糖尿病大鼠尿水通道蛋白-2的检测意义

胡曼丽　陈延春　杜 娟

（1 长春医学高等专科学校，吉林 长春 130031；2 长春市中心医院，吉林 长春 130051；3 吉林省人民医院内分泌科，吉林 长春130021）

糖尿病大鼠尿水通道蛋白-2的检测意义

胡曼丽1陈延春2杜 娟3

（1 长春医学高等专科学校，吉林 长春 130031；2 长春市中心医院，吉林 长春 130051；3 吉林省人民医院内分泌科，吉林 长春130021）

目的 检测糖尿病（DM）大鼠尿水通道蛋白-2（AQP-2）的变化，探讨其意义。方法实验大鼠分为正常对照组和实验组，实验组将10只雄性SD大鼠给予高糖高脂饲料喂养4周，按40 mg/kg体质量剂量腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型。用ELISA方法检测大鼠尿水通道蛋白-2（AQP-2）的变化。结果糖尿病大鼠尿水通道蛋白-2（AQP-2）尿排泄增加（P＜0.01）。结论尿水通道蛋白（AQP-2）在治疗糖尿病肾病诊断指标中占有很大的参数。

糖尿病；水通道蛋白-2；检测

糖尿病肾病是指由于糖尿病糖代谢异常为主因所致的肾小球硬化，并伴尿蛋白含量超过正常，称为糖尿病肾病。糖尿病肾病由多种病因引起，其发病机制是引起体内胰岛素绝对或相对不足，而致糖蛋白质和脂肪代谢障碍。由于糖尿病糖代谢异常形成肾小球硬化，并伴尿蛋白含量超过正常，引起终末期肾功能衰竭。在排除其他可能引起糖尿病性肾病原因基础上，早期糖尿病性肾病的诊断主要根据6个月内连续尿检查有2次微量白蛋白排泄率在30～300 mg/24 h，则可初步诊断早期糖尿病性肾病。水通道蛋白-2（AQP-2）存在于肾脏肾小管和集合管［1］，故本实验将检测糖尿病大鼠尿水通道蛋白-2（AQP-2）的变化，进而论证水通道蛋白-2（AQP-2）可作为肾脏损害的诊断指标［2］。

1　材料与方法

1.1实验性糖尿病大鼠模型的建立：将4～8周龄无特定病源体（SPF级），体质量180～220 g之间的雄性SD大鼠20只，适应性饲养10 d后称量体质量，测血糖、尿糖后。随机分为正常对照组10只；实验组10只；实验组高糖高脂饲料喂养4周，按40 mg/kg体质量剂量腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型。成模大鼠具有胰岛素抵抗、高血糖、高胰岛素血症和血脂紊乱的糖尿病临床特征。并且血糖≥16.67 mmol/L，尿糖（3+）以上为造模成功［3］。糖尿病组模型制成后，与正常对照组在同一环境中饲养，给予标准饮食，自由饮水。

1.2留取标本：模型组成模、对照组均60 d一次取材。大鼠处死前分别称体质量并测试大鼠的一般指标。然后取两组大鼠肾脏分别用聚合酶链反应法检测肾髓质集合管水通道蛋白-2的表达。

1.3观察指标的测定：罗氏乐康全血糖仪测定；尿糖由尿糖试纸半定量测定；尿水通道蛋白-2检测用中国上海出产的规格48T/96T水通道蛋白2（AQP-2）ELISA检测试剂盒，试验方法按双抗体夹心法测定。ELISA是1971年瑞典学者Engvail和Perlmann，荷兰elisa法学者Van Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）。

1.4统计学处理：用SPSS18.0进行统计学分析，各组数据采用均数±标准差（）表示，组间数据比较采用t检验，P＜0.05具有统计学意义。

2　结 果

2.1实验组与对照组大鼠的基线参数比较

2.1.1实验组：血糖（4.36±0.59）mmol/L，尿糖（-），体质量（188.56±29.37）g；对照组：血糖（4.41±1.98）mmol/L，尿糖（-），体质量（187.95±18.91）g。实验前选取的实验组与对照组比较尿糖均为（-）。

2.1.2血糖无差异（P＞0.05），体质量无差异（P＞0.05）。

2.2实验组与对照组大鼠60 d时理化指标比较

2.2.1实验组：10例数结果血糖（25.10±0.71）mmol/L，尿量（29.87±16.47）mL/24 h，体质量（133.±31.62）g，水通道蛋白-2（AQP-2）（9.98±0.65）pmol/mL；对照组：10例数结果血糖（4.41 ±1.11）mmol/L，尿量（10.78±4.55）mL/24 h，体质量（194.7± 39.43）g，水通道蛋白-2（AQP-2）（7.22±1.02）pmol/mL。

2.2.2实验组60 d时SD大鼠血糖开始明显升高（P＜0.01），尿量高于对照组（P＜0.01）。体质量明显低于对照组（P＜0.01）。实验组尿水通道蛋白-2（AQP-2）比对照组明显升高（P＜0.01）。

3　讨 论

3.1水通道蛋白-2（AQP-2）是与水通道有关的细胞膜转运蛋白，是水通道蛋白家族成员之一，在肾脏尿液浓缩、稀释功能和维持体内水平衡中发挥着重要作用。当糖尿病大鼠肾脏髓质水通道蛋白-2（AQP-2）过高表达时，由于部分位于集合管亮细胞小管侧细胞膜上的水通道蛋白-2（AQP-2）蛋白可脱落于小管腔而被尿液冲出，故有一部分水通道蛋白-2可以随尿液排出体外，排入尿中水通道蛋白-2的量约占肾脏全部表达的3%。

3.2监测尿水通道蛋白-2（AQP-2）的水平可以反映肾脏水通道蛋白-2基因表达的水平。尿液水通道蛋白-2的检测方法包括放免法、免疫印记法和ELISA法。本研究采用ELISA方法，结果表明大鼠尿液水通道蛋白-2明显高于正常对照组，与以往报道一致。同时计算了水通道蛋白-2的变异系数为6%。

综上所述，水通道蛋白-2（AQP-2）是由日本学者发现的［4］，仅在肾脏集合管表达，受加压素的调节。水通道蛋白-2作为肾脏集合管改变的诊断指标，易于检测，不受年龄、性别、饮食［5］、运动、温度等影响，其变异系数为6%，糖尿病一旦合并肾脏病变，肾功能将呈进行性恶化，直至终末期肾功能衰竭。而尿液肾脏水通道蛋白-2检查作为一种无创伤性检查，在各种诊断技术日新月异的今天，仍然有其不可取代的优势。

［1］Radin MJ，Yu MJ，Stoedkilde L，et al.Aquaporin-2 regulation in health and disease［J］.Vet Clin Pathol，2012，41（4）:455-470.

［2］何翠娥，李华珠，梁力晖.糖尿病大鼠肾组织中水通道蛋白2的表达及意义［J］.中日友好医院学报，2009，23（1）:28-30.

［3］孔兆峰，王利.2型糖尿病动物模型研究概要［J］.中国微循环，2008，3:187-188.

［4］杜娟.水通道蛋白-2的研究进展［J］.国际老年医学杂志，2012，33（4）:176-181.

［5］朱妍焦悦.肾脏水通道蛋白-2“穿梭机制”的研究进展［J］.中国药理学报，2012，28（4）:451-452.

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1671-8194（2015）23-0044-02