结肠腺癌患者术后组织中NQO-1、Cath-D和Ki-67的表达及意义

屈中玉 (南阳市中心医院肿瘤内科一病区，河南 南阳 473009)

结肠腺癌患者术后组织中NQO-1、Cath-D和Ki-67的表达及意义

屈中玉 (南阳市中心医院肿瘤内科一病区，河南 南阳 473009)

目的 应用免疫组化方法检测结肠腺癌中NADPH:醌氧化还原酶(NQO)-1、组织蛋白酶(Cath)-D和Ki-67增殖指数(Ki-67)的表达，分析其关系及临床意义。方法 经病理确诊的124例结肠腺癌术后组织及临床资料作为观察组，80例上皮内瘤变的结肠黏膜组织作为对照组，80例正常结肠黏膜组织作为正常对照组，应用免疫组化方法检测三组中NQO-1、Cath-D和Ki-67的表达。结果 三组中NQO-1、Cath-D和Ki-67表达的阳性率差别有统计学意义，观察组中NQO-1、Cath-D和Ki-67的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、TNM分期、脉管浸润、淋巴结转移密切相关。相关性分析显示NQO-1和Ki-67、Cath-D和Ki-67的表达均具有正相关性。结论 结肠腺癌术后组织中NQO-1、Cath-D和Ki-67均高表达，NQO-1和Cath-D均与Ki-67的表达具有协同作用，对促进肿瘤的发生、进展和增殖有一定作用。

结肠腺癌;NQO-1;Cath-D;Ki-67;免疫组化

结肠腺癌病变形成及发展过程中多种蛋白表达失调，并对肿瘤的微环境有重要影响。NADPH:醌氧化还原酶(NQO)-1是一种黄素酶，在多种肿瘤中高表达，也是促进肿瘤进展的重要蛋白〔1，2〕。组织蛋白酶(Cath)-D是与肿瘤生长、增殖和侵袭相关的蛋白，在多种肿瘤中高表达，可以加速肿瘤恶变和浸润，同时参与胚胎发育、肿瘤形成及血管生成过程〔3，4〕。Ki-67增殖指数与肿瘤细胞增殖状态相关，标记肿瘤细胞增殖的特异性强〔5〕。本文应用免疫组化方法检测结肠腺癌术后组织中NQO-1、Cath-D和Ki-67的表达，探讨其关系及临床价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2010年1月至2012年12月在我院行结肠腺癌根治的手术患者共124例作为观察组，统计患者临床资料并留取术后的蜡块组织。完全符合WHO中的具体诊断标准。其中男70例，女54例;年龄54～78岁，平均67.6岁。高分化60例，中分化30例，低分化34例。术前均未进行放、化疗。80例上皮内瘤变的结肠黏膜组织作为对照组，其中男40例，女40例，年龄56～77岁，平均66.8岁。选取观察组中距离肿瘤边缘＞3 cm的正常结肠黏膜组织80例作为对照组，其中男41例，女39例;年龄55～76岁，平均66.5岁。三组一般资料无明显差别。

1.2 NQO-1、Cath-D和 Ki-67表达的检测 NQO-1、Cath-D和Ki-67抗体均为浓缩液，依不同比例进行稀释后应用免疫组化SP法、DAB染色进行预实验，并设阳性对照和阴性对照。选择最理想的配比浓度进行正式实验。正式实验应用免疫组化SP法。严格按说明书操作，严格质控。

1.3 NQO-1、Cath-D和Ki-67阳性的判定方法 NQO-1、Cath-D的阳性表达均位于细胞质中(少数表达于细胞核中的均不计数)，Ki-67阳性表达均位于细胞核中，以染成棕黄色颗粒为阳性细胞，计数10个400倍视野，取阳性细胞的平均值，NQO-1、Cath-D以阳性率≥5%为阳性，以阳性率＜5%为阴性。Ki-67以阳性率≥25%为阳性，以阳性率＜25%为阴性。

1.4 统计学方法 应用SAS6.12软件进行χ2检验。

2 结果

2.1 3 组中NQO-1、Cath-D和Ki-67表达阳性率的比较 正常对照组、对照组和观察组中NQO-1、Cath-D和Ki-67表达的阳性率有增高趋势。见表1。

2.2 观察组不同临床特征中NQO-1、Cath-D和Ki-67表达阳性率的比较 观察组中NQO-1、Cath-D和Ki-67的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、TNM分期、脉管浸润、淋巴结转移密切相关。见表2。

表1NQO-1、Cath-D和Ki-67在3组中表达的比较〔n(%)〕

表2 观察组不同临床特征中NQO-1、Cath-D和Ki-67表达阳性率的比较〔n(%)〕

2.3 观察组中NQO-1、Cath-D和Ki-67表达的相关性 观察组中 NQO-1和 Ki-67(r=0.49，P=0.011 3)、Cath-D 和 Ki-67(r=0.48，P=0.020 9)的表达具有正相关性，而NQO-1和Cath-D的表达未见明显相关性(P＞0.05)。

3 讨论

结肠腺癌是一种上皮性肿瘤，居男性肿瘤的第四位，女性肿瘤的第三位，其发病涉及多种因素，如遗传易感性、基因突变、增生失调等。多种肿瘤相关基因异常表达是促进肿瘤进展的重要因素。NQO-1蛋白是一种胞质黄素酶，其基因定位于16q22染色体，在正常组织中有微量表达〔6，7〕。有研究认为不同NQO-1基因亚型编码的酶类呈现不同的活性〔8〕。如由TT纯合子诱导的NQO-1活性失调，可以引起肝细胞对外源性致肿瘤物质的解毒功能下降〔9〕。也有研究则认为NQO-1可以作为一个氧化应激反应调节因子，对恶性肿瘤的进展起一定的调节作用〔8〕。李琰等〔10〕认为 NQO-1的表达变化，可以使机体对环境致癌因素的解毒功能降低，使细胞易受到氧化损伤，增加对化学致癌物引起肿瘤的易感性。Cath-D是一种溶酶体天冬氨酸蛋白酶，参与肿瘤的发生、侵袭和转移〔11，12〕，Cath-D还可以作为雌激素调节的溶酶体蛋白酶〔13〕，调节肿瘤细胞的增殖和细胞间的黏附作用〔14，15〕。NQO-1、Cath-D 均可能对肿瘤的恶变有一定影响。

本实验结果提示NQO-1、Cath-D、Ki-67三种蛋白在肿瘤发生过程中起重要的促进作用，NQO-1、Cath-D可能通过促进Ki67增殖发挥重要的促进肿瘤进展作用。三种蛋白参与肿瘤由幼稚到成熟的内在过程，也显示出三种蛋白在细胞恶变起始过程中起的作用。三种蛋白参与肿瘤的生长及侵袭全过程，即当NQO-1、Cath-D和KI-67高表达时，引起肿瘤细胞呈蟹足样生长，对周围的破坏能力增强，对局部微环境的影响大。三种蛋白参与肿瘤的进展，尤其是参与肿瘤的淋巴道播散和远处播散的过程中。TNM分期是临床判断肿瘤生物学行为和预后的重要指标，因此联合检测NQO-1、Cath-D和Ki-67高表达可能预示着肿瘤的不良预后，后续实验将关注患者生存，以证实此观点。NQO-1、Cath-D在对肿瘤影响过程中，全程参与了细胞的增殖过程，尤其是失控性增殖反应过程〔16，17〕。近来也有研究显示NQO-1激活后，凋亡信号传导受到影响，正常细胞的不断增生繁殖，而凋亡受到阻滞，细胞逐渐恶变〔18〕。因此NQO-1也可能是调节凋亡的重要因子。有学者认为NQO-1具有癌基因的许多特征，如诱导非锚定依赖性细胞周期进展等生物学行为过程〔19〕。

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R735.3

A

1005-9202(2015)09-2435-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2015.09.057

屈中玉(1972-)，男，硕士，副主任医师，主要从事恶性肿瘤基因靶向及综合治疗研究。

〔2013-11-21修回〕

(编辑 苑云杰)