注射用双黄连(冻干)总糖及总皂苷的含量测定

栾 兰 任嘉鹏 王钢力 林瑞超

1.北京医药集团职工大学，北京 100079；2.北京诺信达医药企业管理有限公司，北京 100020；3.中国食品药品检定研究院，北京 100050；4.北京中医药大学，北京 100029

注射用双黄连(冻干)总糖及总皂苷的含量测定

栾 兰1任嘉鹏2王钢力3林瑞超4

1.北京医药集团职工大学，北京 100079；2.北京诺信达医药企业管理有限公司，北京 100020；3.中国食品药品检定研究院，北京 100050；4.北京中医药大学，北京 100029

目的：建立注射用双黄连(冻干)中总糖、总皂苷的含量测定方法。方法：以葡萄糖为对照，采用硫酸-蒽酮法制备总糖的有色糠醛衍生物，利用分光光度法测定总糖的含量；以齐墩果酸为对照，香草醛-浓硫酸显色，测定总皂苷的含量。结果：总糖含量测定方法的回收率为95.50%～101.39%；总皂苷含量测定方法的回收率在115.90%～117.79%。结论：该方法准确、简便、重现性好，进一步完善了注射用双黄连(冻干)的质量控制，为提高其质量标准提供了实验依据。

注射用双黄连(冻干)；总糖；总皂苷；分光光度法

双黄连为中药抗菌抗病毒的著名方剂，注射用双黄连(冻干)是由双黄连处方(金银花、黄芩、连翘)中药经提取、精制、冷冻干燥制备的供静脉滴注的中药粉针剂，是一种广谱的抗病毒药物，对呼吸道合胞病毒、流感病毒、疱疹病毒、腺病毒及麻疹病毒等均具有明显的抑制作用。注射用双黄连(冻干)质量标准收载于2005年版《中国药典》(一部)，内容包括处方、制法、性状、鉴别、检查、含量测定、功能与主治、用法与用量、规格等，并在增补本收载了指纹图谱检测项目[1-4]。在上述研究的基础上，利用分光光度法，测定注射用双黄连(冻干)中总糖和总皂苷的含量，进一步完善注射用双黄连(冻干)的质量控制，为提升其质量标准提供实验依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Agilent 8453紫外-可见分光光度仪；TOLEDO型电子天平(METTLER公司)；KQ=250 DE型医用数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；XMTD-6000水浴锅。

1.2 材料 葡萄糖对照品、齐墩果酸对照品均由中国药品生物制品检定所提供；注射用双黄连(冻干)(北京医药集团)；AB-8大孔树脂(天津兴南允能高分子技术有限公司)；水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 总糖的含量测定

2.1.1 供试品溶液的制备 分别取三批注射用双黄连(冻干)样品，加水溶解后经预先处理好的AB-8大孔树脂柱(内径2 cm，高度30 cm)，流速为1～2 ml/min，用水700 ml洗脱，浓缩洗脱夜，加水定容至50 ml，从中精密吸取0.5 ml，加水定容至5 ml，混匀，即得。

2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的葡萄糖对照品，加水稀释至50 ml，制成0.118 ml/min对照品溶液，即得。

2.1.3 线性关系的考察 分别精密吸取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml置于10 ml的具塞试管中，加水至2 ml，精密加入硫酸-蒽酮溶液(精密称取蒽酮0.1 g，加80 %的硫酸溶液100 ml使溶解，摇匀)6 ml，摇匀，置水浴中加热15 min，取出，放入冰浴中冷却15 min，以相应的试剂为空白，在625 nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标(A)，浓度为横坐标(C)进行线性回归，得回归方程A=4.8928C+0.1117，r=0.9992。表明样品在0.0236～0.1180 mg/ml范围内总糖含量与吸光度程的线性关系良好[5]。

2.1.4 精密度试验 取浓度为0.118 mg/ml的葡萄糖对照品溶液，精密吸取0.4 ml，按上述方法连续测量5次，记录吸光度，相对标准偏差(RSD)= 0.4 %，表明仪器的精密度良好。

2.1.5 重复性试验 按供试品溶液制备方法制备样品5份，测定吸光度值并计算总糖的含量，相对标准偏差(RSD)=1.1 %，表明本法的重复性良好。

2.1.6 加样回收试验 采用加标回收法，精密称取已知含量(231.84 mg/g)的注射用双黄连(冻干)样品为基底，精密加入葡萄糖对照品，依法制备样品，测定吸光度，结果样品的平均回收率为97.88%，RSD为3.8%。见表1。

2.1.7 稳定性的考察 按上述供试品溶液的制备方法制备样品溶液，分别于0、30、60、90、120、180 min测定吸光度值，相对标准偏差(RSD)=1.0 %，表明样品在3h内基本稳定。

2.1.8 样品的测定 按上述供试品溶液的制备方法制备样品溶液，依法测定，计算出同一企业3批注射用双黄连(冻干)样品的含量，结果见表2。

2.2 总皂苷的含量测定[6-7]

2.2.1 供试品溶液的制备 精密称取342.2 mg双黄连注射液(冻干)，加水10 ml，溶解后用正丁醇萃取4次，合并正丁醇减压蒸干，浸膏用甲醇溶解，过滤，定容至50 ml，精密吸取4 ml，用甲醇定容至10 ml，摇匀，即得。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的齐墩果酸对照品14.21 mg，置10 ml容量瓶中，加入甲醇溶解，摇匀，定容；精密吸取1 ml，用甲醇定容至10 ml，摇匀，即得。

2.2.3 线性关系的考察 分别精密吸取0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 ml对照品溶液，分别置10 ml具塞试管中，水浴挥干溶剂，依次加入0.5 ml 8%香草醛乙醇溶液和5.0 ml 72 %硫酸，摇匀后置60℃恒温水浴1 h，随后立即取出，置冰浴中冷却15 min，制成系列梯度溶液，以0.5ml 8 %香草醛乙醇溶液和5.0ml 72 %硫酸为空白对照，在536 nm测定吸光度，以吸光度为纵坐标(A)，浓度为横坐标(C)进行线性回归，得回归方程A=8.42063C+0.0068，r=0.9999。表明样品在0.0284～0.0853 mg测量范围内总皂苷的含量与吸光度程的线性关系良好。

2.2.4 精密度试验 取齐墩果酸对照品溶液(浓度为0.154 mg/ml)0.35 ml，按上述方法连续测量5次，记录吸光度值，相对标准偏差(RSD)=0.5 %，表明仪器的精密度良好。

2.2.5 重复性试验 取注射用双黄连(冻干)样品，按供试品溶液制备方法制备样品5份，测定吸光度值并计算总皂苷的含量，相对标准偏差(RSD)=1.0 %，表明本法的重现性良好。

2.2.6 加样回收试验 采用加标回收法，精密吸取已知含量总皂苷(5.22 %)的注射用双黄连(冻干)样品，按供试品溶液制备方法，同法制备5份，加入齐墩果酸对照品溶液(1.41 mg/ml)7.80 mg，测定吸光度并计算回收率，结果样品的平均回收率为116.84%，RSD为1.0%。见表3。

2.2.7 稳定性的考察 取注射用双黄连(冻干)样品适量，按供试品溶液制备方法制备样品，分别于0、30、90、150、240 min测定吸光度值，计算总皂苷含量，相对标准偏差(RSD)=1.0 %，表明样品在4.0 h内基本稳定。

2.2.8 样品的测定 按上述制备方法制备样品测定，计算出同一企业3批样品中总皂苷的含量，结果见表4。

3 讨论

总糖样品制备此过程中以一个柱体积为单位，洗至流出液无颜色为止，共收集7份样品，当收集到第5号样品时，98.04%的总皂苷已被洗脱，故选择洗脱剂是7倍柱体积洗脱。

取葡萄糖和齐墩果酸对照品溶液于紫外-可见分光光度仪下进行全波长扫描，结果显示葡萄糖在625nm处有最大吸收，齐墩果酸在536nm处有最大吸收，故确定检测波长分别为625nm和536nm。

实验对注射用双黄连(冻干)中总糖和总皂苷的含量进行测定，三批样品的总糖平均含量22.07%，总皂苷的平均含量5.23%。研究为注射用双黄连(冻干)质量标准的提高提供了参考依据。

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[S]．北京：化学工业出版社，2005：135．

[2]孙效珍，解建设，解鲁豫．双黄连的药理与临床应用[J]．黑龙江医药，2006，19(1)：54-55．

[3]刘树芬，张建华．双黄连粉针剂免疫调节作用的研究[J]．中国药房，1995，6(6)：32-33．

[4]李文杰．注射用双黄连与抗菌药物配伍稳定性研究概况[J]．中国药师，2002，5(5)：301-303．

[5]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[S]．北京：中国医药科技出版社，2010：174．

[6]梁贵娟，王文平，张义明，等．野木瓜总皂苷的含量的测定[J]．食品工业科技，2006，27(11)：192-195．

[7]木拉提·克扎依别克，哈木拉提·吾甫尔，库吐比江·阿木提．异常黑胆质成熟剂总糖和总皂苷含量测定[J]．科技导报，2009，27(9)：39-42．

Determination the Content of total sugar and total saponins in Shuanghuanglian Injection

LUAN Lan1REN Jiapeng2WANG Gangli3LIN Ruichao4

1.Staff and Workers University of Beijing Resources Pharmaceutical Group Limited, Beijing 100079, China; 2.Beijing NuoXinDa Pharmaceutical Enterprise Mananement Co.Ltd., Beijing 100020, China. 3.National institute for Food and Drug Control，Beijing 100050，China;4.Bejing university of Chinese Medicine, Beijing 100029, China

Objective To establish an determining method of total sugar and total saponins in Shuanghuanglian Injection．Methods Determination for the content of total sugar and total saponins were completed by colorimetric method. Results The recoveries of the methods were from 95.50% to 101.39% and from 115.90% to 117.79%. Conclusion The methods were accurate，easy and reproducible，the results provide valuable data for material and improving the standard control for its quality．

Shuanghuanglian Injection；total sugar；total saponins；colorimetric

栾兰(1978-)，女，博士，辽宁大连人，主要从事中药化学成分及质量控制研究，E-mail:luan9896@126.com

R284.1

A

1007-8517(2015)18-0010-02

2015.06.15)