牛病毒性腹泻病毒的综合诊断和防控

达热玛

(青海省海北州祁连县八宝镇畜牧兽医站,青海祁连 810499)

牛病毒性腹泻病毒的综合诊断和防控

达热玛

(青海省海北州祁连县八宝镇畜牧兽医站,青海祁连 810499)

牛病毒性腹泻病毒是危害养牛业的重要病毒性传染病，该病毒主要感染犊牛，成年牛也可以感染发病，牛病毒性腹泻病毒具有潜伏感染和免疫耐受的特征，从而对本病的综合诊断提出了更高要求。本文主要综述了牛病毒性腹泻的临床症状、病理变化、实验室诊断方法及防控措施，为基层养殖场的饲养管理与疫病防治提供参考。

牛病毒性腹泻病毒 综合诊断 防控

牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV）属于黄病毒科（Flaviviridae）瘟病毒属（Pestivirus），该病毒呈世界性分布，世界上许多养牛的国家和地区都有本病发生的报道[1]。BVDV的宿主范围广泛，猪、牛、羊、骆驼都可以感染本病毒，感染动物和带毒动物是本病的传染源，病毒主要通过呼吸道和消化道感染传播，有些病牛呈潜伏感染状态，该病毒可以通过胎盘垂直传播[2]。持续性感染和免疫耐受是本病的重要特征，这一特征给本病的诊断、检疫及防控均造成很大困难。该病的诊断方法很多，常用的检测方法有常规的病毒分离培养、中和试验等方法，常规检测方法费时较长，特异性和敏感性不好，随着分子生物学的发展，新型的检测方法逐渐应用到牛病毒性腹泻病毒的检测中，现将该病毒的综合诊断和防控措施介绍如下：

1 临床症状

牛病毒性腹泻的发病率在5 %左右，死亡率在90 %以上，发病牛在3月龄到18月龄居多，发病牛主要表现为体温升高至40℃～42 ℃，精神沉郁，少食，鼻眼有黏性分泌物，典型的临床症状为水样腹泻，严重的可带有血便。有的病牛出现腐蹄和跛行。本病常常可以引起免疫抑制，呈急性感染状态，病毒感染导致淋巴组织破坏，免疫功能损伤，因而增强了其他病原体的致病性。与细菌性腹泻鉴别主要通过大便常规检查，细菌性腹泻有白细胞和脓细胞，同时可以进行细菌分离培养进行鉴别。

2 病理变化

剖检可见病牛消瘦，消化道黏膜充血、出血，肠系膜淋巴结水肿增大，盲肠和结肠黏膜充血、出血。急性BVDV 感染可见胃肠道、体表和呼吸道的表皮损伤。

3 综合诊断方法

牛病毒性腹泻疾病的诊断可以通过临床症状与病理变化做出初步诊断，但最后确诊还要借助分子生物学等实验室诊断方法。

3.1 RT-PCR检测方法

季新成[3]等针对不同基因型BVDV基因组高度保守的5’端非编码区核苷酸序列，设计特异性引物（扩增长度为288 bp），同时为了指示假阴性结果，以牛GAPDH基因为内标基因，设计特异性引物（扩增序列长度为152 bp）。通过RT-PCR反应条件的优化，建立了BVDV通用型内标双重RT-PCR检测方法，该方法可以监测RNA 提取与RT-PCR反应过程，指示假阴性结果的发生。该方法的检测灵敏度约为102TCID50/ml，且具有较好的特异性和可重复性。通过对566份临床样品检验，检测到阳性样品19份，阳性率为3.36 %。该方法可用于临床样品中BVDV检测，并可对检测结果进行质量控制。

3.2 荧光定量RT-PCR检测方法

韩猛立[4]等根据BVDV 5’端非编码区核苷酸序列，软件分析后设计特异性扩增引物，建立了一种快速定量检测BVDV的实时荧光定量RT-PCR方法。该方法检测猪瘟病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛轮状病毒及牛冠状病毒没有交叉反应，具有高度的特异性；在102～108拷贝/μl模板范围内具有良好的线性关系，所制作的标准曲线相关系数为0. 998，最低可检测下限可达到102拷贝/ μl，具有灵敏度高的特点；不同情况下进行3次重复检测，变异系数均小于1.5 %，具有重复性好的特点。该检测方法可用于临床样品的检测，适用于BVDV 的临床快速诊断和流行病学调查。

3.3 抗原捕获ELISA检测方法

范晴[5]等用兔抗BVDV多抗作为包被抗体，BVDV NS3单克隆抗体作为捕获抗体，建立了检测BVDV抗原的捕获ELISA方法，该方法对牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛分枝杆菌无特异性交叉反应，其最低可检测7.9×103个TCID50的病毒含量，与常规RT-PCR方法相比较，符合率为100 %。BVDV抗原捕获ELISA方法快速、特异、敏感，可用于BVDV抗原的快速检测。

3.4 RT-LAMP检测方法

范晴[6]等根据BVDV的5’端非编码区序列，分别在保守区的8个位点设计LAMP特异性引物（2对特异性引物和1对环引物），对反应条件和试剂浓度进行优化，建立了BVDV的RT-LAMP快速检测方法。该方法特异性好，检测其他对照病毒均为阴性；灵敏度高，最低可检测到1个拷贝的阳性质粒，可通过观察浑浊度或加入染料后直接判定扩增结果。该方法简便、快速、特异性好、灵敏度高，适合基层和现场检测。

4 防控措施

BVDV预防的关键在于加强牛的日常饲养管理。新生犊牛的饲养首先要保证出生后半小时内吃到初乳，这对新生犊牛极其重要，定时定量喂养，保持舍内温度，卫生，防止消化道疾病发生，加强新生牛的饲养管理。怀孕母牛的饲料配比要适当，保证蛋白质、矿物质和维生素含量，保持良好的营养水平，保证产后乳汁分泌良好，牛舍环境要清洁、干燥，卫生，定期消毒。母牛产犊过程中的分泌物，排泄物要及时清除，彻底打扫卫生和消毒。该病目前无特效药，一旦感染发病只能对症辅助治疗，同时给予抗病毒的药物辅助治疗，增强病牛的抵抗力。目前，国际上用于BVD的防控措施主要是鉴别和扑杀持续性感染动物，其次是疫苗免疫[7]。国内本病的防控建议根据不同牛场的规模、养殖密度、血清抗体阳性率情况制定不同的防疫对策。在牛养殖密度低、BVDV抗体阳性率低的地方，禁用弱毒疫苗，定期监测牛血清抗体，逐步淘汰隐性感染牛。在牛养殖密度高、BVDV抗体阳性率高的地方，可以通过疫苗免疫控制疫病暴发流行，对发病牛要及时隔离治疗，逐步淘汰达到牛场逐步净化的目标。

[1] 王龙，梁霄勇，季新成，等. 新疆部分地区牛病毒性腹泻病毒的分离、鉴定及分子流行病学调查[J]. 新疆农业科学，2015，52（2）：334-338.

[2] 姚伟.辽宁地区规模化奶牛场牛病毒性腹泻-黏膜病血清学调查[J].现代畜牧兽医，2015，（4）：36-40.

[3] 季新成，段琛，王克栋，等. 牛病毒性腹泻病毒内标双重RTPCR检测方法的建立及初步应用[J]. 动物医学进展，2014，35（1）：17-21.

[4] 韩猛立，黄新，钟发刚，等. 牛病毒性腹泻病毒SYBR Green I实时定量RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 新疆农业科学，2014，51（2）：333-339.

[5] 范晴，谢芝勋，谢志勤，等. 牛病毒性腹泻病毒抗原捕获ELISA方法的建立[J]. 动物医学进展，2015，36（2）：21-24.

[6] 范晴，谢芝勋，刘加波，等. 牛病毒性腹泻病毒RT-LAMP检测方法的建立[J].生物技术通讯，2010，（2）：248-251.

[7] 王炜，武华. 牛病毒性腹泻病毒生物学特性、危害及防控[J]. 中国奶牛，2014，（23-24）：22-26.

达热玛（1982-），女，青海祁连人，本科，助理兽医师，研究方向:动物疾病诊疗。