HPLC法测定儿童清肺丸中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量

戴慧贤 童惠贞 刘潇潇

广东省食品药品检验所，广东 广州 510180

HPLC法测定儿童清肺丸中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量

戴慧贤 童惠贞 刘潇潇

广东省食品药品检验所，广东 广州 510180

目的：建立儿童清肺丸中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量测定方法。方法：采用HPLC法，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈－0.1%磷酸溶液（4：96）为流动相；检测波长为206nm。结果：盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱分别在0.0005～0.1000 mg／ml（r＝1.0000）、0.0005～0.1009 mg／ml（r＝1.0000）范围内线性关系良好；加样回收率盐酸麻黄碱为96.7%，RSD为0.7%（n＝6），盐酸伪麻黄碱为97.3%，RSD为1.5%（n＝6）。结论：本方法简单、准确、重现性好，可用于制剂中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量测定。

高效液相色谱法；儿童清肺丸；盐酸麻黄碱；盐酸伪麻黄碱

儿童清肺丸由麻黄、炒苦杏仁、石膏等27味药材组成，具有清肺解表，化痰止嗽的功效，临床用于小儿风寒外束、肺经痰热所致的面赤身热、咳嗽气促、痰多黏稠、咽痛声哑［1］。现代药理研究表明，儿童清肺丸具抑菌、解热、抗炎镇咳、化痰等药理功效［2］。麻黄为方中君药，通过测定麻黄中的主要成分盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的含量，能更好地控制药品的内在质量。国家食品药品监督管理局数据库信息显示［3］，该品种有共6个国家批准文号，两种剂型规格，分别为大蜜丸和水蜜丸。本文建立适用于上述两种剂型中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱含量测定的方法。

1 仪器与材料

1.1 仪器 安捷伦1260、1100高效液相色谱仪（G1315B型二级阵列检测器DAD）；Sartoriu CP224S、CP225D电子天平；KQ－300DA型数控超声波清洗仪。

1.2 材料 盐酸麻黄碱对照品（批号：171241－200506）、盐酸伪麻黄碱对照品（批号：171237－200304）均购于中检院。儿童清肺丸（大蜜丸，批号：2013454、1013590、0013174、1013575、2031365、2013362、2013107、1013591，北京同仁堂；批号：295138、295206、295235、195309，承德颈复康药业。水蜜丸，批号：L08001、L08002、L08003，敬修堂药业）；阴性对照样品，由广东省食品药品检验所按儿童清肺丸处方 （缺麻黄）照制法模拟制备。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Aglient Zorbax SB（250mm× 4.6mm，5μm）；流动相：乙腈－0.1%磷酸溶液（4：96）；检测波长：206nm。理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于3000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 供试品溶液的制备 取装量差异项下的水蜜丸，粉碎，取约3.4g，精密称定；或取重量差异项下的大蜜丸，剪碎，混匀，取约6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水100ml，称定重量，加热回流30min，放冷，用水补足减失的重量，摇匀，离心，精密量取上清液50 ml，加浓氨试液2m l，摇匀，用乙醚振摇提取3次，每次50ml，合并乙醚提取液，加入盐酸乙醇溶液（5→100）2ml，混匀，减压回收乙醚或挥尽乙醚，残渣加水使溶解，并转移至10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，放置24h后，过滤，取续滤液，即得。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱对照品适量，加水制成每1m l含盐酸麻黄碱10μg、盐酸伪麻黄碱5μg的溶液，即得。

2.2.3 阴性样品溶液的制备 取阴性样品适量，按“2.2.1”下的方法制备，即得。

2.3 线性考察 分别精密吸取不同浓度的对照品溶液 （盐酸麻黄碱对照品溶液浓度分别为：0.1000、0.0250、0.0050、0.0025、0.0075mg／m l；盐酸伪麻黄碱对照品溶浓度分别为：0.1009、0.0252、0.0050、0.0025、0.0076、0.0005 mg／ml）各10μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以进样量（mg／m l）（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，盐酸麻黄碱的线性回归方程为：y＝23139x－2.3241，r＝1.0000、盐酸伪麻黄碱的线性回归方程为：y＝23455x－3.9017，r＝1.0000。结果表明盐酸麻黄碱在0.0005～0.1000 mg／ml的范围内，盐酸伪麻黄碱在0.0005～0.1009 mg／ml的范围内，线性关系良好。

2.4 精密度试验 精密吸取对照品混合溶液20μl，连续进样6次，测定峰面积，盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的RSD分别为0.3%、0.1%。说明仪器的精密度良好。

2.5 重复性考察 大蜜丸：取同一批样品（批号295206）10丸，剪碎，混匀，取6份，每份约6g，精密称定，按含量测定的方法制备供试品溶液。按拟定的色谱条件测定，盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的重复性RSD分别为1.4%（n＝6）与1.6%（n＝6）。表明说明本方法重现性良好。

水蜜丸：行了简化验证，取同一批样品 （批号L08002）粉碎，取3份，每份取约3.4g，精密称定，按含量测定的方法制备供试品溶液按拟定的色谱条件测定，盐酸麻黄碱重复性RSD为0.3%（n＝3），盐酸伪麻黄碱重复性RSD为0.3%（n＝3）。表明说明本方法重现性良好。

2.6 加样回收率试验 大蜜丸：取同一批已知含量的样品（批号295206）6份，按照样品含量的100%将盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱对照品溶液加入到样品中，按拟定的方法进行提取与测定。由表1可知，该方法的准确度较好。

水蜜丸：进行了简化验证，取同一批已知含量的样品（批号L08002，敬修堂药业提供）适量，粉碎，混匀，取3份，按照样品含量的100%将盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱对照品溶液加入到样品中，按拟定的方法进行提取与测定。由表2可知，该方法的准确度较好。

2.7 专属性 按样品制法同法制成麻黄的阴性对照样品，吸取对照品溶液与麻黄阴性对照溶液各20μl、供试品溶液10～20μl，注入液相色谱仪，结果表明阴性对照无干扰，结果见图1。

2.8 稳定性 取三批不同企业提供的样品 （批号：L08003、2031365、195309），按样品制备方法制备供试品溶液，精密吸取10～20μl注入液相色谱仪（批号为L08003进样10μl，批号为2031365、195309进样20μl），每隔2小时进样一次，记录盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的峰面积，以进样时间间隔 （小时）为横坐标，以峰面积为纵坐标，作图，结果见图2。结果表明，随着放置时间的增加，两种被测成份峰面积在不断增加，到24小时后基本稳定，从24小时到60小时供试品溶液中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱的峰面积基本稳定，故建议标准中供试品溶液放置24小时后测定。

2.9 样品含量测定 取儿童清肺丸共15批样品（大蜜丸12批，水蜜丸3批），照拟定的含量测定方法测定盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量，结果见表3。

3讨论

样品处方复杂，且麻黄的含量较低，折算成品含麻黄的量为大蜜丸0.064g／g，水蜜丸为0.0114 g／g，因此供试品溶液提取与净化要求较高。研究参照相关文献［1，4－5］，分别了比较了以水、甲醇、浓氨试液－乙醇－乙醚混合溶液（2∶5∶50）、0.5mol／L的硫酸溶液为提取溶剂，净化方法又分别比较了使用中性氧化铝柱、碱化后乙醚萃取等方法，结果以水为提取溶剂，加热回流提取后放冷，提取液碱化后以乙醚萃取得到的色谱图与含量结果最为理想。

分别对供试品取样量、提取时间、浓缩方式、加浓氨试液的量、加浓氨试液后放置时间、萃取次数等对供试品溶液提取存有影响的各个因素进行了考察，通过分析比较，选定最优条件为供试品溶液的制备方法。

流动相的选择，分别比较了以下四种流动相：①乙腈－0.1%磷酸溶液（4∶96）［5］；②：乙腈－0.2%磷酸溶液（含0.3%三乙胺）（4∶96）［6］；③：乙腈－0.1%磷酸溶液（含0.05%三乙胺）（4∶96）；④：乙腈－0.092%磷酸溶液（含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺）（2：98）［1］。

结果乙腈－0.1%磷酸溶液（4∶96）在供试品色谱图中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱峰达到基线分离，塔板数分别为14948、16724，分离度为4.08，峰形对称，保留时间适中，得到的色谱图最为理想，因此选择乙腈－0.1%磷酸溶液（4∶96）为流动相。

用二极管阵列检测器对盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱进行扫描，以乙腈－01%磷酸溶液（4∶96）为流动相，结果盐酸麻黄碱在206nm处有最大吸收，盐酸伪麻黄碱在204nm处有最大吸收。故选用206nm为检测波长。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典 （一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010.

［2］黄萍，吴清和，荣向路，等.儿童清肺丸药效学研究 ［J］.中药新药与临床药理，2001，12（1）：29－31

［3］国家食品药品监督管理局网络数据库［DB／OL］.http：／／www.sfda. gov.cn／WS01／CL0001／.

［4］YBZ25192005.克咳片［S］.国家食品药品监督管理局.

［5］杨秀珍.HPLC测定肺宁合剂盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量［J］.中国中医药信息杂志，2002，19（12）：54－55.

［6］阳志云，饶伟文.HPLC法测定麻黄中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱的含量［J］.首都医药，2010.16（2）；53－54.

R284.1

A

1007－8517（2015）16－0017－03

2015.05.01）