干眼的实验模型及针刺治疗研究进展

王娇娇 高卫萍

干眼的实验模型及针刺治疗研究进展

王娇娇 高卫萍

干眼影响人们的工作学习，发病呈上升趋势，目前尚无有针对性的疗法，探究有效的治疗方法是近年来研究的热点。针刺治疗干眼在临床上取得满意疗效，其机制研究尚处在起步阶段。现对干眼的实验模型及针刺治疗进行综述，系统介绍动物实验研究的造模方法、常见分类以及针刺对干眼动物模型的影响，以期对针刺治疗干眼的实验研究及机理研究提供参考和思路。

干眼；针刺；动物实验；综述

干眼是一种因泪液质或量异常或动力学异常，导致泪膜稳定性下降，并伴有眼部不适和潜在眼表组织病变，泪液渗透压升高和眼表炎症反应〔1〕的常见眼表疾病，可由多种因素引起。根据诸多文献记载，中医针刺治疗干眼效果明显〔2-4〕，其作用机理有待动物实验的进一步阐释。现将干眼实验模型及针刺治疗研究进展综述如下。

1 干眼的动物模型

目前在动物实验中，干眼模型的建立也是通过多种方法进行。干眼动物模型可分为泪液缺乏型和蒸发过强型2种。1.1泪液缺乏型干眼模型

1.1.1 药物造模:药物制造干眼模型是实验中常用的方法。据文献报道，包括阿托品造模法〔5-6〕、东莨菪碱造模法〔7-8〕、高渗盐水造模法和局部点用防腐剂造模法等。阿托品为副交感神经阻断剂，可阻断副交感神经的兴奋性传导，而副交感神经兴奋可使泪液分泌增加，因此，阿托品可通过阻断副交感神经的兴奋性传递减少泪液分泌而制造干眼模型。施炜等〔9〕运用1%的硫酸阿托品滴眼液，4次/d滴眼，检测兔泪流量，实验结果证实阿托品滴眼能够制作兔干眼模型。东莨菪碱与阿托品的药理作用不同，有较强的外周抗胆碱作用，可以诱导兔泪液分泌减少。仇晶晶等〔10〕通过皮下注射氢溴酸东莨菪碱，给药1 h后检测兔泪流量，结果证实氢溴酸东莨菪碱可以减少泪液分泌量。李晶等〔11〕采用高渗盐水滴眼对照试验的方法，观察高渗盐水对小鼠泪液分泌量及角膜上皮细胞的影响。结果表明高渗盐水实验使泪液渗透压升高，在小鼠眼表造成类似干眼的病理损害。熊翠菊等〔12〕用0.1%的洁尔灭滴眼液滴一侧眼，对侧眼做空白对照组，分别于给药前及给药后第3、5、7和14天行Schirmer试验、1%荧光素钠染色（FL），1%虎红染色（RB），结果显示给药后第7天起实验组Schirmer试验值减少（P＜0.001）并逐渐下降，第5天起FL染色计分增加（P＜0.001）并逐渐上升，第3天起RB染色计分增加（P＜0.001）并逐渐上升，实验表明局部应用洁尔灭滴眼液可构建兔干眼模型。

1.1.2 维生素A缺乏造模:维生素和微量元素在视力改变和眼部疾病的发病中占有重要地位〔13〕。维生素A是眼的重要营养来源，参与维持视力和免疫系统功能的正常。维生素A缺乏也可以导致干眼。国内学者〔14〕运用完全不含维生素A的饲料喂养干眼模型兔，采用随机对照实验的方法观察兔角膜的变化。实验结果表明维生素A缺乏可导致泪腺腺体萎缩，使角膜上皮及结膜干燥引发干眼。

1.1.3 手术造模:睾酮作为一种性激素，它的含量降低可以对眼部产生重要影响。睾酮含量降低可以导致泪腺上皮细胞萎缩，杯状细胞减少，泪液分泌量减少而致干眼。基于此，在目前实验研究中，常用“去势”法制作干眼模型。张月梅等〔15〕用手术切除雄兔睾丸及附睾，结扎精索静脉及输精管，成功制成去势干眼模型。姚小磊等〔16〕采用分组对照的方法，经腹腔手术行兔双侧卵巢切除术进行比较观察，实验结果证实该法可成功制作兔干眼模型。李森等〔17〕通过摘除大鼠眶外泪腺和眶内泪腺的方法观察术后大鼠泪液分泌量，成功制造干眼模型。施炜等〔18〕采用第三眼睑及部分哈氏腺联合板层角膜切开成功制作反射缺乏型干眼兔模型。谢汉平等〔19〕运用手术摘除泪腺及第三眼睑，并用三氯醋酸对结膜表面的副泪腺及杯状细胞进行烧灼破坏，成功制作干眼症状程度更为严重的兔干眼模型。

1.2 蒸发过强型干眼模型

1.2.1 药物造模:有文献报道有学者采用肾上腺素阻塞法〔20〕和氢氧化钠烧灼法〔21〕制造干眼模型，这两种方法都造模成功，但存在诸多不足，实际应用较少。

1.2.2 减少瞬目频率造模:刘盛春等〔22〕采用固定家兔眼睑控制瞬目次数的方法，加快泪液蒸发，使眼部长期干涩导致角膜上皮细胞坏死制作干眼模型。实验结果表明该模型主要通过减少瞬目频率，使泪液蒸发过多，泪液中黏蛋白缺乏，眼表组织继而干燥失活，角膜上皮细胞坏死缺损，由此引起角膜上皮屏障功能的损害而出现干眼的表现。

1.2.3 环境诱导造模:陈蔚等〔23〕通过创建智能环境控制系统（ICES），有效调控环境的湿度、温度和气体流量，并在ICES中创建一个单纯环境因素诱导的小鼠干眼模型，结果表明，低湿、高气体流量的环境会导致正常小鼠泪液分泌量减少，并出现眼表上皮病变以及凋亡标志物的高表达。

总之，根据不同的发病机制，许多干眼动物模型被建立起来。实验者应根据自己的实验目的及实验条件选取合适的干眼模型。

2 针刺对干眼动物模型的影响

刘雪等〔24〕运用阿托品滴眼法制造家兔干眼模型，采用对照法观察针刺、中药及针药结合对干眼模型兔泪液分泌量及泪腺中乙酰胆碱含量的影响。针刺取穴睛明、攒竹、丝竹空、太阳、瞳子髎。结果显示针刺、中药以及针刺结合中药均可以提高干眼模型兔泪液分泌量。实验第10、17天针药组泪腺中乙酰胆碱的含量显著高于模型组（P＜0.05）。该结果表明针刺可以促进干眼模型兔泪腺的分泌，提高泪腺中乙酰胆碱的含量，对干眼模型兔具有治疗作用。张月梅等〔25〕将新西兰兔随机分为正常组、干眼组和针刺组，干眼组和针刺组摘除双侧睾丸，去势2周后兔干眼模型建立，并对针刺组穴位选取睛明、攒竹、丝竹空、瞳子髎、太阳针刺治疗，后观察实验兔泪流量、角膜荧光染色、泪腺组织病理学以及泪腺上皮细胞凋亡相关蛋白Fas、FasL的变化。泪流量观测表明针刺可以促进泪液分泌，在针刺4周后达到正常水平，针刺组和干眼组相比有显著差异；角膜荧光染色观察结果显示针刺组从针刺开始染色评分下降，到去势后6周趋于正常水平；干眼组从去势1周后角膜荧光染色积分大幅上升，去势4周后上升幅度趋于平缓；正常组角膜荧光染色基本不变。泪腺组织病理观察显示干眼组泪腺上皮细胞萎缩，细胞内物质减少；针刺组泪腺上皮细胞未见萎缩，胞浆充盈。而对Fas、FasL的观察结果显示Fas/FasL的表达在针刺组和干眼组中均上调，在干眼组中多为较强表达，而在针刺组中表达较低，且多为较弱表达，干眼组与针刺组有明显差异（P＜0.05），针刺组与正常组无统计学意义的差异（P＞0.05）。以上观察结果表明，针刺可以增加干眼模型兔的泪液分泌量，改善干眼对角膜和泪腺的病理损害，减缓泪腺上皮细胞的凋亡，对干眼具有控制和治疗作用。龚岚等〔26〕针刺兔右侧眼部攒竹、丝竹空、太阳穴，进针后行提插捻转手法，针刺得气后留针20 min，观察该疗法对兔泪液分泌的影响及泪腺形态的变化。结果发现针刺能刺激泪腺分泌泪液，且可维持一定时间，针刺后的泪腺组织结构完整，腺上皮结构清晰，腺小叶中腺泡内物质大量排空，腺体分泌旺盛，表明针刺可以促进泪液分泌，进而改善干眼症状。在随后的实验中他们证实针刺可以增加泪腺组织中神经肽血管活性肠肽（vasoactive intestinal polypeptide，VIP）浓度来刺激腺体的分泌，且能维持较长时间〔27〕，该实验为针刺治疗干眼提供了理论基础。张义彪等〔28-29〕采用阿托品滴眼液造模，观察针刺对干眼模型兔泪液分泌量的影响，并采用电镜微观观察针刺前后泪腺的形态结构变化，结果显示针刺能促进泪腺腺体的分泌，改善泪腺腺体形态，针刺后泪腺中乙酰胆碱的含量有所增加，作者认为神经反射和神经递质在针刺治疗干眼中发挥了一定作用。以上这些研究从多个角度展示了针刺对干眼的治疗作用，并对其作用机理进行初步探析。

3 讨论

干眼在中医中属“白涩症”“神水将枯病”等范畴。《黄帝内经》认为眼目之所以能视万物，全靠五脏六腑精气的濡养，若经络不通，气血不能上荣于目，则双目干涩，眼目不舒。目前，西医对干眼治疗主要依靠局部应用人工泪液〔30-31〕，其治疗目的是缓解其症状，并非针对其病因的有效治疗，停药后易复发。泪点栓塞等手术疗法〔32-33〕有一定的疗效，但也存在不足。中医对干眼是针对病因病机进行治疗，采用的方法主要有辨证内服中药、针刺等，既往文献〔34-36〕显示均有较好疗效。针刺可以促进泪腺主动分泌泪液，改善干眼症状，疗效稳定。近年来随着干眼动物实验研究不断发展，造模方法日趋完善，人们对于针刺治疗干眼的作用机制做了一些探索，包括从分子水平，或围绕调节细胞凋亡、改善泪腺的形态与功能、调节性激素等方面从不同角度探讨了针刺治疗干眼的机理。已有的实验结果表明针刺可以提高泪液分泌，降低干眼对角膜的损害和泪腺腺体的损伤，改善干眼症状。目前针刺治疗干眼的实验研究仍处于起步阶段，有很多问题尚不明确，但有理由相信随着动物实验的深入，针刺治疗干眼的作用机制会逐步被解释，为临床治疗干眼不断提供新的科学依据。

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Experimental model of dry eye and research progress of acupuncture treatment

WANG Jiaojiao，GAO Weiping.Nanjing Uni-versity of TCM，Nanjing 210029，Jiangsu，China

Dry eye influences people's work and study a lot，the morbidity is on the rise and there are no direct methods for therapy.To explore the effective treatment is the research hotspot in recent years.Acupuncture treatment for dry eye is satisfactory，yet its mechanism is still in its infancy.This paper summarized the experimental research of acupuncture treatment for dry eye，introduced the essence of the animal experiment research building method systematically，the common classification and the mechanism，in the hope of providing reference and ideas for the experimental research，mechanism research and acupuncture treatment of dry eye.

dry eye；acupuncture；animal experiments；review

R777.3

A

1002-4379（2015）04-0300-03

10.13444/j.cnki.zgzyykzz.2015.04.021

国家自然科学基金（81373746），江苏省自然科学基金（BK2012856）

南京中医药大学，南京210029

高卫萍，E-mail:gao-weiping@163.com