GS环保固定与传统固定染色在冷冻切片中应用

2015-01-30林红

中国医药科学 2014年20期

林红

[摘要]目的探讨GS环保固定在冷冻切片中应用价值。方法选取标本300例，150例进行GS固定，150例使用传统固定液，比较两组在使用上出现刺激性气味、固定效果不佳及染色效果不佳的比例，并对骨组织脱钙和肺癌TIF-1+固定效果进行比较。结果 GS固定染色套液临床使用上出现刺激性气味、固定效果不佳及染色效果不佳的比例显著低于常规组（P<0.05）。结论 GS环保套液效果满意，具有在病理技术工作中推广应用的价值。

[关键词]GS环保固定；传统固定；冷冻切片

[中图分类号]R446.8 [文献标识码]B [文章编号]2095-0616（2014）20-139-03

GS environmental fixed and traditional fixed for stained in frozen sections

LIN Hong

Department of Pathology，the First Peoples Hospital of Shenyang City，Shenyang 110041，China

[Abstract]Objective To study the effect of GS environmental fixed and traditional fixed for stained in frozen sections. Methods 300 cases specimen were choosed，150 parts were used GS environmental fixed，150 cases were used conventional fixed，then pungent odor appeared and poor staining of fixed effects and the effect of the proportion of lung cancer and bone decalcification and TIF-1+ fixed effects in the two groups were comparedd. Results Appear pungent odor liquid fixed and stained for clinical use on GS sets，poor results and poor staining of fixed effects were significantly lower than conventional group（P<0.05）. Conclusion GS environmental fixed is satisfactory，it can huge promotion and application of technical work in the pathological value.

[Key words]GS environmental fixed；Conventional fixed；Frozen sections

医生可利用冷冻切片进行准确诊断，而固定与染色是决定冷冻切片是否能达到高水准的关键，所以应重视固定液与染液的选择和应用。目前常见的固定液类目广泛，但都达不到环保标准，且部分固定液，固定耗时长，显示效果差，对比度差，且易造成细胞肿胀、变形、空泡，易导致漏诊、误诊，延误治疗[1]。同时95%乙醇长时间固定无法保证组织细胞的形态，将固定时间缩短后，使用GS染色套液染色能够避免以上缺点，制片效果良好。传统固定液HE套液虽具有较好的临床效果，但其包含的二甲苯会导致人体神经系统、造血系统受损，且汞成分的使用也达不到环保排放的要求[2]。故本研究主要采用GS固定染色套液对病理切片进行冰冻切片处理，并与传统固定染色套液进行比较，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机选取2013年6～12月我院手术标本300例，其中有甲状腺、肝、肾、子宫、输卵管、脑、卵巢以及肠道等，随机选择其中150例进行GS固定染色套液固定（哈尔滨格林标本技术开发有限公司研制并生产），另150例则使用传统固定液（主要成分为二甲苯）进行固定。

1.2 GS固定染色套液制片法及使用制剂

通过无醛型固定液对组织标本进行浸泡，并分别于固定后1、3、6、12、24h提取组织标本进行处理，使用的设备为SHANDON全自动病理组织固定切片机，依次使用组织固定剂、医用酒精、无水酒精、组织脱水剂、组织透明剂、浸蜡处理以及石蜡包埋等过程。对病理标本进行切片、HE染色、免疫组化染色和荧光原位杂交检测等。

1.3 研究方法及观察指标

所有标本进行编号，并按照数字随机法分为两组，比较两组使用上出现刺激性气味、固定效果不佳及染色效果不佳的比例，并对骨组织脱钙和肺癌TIF-1+固定效果进行比较。

1.4 统计学处理

应用SPSS13.0进行，计量资料以（x±s）表示，两组间均数的比较使用t检验，组间率的比较采用x2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

GS固定染色套液临床使用上出现刺激性气味、固定效果不佳及染色效果不佳的比例显著低于常规组（P<0.05）。见表1，图1～4。

3 讨论

对手术标本进行组织处理时，组织固定会直接影响染色的效果。传统的固定组织以甲醛为主。它能有效穿透组织，较好的保持了组织原有形态，且使用成本低，所以至今仍被广泛应用。甲醛的主要缺点：（1）挥发性强，刺激性和腐蚀性很强，环境危害严重，且难以防护。研究表明[3]，甲醛接触皮肤会引发皮肤过敏等症状。长期使用甲醛还会诱发慢性呼吸道疾病、癌症发生，白细胞数量减少，记忆力和智力下降。（2）长时间存放的甲醛会部分转化为三聚甲醛，导致固定组织标本效果不佳[4]；（3）甲醛易氧化成甲酸，在进行固定染色时会使标本酸化，导致染色效果不佳[5]；在对陈旧组织固定时，易在组织内形成甲醛色素，从而影响病理诊断；（4）无法固定肝糖原和尿酸；（5）废液需要进行出来才能排放，处理成本较高。（6）醛类固定液在处理标本时会引发组织内蛋白质交联，不利于DNA的保存。随着对实验室环境安全要求的提高，研发没有毒性的甲醛替代品已经迫在眉睫[6]。目前国外已经在这方面有相关研究报道，但国内仍处于落后状态[7]。本文选择了国产GS固定液。GS组织标本固定脱水试剂不但能够有效软化组织，且穿透性高。在固定组织的同时还能进行脱水和脱脂。酸性溶液能够较好的保存DNA[8]。与常规制片效果相似，符合某些肿瘤分子生物学研究要求。因此其能较好应用于组织标本，无毒无害，符合环保要求。

本研究常规固定法使用的二甲苯被用于传统组织处理和染色中，它挥发性强，对人体危害极大。会严重刺激中枢神经和植物神经，长时间接触会引发头昏目眩、肢体颤抖、免疫功能减退等，并有致癌效果。二甲苯还会对环境造成严重的污染，如大量废弃二甲苯进入下水道会导致城市水污染。为克服二甲苯的缺陷，有学者尝试使用替代品：如脱色汽油、硬脂酸、异丙醇、松节油等，但最终效果仍然不理想。本组选择的GS环保型固定染色套液，这些试剂都是无非苯无毒型，完全避免了二甲苯造成的人体伤害及环境污染。GS脱蜡剂，脱蜡完全，时间少。GS透明剂穿透组织能力强，处理组织触感好，即使是长时间浸泡组织标本也不会引发收缩和硬化现象，不会脆化组织。本研究如图1～4所示，图2及图4相对于图1和图3，其示片更为清晰，且所耗时间短，临床诊断更明确。

GS脱水液能做到恰当脱水，不会出现脱水不足或过度的问题，可同时处理多个大小组织。GS环保套液无醛、无苯、不易挥发，生物降解难度低，不会造成环境污染[9]。其主要特点：（1）能轻易透过组织，节省脱水时间；（2）不会破坏组织形态学结构，保持细胞膜完好；（3）在固定、脱水、脱脂和硬化方面表现良好，不会造成组织收缩过度、细胞空泡消失与核固缩小等问题[10]；（4）保持了大体标本的触感，有助于有针对性的分离并切取组织块，避免脂肪组织标本出现粘滑感及粘稠性，能够快速有效清洁[11-12]；（5）避免了组织抗原与蛋白质DNA的破坏；（6）DNA和RNA保存完整，利于细胞显示和生物学研究[12]；（7）废液回收处理方便；（8）染色步骤简化，节省时间。相比传统方法制片，GS套液环保效果令人满意，适用于临床病理诊断，避免了甲醛和二甲苯产生的负面影响，达到了实验室环保标准，在病理技术工作中推广应用的价值巨大。

[参考文献]

[1]龙建洲.异丙醇替代二甲苯在组织透明中的应用[J].检验医学与临床，2010，7（2）：161-162.

[2]田玉旺，朱红艳，李琳，等.GS环保试剂在病理制片技术中的应用[J].诊断病理学杂志，2011，18（4）：312-313.

[3]寇雪梅，赵玉莹.GS环保套液在病理技术工作中的应用[J].黑龙江医学，2012，36（9）：676-678.

[4]田玉旺，朱红艳，李红霞，等.GS无醛固定液与甲醛固定液对免疫组化染色结果的影响[J].诊断病理学杂志，2013，20（6）：363-365.

[5]管桂杰，代海平，李丽娟.GS组织标本制备及切片染色技术的应用体会[J].临床工程，2011，26（3）：104.

[6]高蓉梅，彭风翔，李永春.生物制片透明剂取代二甲苯在病理制片中的应用[J].诊断病理学杂志，2009，12（2）：147.

[7]郭以河，张闽峰，盂加榕，等.硬脂酸替代二甲苯在组织透明浸蜡过程中的应用川[J].实用医技杂志，2008，15（9）：1124-1126.

[8]杨莹，魏兵，步宏.组织固定和处理对免疫组织化学染色结果的影响及其标准化探讨[J].中华病理学杂志，2009，38（12）：852.

[9]周会芹，杨江辉，余琦，等.不同组织固定液对免疫组化结果的影响[J].诊断病理学杂志，2009，16（6）：478.

[10]谢永强，郭蕾，刘秀云，等.无醛固定液在病理技术中的应用[J].诊断病理学杂志，2011，18（2）：161.

[11]沈贵华，王知博，王冰凝，等.GS固定染色套液与传统固定染色套液在冷冻切片制备中的比较[J].诊断病理学杂志，2013，12（6）：91.