黄芪注射液对治疗小鼠皮肤衰老的有效性观察

廖勇梅，熊霞

（泸州医学院附属医院皮肤科，四川 泸州 646000）

·论著·

黄芪注射液对治疗小鼠皮肤衰老的有效性观察

廖勇梅，熊霞

（泸州医学院附属医院皮肤科，四川 泸州 646000）

目的观察足三里穴位注射黄芪注射液对D-半乳糖致衰老小鼠皮肤超氧化物歧化酶（SOD）、羟脯氨酸（HYP）、丙二醇（MDA）含量的影响。方法将小鼠随机分为4组，即正常组、模型组、黄芪注射组和生理盐水注射组，每组15只。除正常组以外，剩余45只小鼠皮下注射D-半乳糖制作衰老模型。造模21 d后，黄芪组小鼠两侧足三里穴分别注射黄芪注射液0.01mL/d，生理盐水组小鼠在相同穴位注射等量生理盐水。进行21 d后，对全部小鼠血清和皮肤组织SOD活性、HYP含量、MDA含量进行测定。结果模型组小鼠血清与皮肤组织中的各项指标与对照组比较有显著性差异（P＜0.01）。与模型组相比，黄芪组小鼠血清与皮肤组织SOD活性、HYP含量显著升高，MDA含量显著降低（P＜0.01）；生理盐水组小鼠血清与皮肤组织中的各项指标也呈现显著性差异（P＜0.05），但效果相比黄芪组稍差。结论黄芪穴位注射对D-半乳糖引起的皮肤衰老具有一定的预防与延缓作用。

黄芪；穴位注射；D-半乳糖；皮肤衰老

皮肤衰老是由自然因素或非自然因素造成的皮肤老化现象，主要发生在皮肤的主要成份胶原蛋白及弹性蛋白衰退时。预防和延缓皮肤衰老一直是医学美容界研究的热点和焦点。中医学研究表明黄芪及其皂苷类成分具有显著的免疫调节、抗炎、抗氧化、抗缺血性脑损伤、抗衰老等作用［1］。近年来，一些学者开始重视关于黄芪抗衰老的研究，而目前对于黄芪注射液抗衰老效果研究较少。本研究通过观察黄芪注射液穴位注入足三里对D-半乳糖引起的小鼠衰老模型皮肤组织中超氧化物歧化酶（super oxide Dismutase，S0D），羟脯氨酸（Hydroproline，HYP）及丙二醇（malondialdehyde，MDA）含量的影响，进行黄芪注射液治疗和延缓皮肤衰老作用的研究。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物：选取3月龄SPF级健康雌性ICR小鼠60只，体质量（20±2）g，购自北京维通利华动物实验中心，生产许可证号：SCXK（京）2014-0001。小鼠饲养环境为：室温21～26℃，相对湿度40%～75%，自由摄食，饮水，每日通风2次。

1.1.2 药品与试剂：药品：黄芪注射液由哈尔滨圣泰生物制药有限公司生产，国药准字Z23020821。D -半乳糖由INALCO公司生产。主要试剂：超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醇（MDA）和羟脯氨酸（HYP）测定试剂盒均来自上海信裕生物科技有限公司。

1.1.3 仪器设备：分光光度计，北京普析仪器有限公司，TU-1901；电子分析天平，上海垒固仪器有限公司，BS224S；涡旋混合器，美国安胜科技公司，VM-2500；高速冷冻离心机，太仓市华美生化仪器厂，TGLL-18K；电动匀浆机，德国IKA公司，T10basic。

1.2 方法

1.2.1 分组与造模：实验小鼠在实验室适应性喂养1周，随机分为4组：即正常组、模型组、黄芪注射组和生理盐水注射组，每组15只。除正常组以外，剩余3组小鼠每天皮下注射D-半乳糖（125 mg·kg-1）［2，3］，连续注射6周。与正常组相比，被注射小鼠出现记忆功能明显下降，血清中丙二醛（MDA）含量明显增加，超氧化物歧化酶（SOD）活力和羟脯氨酸（HYP）含量显著降低，即为造模成功。

1.2.2 给药：造模21 d后，在黄芪注射组小鼠后肢膝关节下方腓骨小头下约5 mm处［4］，即两侧足三里穴分别注射黄芪注射液0.01 mL。生理盐水注射组小鼠在相同穴位注射等量生理盐水，模型组和正常组不进行注射，以上操作每天1次，共进行21 d后，取材进行指标测定。

1.2.3 取材与指标测定：全部小鼠腹主动脉采血3～5 mL，不抗凝，放入采血管中常温静置2 h后，经4 000 r/min，4℃离心10 min，分离血清。采血完成后，用8%硫化钠进行小鼠背部皮肤脱毛，断颈处死全部小鼠，立即剪下脱毛处全部皮肤并去除皮下脂肪，使用预冷的生理盐水清洗至无血色，然后切成碎块，使用电动匀浆机在冰水中进行操作，操作时间10 s/次，共进行3次，每次间隔30 s。加入预冷生理盐水，制成10%的组织匀浆。

严格按照SOD、MDA和HYP测定试剂盒说明书对小鼠血清和皮肤组织匀浆中的SOD活性、MDA和HYP含量进行测定，SOD活性测定采用黄嘌呤氧化酶法，MDA含量测定采用硫代巴比妥酸染色法，HYP含量测定采用消化法。

1.3 统计学分析

2 结果

如表1、表2所示，D-半乳糖模型组小鼠血清和皮肤的SOD活力与HYP含量较正常组显著降低（t分别为7.657，6.985，7.825，6.856；P＜0.01），MDA含量较正常组显著升高（t=7.231，6.523；P＜0.01）。黄芪注射组小鼠血清和皮肤的SOD活力、HYP含量与模型组相比均显著升高（t分别为6.768，5.874，6.712，5.735；P＜0.01），MDA含量较模型组显著降低（t分别为6.124，5.764；P＜0.01）。与模型组比较，生理盐水注射组小鼠血清和皮肤的SOD活力、HYP含量也明显升高（t分别为4.654，3.958，4.607，3.624；P＜0.05），MDA含量也明显下降（t分别为4.821，3.846；P＜0.05），但SOD、HYP含量提高与MDA含量降低效果比黄芪注射组稍差。由此可见，4个组小鼠的血清和皮肤组织中的SOD活力、MDA和HYP含量的变化趋向基本相同。

3 讨论

衰老与抗衰老是当今医学研究和讨论的热点。随着年龄的增长，自由基不断增加，致使机体内抗氧化能力和免疫功能不断下降，使具有合成胶原能力的成纤维细胞受损，影响胶原蛋白合成和胶原纤维合成，最终导致皮肤出现松弛、缺乏弹性、皱纹增多等老化现象［5］。皮肤超氧化物歧化酶SOD在机体抗氧化、抗损伤、抗衰老等方面起着重要作用［6］，SOD减少会导致体内氧自由基不能完全清除，短期内引发衰老。羟脯氨酸（HYP）是皮肤组织中的主要成分——胶原蛋白中的特有氨基酸，在自由基作用下脯氨酸不能羟化为羟脯氨酸（HYP），引发羟脯氨酸（HYP）含量下降，导致皮肤僵硬、无光泽［7］。自由基累积会导致脂质过氧化反应形成脂质过氧化物，其分解产物丙二醛（MDA）使真皮结构发生大分子交联，使真皮纤维扭曲、增粗、紊乱，皮肤外观粗糙、增厚［8］。因此，SOD活力、HYP和MDA含量与机体的抗氧化能力及自由基的清除密切相关［9］。

表1 各组小鼠皮肤组织S0D活性与HYP、MDA含量比较（）Tab.1 Comparison of S0D，HYP and MDA activity in mouse skin（）

表1 各组小鼠皮肤组织S0D活性与HYP、MDA含量比较（）Tab.1 Comparison of S0D，HYP and MDA activity in mouse skin（）

Compare to normal group：1）P＜0.01；compare to model group：2）P＜0.01；compare to model group：3）P＜0.05.

Group n SOD（U/mg） HYD（μg/mL） MDA（μg/mL）NormaI group 15 38.87±6.43 14.32±1.88 16.97±1.79 Model group 15 25.76±5.581） 10.87±0.941） 22.54±1.631）Astragalus group 15 33.92±6.792） 13.96±1.842） 19.05±1.582）Saline group 15 31.24±5.923） 12.64±1.433） 16.31±1.823）

表2 各组小鼠血清S0D活性与HYP、MDA含量比较（）Tab.2 Comparison of S0D，HYP and MDA activity in mouse serum（）

表2 各组小鼠血清S0D活性与HYP、MDA含量比较（）Tab.2 Comparison of S0D，HYP and MDA activity in mouse serum（）

Compare to normal group：1）P＜0.01；compare to model group：2）P＜0.01；compare to model group：3）P＜0.05.

Group n SOD（U/mg） HYD（μg/mg） MDA（μg/mL）NormaI group 15 21.64±3.57 4.54±1.71 5.86±1.57 Model group 15 12.83±2.461） 1.89±0.871） 9.53±1.851）Astragalus group 15 16.05±2.812） 3.85±1.622） 6.14±1.232）Saline group 15 14.57±3.133） 2.71±1.233） 7.42±1.643）

由于人类的衰老周期比较漫长，因此相关研究者根据衰老的机制建立了许多动物衰老模型。目前，应用最多的是D-半乳糖所致的亚急性衰老模型，它可引起皮肤、心、肝、肾、脑等重要器官的代谢异常，与人类自然衰老的表现一致［10］。有学者研究表明连续注射D-半乳糖可使小鼠体内自由基不断累积，减弱其体内的抗氧化防御能力和氧自由基清除能力，短期内引发衰老［11］。本研究中D-半乳糖模型组小鼠血清和皮肤的SOD活力与HYP含量较正常组显著降低（P＜0.01），MDA含量较正常组显著升高（P＜0.01），与上述结果基本一致。

黄芪作为补益药，在抗衰老方面能够起到［12］调节免疫功能，抑制细胞过度的凋亡［13］，抗氧化，清除自由基［14］的作用。足三里穴是“足阳明胃经”的主要穴位之一，它具有调理脾胃、补中益气、通经活络、疏风化湿、扶正祛邪之功能，经常按摩刺激对于抗衰老延年益寿大有裨益。足三里穴位注射是用注射器的针头代为针具刺入穴位，在得气后注入药液来治疗疾病的方法。它是把针刺与药理及黄芪注射液对穴位的渗透刺激作用结合在一起发挥综合效能进而提高疗效。本研究中黄芪注射组小鼠血清和皮肤的SOD活力与HYP含量与模型组相比均显著升高（P＜0.01），MDA含量较模型组显著降低（P＜0.01）。同时发现，生理盐水注射组小鼠血清和皮肤的SOD活力、HYP含量也明显升高（P＜0.05），MDA含量也明显下降（P＜0.05），表明足三里穴位的针刺作用，也有一定的皮肤抗衰老效果，但比较黄芪注射组稍差，两组在皮肤MDA含量与血清HYP、MDA含量的差异具有统计学意义（P＜0.05）。

综上所述，将黄芪注射液注射到足三里穴位，产生中药黄芪和针刺的协同作用可以更加有效地防治皮肤衰老，但黄芪抗皮肤衰老的有效成分及其深层作用机制还需进一步研究。

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（编辑 裘孝琦）

Observation ofthe Efficacy of Astragalus Injection in Skin ofAging Mice Induced by D-galactose

LIAO Yong-mei，XIONGXia

（DepartmentofDermatology，Affiliated HospitalofLuzhou MedicalCollege，Luzhou 646000，China）

ObjectiveTo investigate the efficacy of acupoint injection of Astragalus on contents of SOD，HYP and MDA in skin of aging mice induced by D-galactose.MethodsThe mice were randomly divided into normal group，model group，Astragalus group，and saline group（n=15）. Exceptforthe normalcontrolgroup，the mice ofothergroupswere treated with continuous subcutaneousinjection ofD-galactose to establish mice aging model.The Astragalus group mice was injected with 0.01mL Astragalus in Sanzuli acupoint per day，The saline group mice received an injection ofsame amountofsaline.SOD，HYP and MDAchanges in the skin tissue and serum were evaluated after21 days.ResultsAllthe index in the skin tissue and serum showed significant difference（P＜0.01）between model group mice and normal control group.Compared with model group，SOD activity and MDA content in the skin tissue and serum of the Astragalus group mice were significantly raised，HYP content was significantly reduced（P＜0.01）.There also were significant differences of these index between the saline group mice and the model group（P＜0.05），but the effect was not as good as the Astragalus group mice.ConclusionAcupoint Injection of Astragalus can prevent and protect against skin aging induced by D-galactose.

astragalus；acupoint injection；D-galactose；skin aging

R285.5

A

0258-4646（2015）08-0721-04

廖勇梅（1973-），女，讲师，博士.

熊霞，E-mail：qqzz000110@163.com

2015-01-25

网络出版时间：