MBL对绵羊肺炎支原体抗性的影响

文│金遵 赵宗胜 袁聪 于要升 曹少奇 雷小萍（新疆石河子大学动物科技学院）

MBL对绵羊肺炎支原体抗性的影响

文│金遵 赵宗胜 袁聪 于要升 曹少奇 雷小萍（新疆石河子大学动物科技学院）

甘露糖结合凝集素（MBL）属于凝集素家族，是机体先天性免疫的重要成分，有激活补体系统、调理吞噬等作用，并与许多免疫相关性疾病有关。为了揭示湖羊不同MBL基因型与绵羊肺炎支原体抗性的相关性，本研究在对中国美利奴羊MBL基因多态性分析的基础上，利用ELISA方法检测湖羊的绵羊支原体肺炎抗体水平，通过t检验对湖羊MBL基因外显子1同一基因型在绵羊支原体肺炎阳性和阴性的个体中的基因型频率进行差异显著分析。

一、材料和方法

1.试验样品。湖羊血样采自新疆生产建设兵团第九师某羊场共105只。使用一次性肝素钠抗凝采血管颈静脉采血5毫升，-20℃保存。采用一次性真空采血管（不加抗凝剂）采血3毫升分离血清。

2.试验方法。

（1）绵羊支原体肺炎抗体ELISA血清学检测。按ELISA试剂盒（美国ADL公司）说明操作，进行湖羊MBL支原体抗体检测。

（2）绵羊MBL基因外显子1基因分型。根据电泳图谱，依照文献报道的分型方法对各条带带型进行分析。

3.数据处理及统计分析。湖羊MBL基因外显子1同一基因型在绵羊支原体肺炎阴性和阳性个体上基因频率的显著性差异比较，采用t检验；用统计软件SPSS17.0进行统计学处理，以P＜0.05代表差异有统计学意义。

二、结果和分析

1.湖羊绵羊支原体肺炎抗体检测。经绵羊支原体肺炎ELISA试剂盒检测结果表明，105只湖羊中绵羊支原体肺炎阴性为35只，阳性为70只，但阳性抗体水平比较低。

2.绵羊MBL基因外显子1基因分型。根据电泳图谱，依照之前报道的分型方法对各条带带型进行分析。MB外显1的SSCP分型，出现了4种基因型，由3种等位基因控制。基因型为：AA、BB、CC和BC，由A、B、C三种等位基因控制。

3.湖羊MBL基因外显子1多态性与绵羊支原体肺炎的抗性关联分析。MBL基因外显子1在绵羊支原体肺炎阳性和阴性的湖羊个体中会出现一致的基因型，将它们之间的基因型频率进行差异显著分析（t检验）。结果发现，湖羊中，CC型在健康组中较多（P＜0.01），推测是绵羊支原体肺炎的抗性基因型。AA和BB在绵羊支原体肺炎组中较多（P＜0.01），提示是绵羊支原体肺炎的易感基因型。

三、结论与讨论

绵羊支原体肺炎呈流行性，接触传染性疾病，以冬春季节发病较多。发病率高，死亡率低，可耐过，但增重缓慢。自2000年新疆引进大批湖羊后，大范围爆发，导致湖羊死亡，并传染给其他品种，且康复的羊也是长期带菌者，该病不易消灭和清除，严重影响了新疆养羊业的生产和发展。MBL属于凝集素家族，是机体先天性免疫的重要成分，有激活补体系统、调理吞噬等作用，并与许多免疫相关性疾病有关。近年来MBL作为天然免疫第一线的一种防御分子在各种感染性疾病中的作用倍受关注。

目前，用于检测绵羊支原体的方法主要包括分离培养法、电镜法、血清学方法和分子生物学方法。血清学方法因简单、灵敏、快速、不出现假阳性等优点，因此被国内外广泛使用。本研究对采集回来的湖羊血清样品进行绵羊支原体肺炎ELISA抗体水平检测，67%的湖羊呈阳性，但抗体水平不高，可能所采集的个体曾经感染过绵羊肺炎支原体，为隐性感染，抗体检测阳性，但并未发病，无临床症状出现。

湖羊外显子1不同基因型与血清水平的相关性表明，MBL基因不同的基因型决定不同的MBL血清水平表达，而本试验证实MBL基因不同基因型对绵羊支原体肺炎的易感性不同，建立了湖羊MBL不同基因型，MBL血清水平及绵羊支原体肺炎三者之间的关系。初步得出结论，AA型和BB型，血清水平较低，与绵羊支原体肺炎易感性相关；CC型，血清水平较高，与绵羊支原体肺炎抗性相关。