性

张超贤1, 郭李柯2，郭晓凤3

(1. 新乡医学院第一附属医院消化内科，河南卫辉 453100；2. 新乡医学院 第一附属医院口腔科，河南卫辉 453100；3. 杭州市第六人民医院肝病科，浙江杭州 310014)

目的 探讨吸烟和β3-肾上腺素能受体(β3-AR))基因Trp64Arg、锰超氧化物歧化酶9Ala/Val(MnSOD9Ala/Val)基因多态性与非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)发病之间的关系。方法 采用病例-对照研究的方法，以720例NAFLD患者及720例健康对照者的外周血白细胞为样本，采用聚合酶链反应(PCR)技术分析β3-AR基因Trp64Arg和MnSOD9Ala/Val基因多态性。结果 β3-AR基因Trp64Arg (A/A)基因型和MnSOD9Ala/Val (V/V)基因型频率分布分别为39.4%、71.7%(病例组)和21.1%、43.3%(对照组)，差异有统计学意义(P<0.01；P<0.01)。Trp64Arg(A/A)基因型者患NAFLD的风险显著增加(OR=2.434，95%CI=1.816～4.075)。MnSOD9Ala/Val(V/V)基因型者患NAFLD的风险也显著增加(OR=3.308，95%CI=1.913～4.509)。基因突变的协同分析发现，Trp64Arg(A/A)/MnSOD9Ala/Val(V/V)基因型者在NAFLD组和对照组中的分布频率分别为32.8%和6.5%，差异有统计学意义(P<0.01)。Trp64Arg(A/A)/MnSOD9Ala/Val(V/V)基因型者患NAFLD的风险显著增加(OR=9.753，95%CI=4.292～12.426)。病例组的吸烟率显著高于对照组(OR=2.623，95%CI=1.425～4.957)，Trp64Arg(A/A)/MnSOD9Ala/Val(V/V)基因型与吸烟有协同作用(OR=33.764，95%CI=18.907～61.582)。结论 Trp64Arg (A/A)/MnSOD9Ala/Val(V/V)基因型和吸烟是NAFLD的易患因素，三者的联合在NAFLD的发生中起着协同的作用。

非酒精性脂肪性肝病；β3-肾上腺素能受体基因Trp64Arg；锰超氧化物歧化酶9Ala/Val；多态现象；吸烟

非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)的确切发病机制目前尚不清楚，但2次打击学说较为流行，该学说认为胰岛素抵抗会导致肝脏脂肪沉积，成为NAFLD发病过程中的1次打击，而在肝脏脂肪沉积基础上所发生的氧应激和脂质过氧化则形成2次打击，最终导致NAFLD的发生[1]。香烟以燃烧过程中释放的尼古丁、一氧化碳成分干扰脂质代谢及多种自由基成分，激发、促进脂质过氧化来参与NAFLD的发生、发展[2]。β3-肾上腺素能受体(β3-adrenergicreceptor, β3-AR)存在于褐色脂肪与白色脂肪，能与其特异性配体结合，参与机体脂质代谢调节、胰岛素敏感性调控、体重控制等多种生理性效应，若β3-AR功能障碍将导致脂质代谢紊乱和胰岛素抵抗，引起肝细胞内脂质过量沉积[3]。MnSOD主要存在于细胞的线粒体的基质内，生物体使用的能源主要在线粒体内产生，在能量合成过程中,氧化呼吸链的电子传递过程是机体内自由基产生的最主要途径。因此，存在于线粒体基质内的MnSOD可首先清除这些自由基，以防止自由基的累积和扩散,所以MnSOD对维持体内自由基的平衡起关键作用[4]。通过清除自由基、抑制脂质过氧化反应而成为NAFLD进展的重要控制因素。β3-AR、MnSOD基因具有多态性，即具有多个等位基因，不同的等位基因编码的β3-AR或MnSOD活性有差异。β3-AR或MnSOD活性基因的多态性可使机体对外界环境(如吸烟)的反应能力有所不同，这是决定机体NAFLD易感性的一个重要因素。β3-AR、抗氧化酶基因多态性与NAFLD易感性的研究日渐增多，但尚未见吸烟与上述基因多态性的联合作用对NAFLD易感性影响的报道。为了研究β3-AR和MnSOD在当地人群中的分布状态，进而探索其和吸烟习惯相互作用与NAFLD高发的关系，我们在国内首次开展了β3-AR和MnSOD联合基因多态性与NAFLD易感性关系的研究。

1 材料与方法

1.1 研究对象及相关资料 2008年7月～2012年6月我院收治的NAFLD患者720例，NAFLD的诊断参照《中华医学会肝脏病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组的诊断标准》[5]。对照组720例为健康体检人群，排除2型糖尿病、肥胖、高血压、高脂血症及其他代谢性疾病，排除饮酒史。两组的年龄、性别、民族、籍贯经统计学处理差异无统计学意义，无血缘关系。调查收集研究对象的人口学资料、吸烟史、职业史和家族史。吸烟状况由吸烟指数(smoking index, SI)来估计，SI表示每天吸烟支数×吸烟年数。本研究分为不吸烟、SI≤400者和SI>400者(表1)。每人各抽取静脉血2～3 mL，置乙二胺四乙酸钠抗凝管，分离白细胞层。用QIAampDNA提取试剂盒(德国QIAgen公司)提取白细胞DNA，DNA置-30 ℃低温冰箱保存备用。

1.2 基因测定

1.2.1

引物序列为：上游引物5′-CGCCCAATACCGCCAACA-3′，下游引物5′-CCACCAGGAGTCCCATCACC-3′，由上海生工生物技术有限公司合成。PCR反应体系包括：基因组DNA 1 μL，上下游引物各0.5 μL，TaqDNA聚合酶Mix液(TaKaRa公司)25 μL。反应条件为：95 ℃预变性5 min；94 ℃变性35 s，退火62 ℃ 30 s逐步降至57 ℃，72 ℃延伸40 s，共10个循环；94 ℃变性35 s，退火57 ℃ 20 s，72 ℃延伸45 s，共22个循环。PCR产物长度为210 bp，经Bio-Rad染色琼脂糖凝胶电泳确认扩增结果后，以BstNⅠ酶切，37 ℃孵育4 h，取酶切产物4 μL，经Bio-Rad染色琼脂糖凝胶电泳后，酶切产物放入紫外线凝胶成像仪观测，可见3种带型：T/T纯合子为99、62 bp的2条区带，T/A杂合子为161、99、62 bp的3条区带，A/A纯合子为161、62 bp的2条区带。其中每型均出现的30、12、7片段因太小，在电泳上无法看清(图1)。

图1 Trp64Arg基因PCR产物的检测电泳

Fig.1 The electrophoresis of PCR products of Trp64Arg gene digested

M：Marker；1、2：T/T；3、4：T/A；5、6：A/A。

1.2.2 MnSOD9Ala/Val多态性分析[7]引物序列为：上游引物：5′-CAGCCCAGCCTGCGTAGACG-3′，下游引物：5′-GCGTTGATGTGAGGTTCCAG-3′，由上海生工生物技术有限公司合成。应用TaKaRa PCR Am-plification Kit(大连宝生物工程有限公司)PCR试剂盒在25 μL PCR反应体系中进行基因组DNA扩增，包括模板DNA 1 μL(10 mg/L)，10×PCR Buffer(含3 mmol/L MgCl2)2.5 μL，dNTP Mixture 2 μL、TaKaRaTaqDNA聚合酶0.125 μL(5 U/μL)，引物各1 μL(0.5 μmol/L)，灭菌去离子水17.375 μL。PCR反应条件如下：93 ℃预变3 min，然后93 ℃变性1 min，66 ℃退火1 min，70 ℃延伸1 min，35个循环，最后70 ℃延伸10 min。PCR扩增后的MnSOD 9Ala/Val基因片段为172 bp。PCR反应完成后，在10 μL的PCR反应产物中加入：10×buffer 2 μL、100×牛血清白蛋白(BSA)0.2 μL、BsaWⅠ酶0.5 μL(5 U/μL，美国新英格兰生物公司)；灭菌去离子水7.3 mL，酶切反应总体系为20 μL，酶切反应液放置于60 ℃恒温干浴锅温育16 h进行酶切。酶切产物经35 g/L琼脂糖凝胶电泳(含0.5 μg/mL溴乙啶),电泳缓冲液为0.5×TBE，在80 V电压下电泳40 min。MnSOD9Ala/Val(A/A)纯合子基因型个体显示1条88 bp长的DNA片段，MnSOD9Ala/Val(V/V)纯合子基因型个体显示1条172 bp长的DNA片段，而MnSOD9Ala/Val(A/V)杂合子基因型个体则显示2条长度分别为88 bp和172 bp的DNA片段(图2)。

1.3 统计学方法 采用SPSS for Windows11.0统计软件包进行统计分析。分别计算病例组和对照组的Trp64Arg和MnSOD9Ala/Val基因型分布，两组间的差异采用四格表χ2检验，各基因型NAFLD风险的调整OR值及其95%可信区间(95%CI)通过非条件Logistic回归模型分析，Trp64Arg和MnSOD9Ala/Val之间的联合作用及两者与吸烟的联合作用通过Logistic回归模型计算。

图2 MnSOD9Ala/Val基因PCR产物的检测

Fig.2 The electrophoresis of PCR products of MnSOD9Ala/Val gene

M：Marker；1、2：V/V；3、4、5、6：A/A；7、8、9：A/V。

2 结 果

2.1 NAFLD组和对照组一般资料的比较 NAFLD组和对照组在性别、年龄的分布差异无统计学意义；NAFLD组吸烟率显著高于对照组(表1)。

表1 NAFLD组和对照组一般资料的比较

Tab.1 Comparison of the general characteristics between NAFLD group and control group

一般项目NAFLD组(n=600)对照组(n=600)P性别>0.05 男483(67.1%)486(67.5%) 女237(32.9%)234(32.5%)年龄(岁,x±s)54.63±5.2854.65±6.04>0.05吸烟状况<0.01 -260(36.1%)430(59.7%) +460(63.9%)290(40.3%)SI≤400108(15.0%)198(27.5%)SI>400352(48.9%)92(12.8%)

2.2 Trp64Arg和MnSOD9Ala/Val基因型分布情况及两者与NAFLD易感性的协同分析 NAFLD组与对照组Trp64Arg(A/A)各占39.4%和21.1%，差异有统计学意义(P<0.01)，NAFLD组与对照组MnSOD9Ala/Val(V/V)各占71.7%和43.3%，差异亦有统计学意义(P<0.01，表2)。两者协同分析显示，Trp64Arg(A/A)/MnSOD9Ala/Val(V/V)在NAFLD组占32.8%，而对照组仅占6.5%，基因组合Trp64Arg(A/A)/MnSOD9Ala/Val(V/V)的NAFLD患病比例是Trp64Arg(Non-A/A)/MnSOD9Ala/Val(Non-V/V)的9.753倍，两个基因型之间存在协同作用(表3)。

表2 NAFLD组与对照组Trp64Arg、MnSOD9Ala/Val基因型的多态性分布

Tab.2 Distribution of polymorphisms of Trp64Arg and MnSOD9Ala/Val genotypes in NAFLD and control groups

基因型NAFLD组对照组OR95%CIPTrp64Arg Non-A/A436(60.6%)568(78.9%)1.000 A/A284(39.4%)152(21.1%)2.4341.816～4.075<0.01MnSOD9Ala/Val Non-V/V204(28.3%)408(56.7%)1.000 V/V516(71.7%)312(43.3%)3.3081.913～4.509<0.01

表3 Trp64Arg和MnSOD9Ala/Val基因型与NAFLD易感性的协同分析

Tab.3 Combined analysis of genotypes ofTrp64Arg and MnSOD9Ala/Val in relation to NAFLD susceptibility

联合基因型Trp64ArgMnSOD9Ala/ValNAFLD组对照组OR95%CIPNon-A/ANon-V/V156(21.7%)303(42.1%)1.000Non-A/AV/V280(38.9%)265(36.8%)2.0521.073～3.557>0.05A/ANon-V/V48(6.7%)105(14.6%)0.8880.602～1.594>0.05A/AV/V236(32.8%)47(6.5%)9.7534.292～12.426<0.01

2.3 NAFLD的易感性与吸烟的相关分析 将正常对照组的吸烟人数和不吸烟人数与NAFLD组的吸烟人数和不吸烟人数进行χ2检验，结果表明，NAFLD的发生与吸烟有关，吸烟者容易患NAFLD(OR=2.623，95%CI=1.425～4.957，P<0.01，表4)。NAFLD易感性与吸烟指数相关分析显示，大量吸烟组较低吸烟组更易患NAFLD(OR=7.014，95%CI=4.406～8.938，P<0.01，表4)。

表4 NAFLD的易感性与吸烟的相关性分析

Tab.4 Related analysis of NAFLD susceptibility and smoking status

吸烟状况NAFLD组对照组OR95%CIP -260(36.1%)430(59.7%)1.000 +460(63.9%)290(40.3%)2.6231.425～4.957<0.01SI≤400108(15.0%)198(27.5%)1.000SI>400352(48.9%)92(12.8%)7.0144.406～8.938<0.01

2.4 Trp64Arg和MnSOD9Ala/Val基因型及吸烟与NAFLD易感性的协同分析 NAFLD组中携带Trp64Arg(A/A)/MnSOD9Ala/Val(V/V)和吸烟者明显较对照组多，Trp64Arg(A/A)/MnSOD9Ala/Val(V/V)吸烟者占NAFLD组的31.3%，而在对照组中仅2.4%，差异有统计学意义(P<0.01，表5)。吸烟指数与Trp64Arg/MnSOD9Ala/Val和NAFLD易感性的协同分析显示，Trp64Arg(A/A)/MnSOD9Ala/Val(V/V)/SI>400组合的患病比例是Trp64Arg(Non-A/A)/MnSOD9Ala/Val(Non-V/V)/SI≤400组合的327.556倍(表6)。

3 讨 论

β3-AR主要在脂肪组织内表达，其主要作用是介导儿茶酚胺，促进机体游离脂肪酸的氧化磷酸化及能量的转化。儿茶酚胺通过β3-AR与鸟嘌呤核苷酸结合蛋白结合、腺苷酸环化酶及环腺苷酸(cAMP)作用，从而刺激脂肪细胞的脂肪氧化分解，抑制肝脏脂肪合成，增强周围组织对胰岛素的敏感性，从而阻止NAFLD的进展[8-9]。β3-AR的表达受基因的控制和环境因素的诱导，其表达和诱导表达水平均有显著的个体差异。人类β3-AR基因含有2个外显子，1个内含子，定位于8号染色体的8p11-12区域。外显子1上190位核苷酸的胸腺嘧啶核苷酸(T)转变成胞嘧啶核苷酸(C)是迄今发现的唯一的功能性突变，核苷酸序列由TGG变为CGG，致使氨基酸顺序中的(密码子)64位上的色氨酸密码子(TGG)为精氨酸密码子(CGG)所代替，造成色氨酸变为精氨酸，即Trp64Arg多态性，突变基因的存在可能是通过与该基因调节区其他多态性的连锁而影响β3-AR的诱导性。β3-AR基因Trp64Arg多态性具有3种基因型：Trp64Arg(T/T)、Trp64Arg(T/A)和Trp64Arg(A/A)。国内外已有研究报道认为，β3-AR基因Trp64Arg多态性与代谢综合征有关[10-11]。本研究发现，Trp64Arg(A/A)基因型者发生NAFLD的风险显著增加，其OR为2.434，95%CI为1.816～4.075。与上述研究结果一致。Trp64Arg(A/A)基因型者易患NAFLD的机制还不清楚。相关研究显示，Trp64Arg(A/A)基因编码的氨基酸改变可能影响β3-AR的空间构像，从而影响β3-AR的结合活性，使配体β3-AR的功能异常，β3-AR作用障碍将使其上述的促脂肪氧化分解、提高胰岛素敏感性等作用减弱[12]，从而最终引起肝脏内脂质沉积，增加NAFLD发生的危险性。

表5 Trp64Arg、MnSOD9Ala/Val基因型和吸烟与NAFLD易感性的协同分析

Tab.5 Combined analysis of genotypes of Trp64Arg, MnSOD9Ala/Val and smoking status related to NAFLD susceptibility

联合基因型Trp64ArgMnSOD9Ala/Val吸烟状况NAFLD组对照组OR95%CIPNon-A/ANon-V/V-49(6.8%)125(17.4%)1.000Non-A/ANon-V/V+107(14.8%)178(24.7%)1.5330.987～2.606>0.05Non-A/AV/V-181(25.1%)251(34.9%)1.8401.471～3.164>0.05Non-A/AV/V+99(13.8%)14(1.9%)18.0399.287～21.257<0.01A/ANon-V/V-19(2.6%)24(3.3%)2.0201.138～3.385>0.05A/ANon-V/V+29(4.0%)81(11.3%)0.9130.654～2.275>0.05A/AV/V-11(1.5%)30(4.2%)0.9350.597～1.9505>0.05A/AV/V+225(31.3%)17(2.4%)33.76418.907～61.582<0.01

表6 Trp64Arg、MnSOD9Ala/Val基因型和吸烟指数与NAFLD易感性的协同分析

Tab.6 Combined analysis of genotypes of Trp64Arg, MnSOD9Ala/Val and smoking index related to NAFLD susceptibility

联合基因型Trp64ArgMnSOD9Ala/Val吸烟指数NAFLD组对照组OR95%CIPNon-A/ANon-V/VSI≤40018(2.5%)134(18.6%)1.000Non-A/ANon-V/VSI>40089(12.4%)44(6.1%)15.0588.198～19.530<0.01Non-A/AV/VSI≤40073(10.1%) 8(1.1%)67.93138.847～85.603<0.01Non-A/AV/VSI>40026(3.6% 6(0.8%)32.25927.509～68.058<0.01A/ANon-V/VSI≤40012(1.7%)44(6.1%)2.0301.409～6.780>0.05A/ANon-V/VSI>40017(2.4%)37(5.1%)3.4202.837～7.804>0.05A/AV/VSI≤400 5(0.7%)12(1.7%)3.1021.6937～5.4083>0.05A/AV/VSI>400220(30.6%) 5(0.7%)327.556228.820～459.241<0.01

活性氧自由基(ROS)主要是由氧组成的、性质活泼、氧化性强的物质的总称，ROS对机体造成的最大损害是导致脂质过氧化。大量研究发现，肝细胞受损时ROS含量明显增高，ROS能攻击生物膜磷脂中的多聚不饱和脂肪酸发脂质过氧化反应，形成脂质过氧化物(LPO)，LPO可通过诱导炎性细胞浸润，激活Kupffers细胞和HSCs，引发肝纤维化[13]。线粒体内的氧化呼吸链是ROS产生的主要场所，锰型超氧化物歧化酶(MnSOD)是线粒体内的主要酶性自由基清除剂，能将超氧阴离子歧化为过氧化氢和氧，对维持胞内氧化还原平衡至关重要。MnSOD基因定位于6号染色体(6q25)，目前共发现4个功能多态性位点,研究最多的是位于第2外显子的GCT/GTT点突变。现已证实，MnSOD基因第2外显子GCT/GTT点突变引起MnSOD线粒体靶序列(MTS)第9位氨基酸替换，即丙氨酸(Ala)替换丝氨酸(Val)，MnSOD 9 Ala/Val基因多态性可改变蛋白的二级结构，影响成熟MnSOD蛋白的转运效能，并改变其功能作用，Ala多态性形成α-螺旋结构，而9 Val多态性则形成β-折叠层结构，α-螺旋结构对酶蛋白前体有效地转运进入线粒体有重要作用。结构分析显示，Ala等位基因的存在可改变氨基酸序列的两性分子螺旋结构，有利于MnSOD转运进入线粒体基质。因此，MnSOD Val多态性在线粒体内抗氧化活性可能比9 Ala多态性低[14]。研究证明，MnSOD基因多态性可增加氧化应激相关疾病如食管癌、肺癌等的发病率[15-16]。

本研究发现，MnSOD9Ala/Val(V/V)与NAFLD的发生有关，与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)，携带MnSOD9Ala/Val(V/V)基因者患NAFLD的风险高于携带MnSOD9 Ala/Val(Non-V/V)的个体(OR=3.330 2，95%CI=1.918 3～4.505 7)，MnSOD9Ala/Val(V/V)与Trp64Arg(A/A)对NAFLD的发生有显著的协同作用，兼有MnSOD9Ala/Val(V/V)与Trp64Arg(A/A)型者NAFLD发生率是兼有MnSOD9Ala/Val(Non-V/V)与Trp64Arg(Non-A/A)型NAFLD发生率的9.780 7倍。此外，本研究发现，吸烟与NAFLD的易感性有关(OR=2.623，95%CI=1.425～4.957，P<0.01)。对Trp64Arg和MnSOD9Ala/Val基因型与吸烟关系的协同分析发现，NAFLD患者中携带Trp64Arg(A/A)型基因且吸烟、MnSOD9Ala/Val(V/V)基因型人较对照组多(P<0.01)。Trp64Arg (A/A)/MnSOD9Ala/Val(V/V)型吸烟者发生NAFLD的危险显著增加(OR=33.764，95%CI=18.907～61.582)。通过对吸烟状况分析，发现大量吸烟者(SI>400)且具有MnSOD9Ala/Val(V/V)与Trp64Arg(A/A)基因型者患NAFLD的相对危险度大(OR=327.556，95%CI=228.820～459. 241)，对于SI≤400者，MnSOD9Ala/Val(V/V)与Trp64Arg(A/A)基因型者患NAFLD的风险(OR值)为3.102，可以看出，吸烟量越大，时间越长，NAFLD患病风险越大。香烟中含有的尼古丁和一氧化碳成分，均能刺激交感神经释放儿茶酚胺，使血浆游离脂肪酸水平升高，而游离脂肪酸又可被肝脏和脂肪组织摄取而合成甘油三酯；同时儿茶酚胺也会促进脂质从脂肪组织中释放出来，因此吸烟可造成血液中甘油三酯和胆固醇水平升高，进而引发脂肪肝。香烟中的尼古丁和一氧化碳等毒性成分被吸入人体后，会渗透到血液，随着血液循环输送到肝脏。长期吸烟，输送到肝脏的毒性物质就会增多，当超过肝脏的解毒和代偿能力时，肝细胞就会受损伤，肝功能会随之下降，肝脏的脂肪代谢就会受阻，从而引发脂肪肝[17-18]。通常情况下生物体内的活细胞均可产生氧自由基，因存在着包括SOD在内的自由基清除系统，可及时地清除体内过剩的自由基，维持自由基的动态平衡，香烟含多种化合物，多环类的苯并芘能接受电子而形成自由基，另香烟烟气中有一氧化碳、二氧化碳、一氧化氮(NO)、烷基和烷氧基等多种有害自由基。长期吸烟的人，过量氧自由基通过血液进入肝细胞，使肝细胞发生脂质过氧化及启动新的自由基反应，最终导致脂肪肝[19-21]。这可能是吸烟可单独增加及与MnSOD 9 Ala/Val(V/V)、Trp64Arg(A/A)协同增加NAFLD发生风险性的重要原因。

NAFLD是涉及环境因子和多种基因相互作用的复杂过程。本研究提示，携带Trp64Arg和MnSOD 9 Ala/Val突变基因型的个体属NAFLD高危险人群，NAFLD防治方案中应加以重视，虽然尚不能通过改变其NAFLD易感的基因型来防治NAFLD，但可以根据其与环境病因相互作用的特点，采取相应的控制环境病因的措施如戒烟或基因调控以达到有效预防NAFLD的目的。

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(编辑 卓选鹏)

Correlation of cigarette smoking and the polymorphisms of β3-adrenergic receptor gene Trp64Arg, MnSOD9Ala/Val genes with nonalcoholic fatty liver disease

ZHANG Chao-xian1, GUO Li-Ke2, GUO Xiao-feng3

(1. Department of Gastroenterology, the First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical University, Weihui 453100; 2. Department of Stomatology, the First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical University, Weihui 453100; 3. Department of Hepatology, The Sixth People’s Hospital of Hangzhou, Hangzhou 310014, China)

Objective To investigate the correlation of cigarette smoking and the combination of polymorphisms of β3-adrenergic receptor (β3-AR) gene Trp64Arg and manganese superoxide dismutase9Ala/Val (MnSOD9Ala/Val) genes with nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD). Methods The genetic polymorphisms of β3-AR gene Trp64Arg and MnSOD9Ala/Val were analyzed by polymorphism-polymerase chain reaction (PCR) technique in peripheral blood leukocytes of 720 NAFLD patients and 720 healthy persons. Results The frequency of β3-AR gene Trp64Arg (A/A) and MnSOD9Ala/Val (V/V) was 39.4% and 71.7% in NAFLD patients and 21.1% and 43.3% in healthy controls, respectively. Statistical tests showed significant differences in the frequency between the two groups (P<0.01). The risk of NAFLD in patients carrying Trp64Arg(A/A) was significantly higher than that in the controls (OR=2.434, 95%CI=1.816-4.075). The individuals carrying MnSOD9Ala/Val (V/V) had a higher risk of NAFLD (OR=3.308, 95%CI=1.913-4.509). Combined analysis of the polymorphisms showed that the percentage of Trp64Arg (A/A)/MnSOD9Ala/Val (V/V) in NAFLD and control groups was 32.8% and 6.5%, respectively (P<0.01). The patients carrying Trp64Arg(A/A)/ MnSOD9Ala/Val (V/V) had a higher risk of NAFLD (OR=9.753, 95%CI= 4.292-12.426). The smoking rate of the case group was significantly higher than that in the control group (OR=2.623, 95%CI=1.425-4.957,P<0.01), and statistic analysis suggested an interaction between cigarette smoking and Trp64Arg(A/A)/MnSOD9Ala/Val(V/V) which increased the risk of NAFLD (OR=33.764, 95%CI=18.907-61.582). Conclusion Trp64Arg(A/A), MnSOD9Ala/Val (V/V) and cigarette smoking are the risk factors for NAFLD, and they can play a synergetic role in NAFLD.

nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD); β3-adrenergic receptor (β3-AR) gene Trp64Arg; manganese superoxide dismutase9Ala/Val (MnSOD9Ala/Val); polymorphism; cigarette smoking

2013-10-07

2014-04-08

张超贤. E-mail: nn21882001@aliyun.com

R575.5

A

10.7652/jdyxb201501020

优先出版：http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1399.R.20140725.1800.002.html(2014-07-25)