黄花蒿植株不同组织中挥发油及青蒿素的含量比较

吴蜀瑶，李敏，王佳黎

（1.江西中医药大学姚荷生研究室，南昌330004；2.成都中医药大学，成都611137；3.四川大学，成都610065）

黄花蒿植株不同组织中挥发油及青蒿素的含量比较

吴蜀瑶1，李敏2，王佳黎3

（1.江西中医药大学姚荷生研究室，南昌330004；2.成都中医药大学，成都611137；3.四川大学，成都610065）

青蒿为菊科植物黄花蒿的干燥地上部分，性寒，味苦、辛，主治阴虚发热、暑热外感、疟疾、湿热黄疸[1-2]。《中华本草》除青蒿外，还收录了青蒿子与青蒿根[3]，二者来源与青蒿相同，但药用部位不同。文献报道青蒿子可治疗创伤和痈肿[4]。但关于青蒿根及青蒿子化学成分、药理作用等方面的系统研究却未见报道。

青蒿素是从黄花蒿中提取的抗疟活性成分，关于该成分提取分离、药理作用等方面的研究层出不穷，而关于其在黄花蒿中分布规律的研究却少有报道，且主要集中在植株不同部位的叶片上，认为黄花蒿叶片中青蒿素含量从上至下逐渐减少，却忽视了黄花蒿花、子等组织的研究[5-6]。除青蒿素外，黄花蒿挥发油因有多种生物活性而引起学者的重视[7]，其具有抗菌、解热、止咳、平喘等药理作用，可治疗上呼吸道感染、神经性皮炎及皮肤真菌病等疾病[8-9]。本实验拟通过比较黄花蒿叶、花、茎、子、根中青蒿素和挥发油的含量，定量分析这两类成分在各组织的分布情况，为更好地利用和发掘该药材资源提供实验依据，同时为黄花蒿子和根的药用价值开发提供参考。

1 材料

prostar210型高效液相色谱仪（美国瓦里安有限公司），UV1100型紫外-可见分光光度计（上海天美科学仪器有限公司），BP121S型电子天平（德国赛多利斯公司）。药材采自四川省资阳市安岳县及成都市温江区，经成都中医药大学中药鉴定教研室李敏教授鉴定为菊科植物黄花蒿Artemisia annua的干燥全株；青蒿素对照品（中国食品药品检定研究院，批号100202-200402），甲醇为色谱纯，水为纯净水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 挥发油含量的测定

将黄花蒿子、根、叶、花、茎分别粉粹过二号筛，精密称取50℃恒温干燥后的黄花蒿子、根、叶、花、茎样品各约100 g，按2010年版《中国药典》一部附录XD挥发油测定法中甲法进行试验，计算挥发油含量，结果见表1。

2.2 青蒿素的含量测定

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验 Welch Materials XB-C18色谱柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm），流动相磷酸盐缓冲液-甲醇（40∶60），检测波长260 nm，流速0.8 mL·min－1，柱温25℃，进样量10 μL。在该条件下，青蒿素色谱峰与相邻色谱峰达到基线分离，分离度>1.5，理论塔板数按青蒿素峰计>5000，见图1。

2.2.2 对照品溶液的制备 采取柱前衍生化法测定，通过单因素试验考察了衍生化反应的温度、NaOH质量分数及反应时间，确定了对照品溶液的制备方法。精密称取青蒿素对照品25.62 mg置于25 mL量瓶中，用95%乙醇溶解并稀释至刻度；精密量取10 mL至100 mL量瓶中，加入0.2% NaOH溶液40 mL，于25℃恒温水浴中反应60 min，取出，冷却至室温，加0.4%乙酸溶液稀释至刻度，摇匀，得102.48 mg·L－1对照品溶液。

2.2.3 线性范围考察 精密吸取对照品溶液0.01，0.5，1，2，5，10 mL，分别置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得系列对照品溶液，按2.2.1项下色谱条件测定，记录色谱图，以进样量为横坐标、峰面积为纵坐标，得回归方程Y = 1.957 × 107X + 2.750 × 104（r = 1.0），结果表明青蒿素在1.025 × 10－3～1.025 μg与峰面积呈良好线性关系。

2.2.4 供试品溶液的制备 在预试验基础上，精密称取药材粉末（过五号筛）约5.0 g，加入石油醚（60～90℃）60 mL，回流提取2 h，提取液浓缩成浸膏，加95%乙醇溶解，过滤并转移至50 mL量瓶中，加95%乙醇稀释至刻度。精密量取该溶液5 mL至50 mL量瓶中，按2.2.2项下方法自“加入0.2% NaOH溶液20 mL”至“摇匀”操作，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.2.5 精密度试验 精密吸取 102.48 mg·L－1青蒿素对照品溶液，按 2.2.1项下色谱条件连续进样 6次，计算青蒿素峰面积的RSD1.3%，表明仪器精密度良好。

2.2.6 重复性试验 取同一批样品，平行6份，按2.2.4项下方法制备供试品溶液，按2.2.1项下色谱条件测定，计算青蒿素平均质量分数1.6192 mg·g－1，RSD 1.5%，表明该方法重复性良好。

2.2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液，室温密闭保存，分别于0，1，2，4，8，10 h按2.2.1项下色谱条件进样，计算青蒿素峰面积的RSD 1.3%，表明供试品溶液在室温下密闭保存10 h稳定性良好。

2.2.8 回收率试验 精密称取已知含量的黄花蒿全株样品粉末（过五号筛）9份，每份约1.0 g，分别精密加入102.48 mg·L－1青蒿素对照品溶液13，13，13，16，16，16，19，19，19 mL，挥干溶剂，按2.2.4项下方法制备供试品溶液，按2.2.1项下色谱条件测定，计算青蒿素的回收率95%～105%，平均回收率100.34%，RSD 2.3%，说明该检测方法准确可行。

2.2.9 样品测定 精密吸取青蒿素对照品溶液和黄花蒿植株不同组织（子、根、叶、花、茎）供试品溶液各10 μL，按2.2.1项下色谱条件测定，计算青蒿素含量，结果见表1。

3 讨论

由于青蒿素分子结构内无共轭基团，仅在紫外区203 nm处有较弱的末端吸收。与碱反应后，分子内过氧桥结构被破坏，重排形成共轭结构，产物在260 nm处有最大吸收，故本文采取柱前衍生化法测定青蒿素含量。本文建立了青蒿素的HPLC含量测定方法，结果显示该方法准确度、灵敏度及稳定性均较好，测定方法可靠，可用于黄花蒿的质量控制，测定结果能客观反映黄花蒿各组织中青蒿素的含量。

由表1可知，黄花蒿植株各组织挥发油含量排序为花>叶>子>根>茎，青蒿素含量排序为花>子>叶>根>茎，均以黄花蒿花中含量为最高，且与其他组织中挥发油和青蒿素含量差异显著，印证了黄花蒿的最佳采收季节应为开花时期。

近年研究发现黄花蒿挥发油能用于治疗神经皮炎、真菌等疾病，能诱导人肝癌细胞发生凋亡，并具有明显的抑菌活性和抗氧化能力；青蒿素可抗寄生虫，包括疟原虫、血吸虫，而且还具有显著的抗炎、调节免疫和抗肿瘤等药理作用[10]。本文通过比较四川产黄花蒿植株不同组织中挥发油和青蒿素的含量，可为全面了解这两类成分在黄花蒿植株中分布情况提供实验数据，同时也完善了药材青蒿子和青蒿根的化学成分研究内容，为黄花蒿药用资源的有效开发和利用提供参考。

摘编自《中国实验方剂学杂志》2015年第1期：42～44页，图、表、参考文献已省略。