猪人工授精技术的操作规程

李 杰

(杭州大观山种猪育种有限公司，浙江杭州311115)

猪人工授精技术是养猪生产中经济有效的技术措施之一，是种猪培育和商品猪生产的有效方法，也是实现养猪生产现代化的重要手段。

人工授精技术的最大优点是可以明显减少公猪的饲养数量，增加优良公猪的利用机会，从而提高猪群的整体质量。

1 后备公猪的调教

1.1 调教要求

一是后备公猪达7 ～8月龄，体重120 kg 以上，健康无病、营养良好、精力充沛，并已经有过与母猪接触训练者，方可开始采精调教。调教宜在早上喂食前(如已喂食，则不能马上调教，需休息0.5 h 以后进行)，尽量选择晴天更好。调教前任公猪在室外适当运动对调教工作有一定好处。

二是采精栏要清扫干净，移去一切能影响公猪注意力或可能妨碍调教的杂物，然后将公猪赶入采精栏调教。调教前应剪除公猪包皮外长毛，挤去包皮内积尿，用0.1%高锰酸钾溶液擦拭消毒包皮周围和腹下部位，用清水洗净擦干。

三是采精人员要使公猪集中精力于采精台并诱导其爬跨。调教时间以10 ～20 min 为宜，一次不成第2 d 再进行;在调教中如若发现公猪有厌烦、对台猪无兴趣或爬跨受挫、情绪不佳时应立即停止本次调教。在整个调教过程中切忌对公猪粗暴鞭打和大声呵斥，爬跨姿势不当要耐心帮助纠正。适当保持与公猪的距离，以防公猪攻击。公猪如果调教成功，应隔天再采精，以巩固调教效果。以后每周采精1次，坚持1 个月。

1.2 调教措施

一是采精台上可泼洒适量发情母猪尿液、其他公猪的精液或唾沫，通过强烈气味刺激公猪性欲和爬跨。

二是公猪包皮外按摩阴茎有促使勃起的作用，或站在采精台一侧，与公猪相对诱导其爬跨。

三是在其他公猪采精时让被调教公猪隔栅观摩以激起其性欲，但要注意隔离，不能任两头公猪直接接触而发生斗殴。

四是采精时可先采已调教好的公猪，完毕后再赶入需调教公猪，让其嗅闻前一头公猪在采精台上留下的强烈气味，以激起性欲。

五是将一头发情旺盛的母猪带至采精台旁，任被调教公猪爬跨，经过数次爬跨公猪性欲达到高潮时赶离母猪，转而引导公猪爬跨采精台。

2 采精前准备

2.1 采精栏和采精台清扫 采精栏和采精台要打扫干净，移去一切可能影响公猪注意力或妨碍采精的杂物，但不能用水冲洗，防止地面湿滑。采精栏内不能抽烟和留有烟味及其他异味。

2.2 采精用品准备 采精用品包括采精杯，玻璃棒，温度计，载玻片，盖玻片，滤纸，橡皮筋，一次性保鲜袋及手套，光学显微镜等。直接接触精液的物品均须严格消毒，使用前放入40℃的恒温鼓风干燥箱中干燥和预热。

2.3 稀释液制备 应用蒸馏水器制备足够双蒸水，倒入1000 mL 放有磁珠的烧杯中，一般加入一包稀释粉，然后放置搅拌器上搅拌，待烧杯中稀释液完全澄清后(一般需15 ～30 min)停止搅拌，最后将稀释液倒入消毒后的干净瓶内(如500 mL 生理盐水玻璃瓶)，置于35 ～36℃的恒温水浴锅内加热。新配制的稀释液应静置1 h 左右以稳定pH 值和渗透压，方可用于稀释精液。

3 采精技术

3.1 徒手法采精 徒手法采精由于不需器械，方法简便，可分段收集精液，因此已被世界各国普遍采用。将准备采精公猪赶入采精栏内，等待其爬跨。一般需跨上爬下数次，待性欲旺盛后方才稳定，采精人员可从侧后接近公猪进行采精。采精人员一手戴上双层一次性手套，一手拿套有滤纸的采精杯。用带有手套的手挤去包皮内的积尿和污垢，用0.1%高锰酸钾溶液擦拭消毒包皮周围和腹下部位，再用清水洗净擦干。当公猪爬上采精台，等猪后躯连续几次挺出阴茎时，摘掉外面的脏手套，迅速用手握住阴茎龟头螺旋部分，拇指轻轻按摩龟头顶端，四指适当施压，压力由小到大，紧随阴茎的抽动不放手，随着进一步勃起顺势拉出阴茎。在整个过程中要避免阴茎部位碰到采精台或公猪体表部位，以防阴茎特别是龟头部位擦伤和避免可能存在的污染。射精开始后即移开拇指，仍然保持节律性施压，另一手用采精杯接住射出的精液。采精时尽可能使阴茎保持水平状态或略微朝上，以防包皮积尿流入采精杯而污染精液。

公猪射精后，开始射出的多为清亮精清，因比较脏，不宜接入集精杯内。然后射出稍稠、乳白色、富含精子的精液。以后射出的精液或稀或稠交替出现，胶粒会伴着精液一同射出，数量以胶粒为多，可用拇指随时拨除，以免影响精液采集或掉入采精杯影响精液过滤。公猪射精一次后要停顿片刻，阴茎来回抽动几次后才能再次射精，采精人员要紧握阴茎并再次施压，按摩龟头促使其再次射精。一般可反复2 ～3 次。最后射出的精液则很稀，无任何使用价值，但一定要保证射精过程完整，使公猪感到兴奋，以维持较好的性反射。

射精完毕后，采精人员要顺势将阴茎送回包皮内，迅速站起离开，防止公猪突然倒下或跳下时会压踩到采精人员。最好任公猪自行爬下采精台，如有困难者(尤其是老年公猪)，应适当辅助让其爬下采精台，以免公猪(如肢蹄)受伤，待其恢复常态后赶入原饲养栏内。

3.2 假阴道法采精 假阴道法是借助模仿母猪阴道功能的器具，只能采集全份精液，要求有一定设备，清洗费时费力，目前应用较少。优点是能维持适宜的温度与压力、防止公猪阴茎和精液不受污染。如外界气温较低，手握法易使公猪阴茎遇冷回缩，或引起射精不完全，采用假阴道法则可防止类似情况发生。

采精前先在洗净、消毒、干燥的假阴道内涂抹少量润滑剂(如液体石蜡);夹层内注入总容量达2/3的40℃温水，插上双连球充气;连接带保温护套的集精瓶。当公猪爬上采精台后，采精员在假阴道开口处接纳公猪阴茎，通过双连球有节律地施加适当压力，以增加其快感。假阴道应向悬挂集精瓶处倾斜，以防精液倒流。公猪射精完毕后，随着阴茎的软缩应逐渐放掉假阴道内空气，取下集精瓶，严防脏物落入集精瓶内而污染精液。

4 精液品质检查

精液常规检查项目有:精液量、色泽、气味、pH值、活力、密度等。

可作定期检查项目有:死活精子比例、畸形率、精子存活时间、美蓝褪色时间、抗力系数等。

采集后的精液必须立即进行检查。

4.1 精液量 精液的密度近似于1 g/mL，所以可通过电子秤称重来计算精液量。

4.2 色泽和气味 正常的猪精液为乳白色，略有腥味，乳白色程度越深说明精子密度越大。如呈粉红色则可能混有血液;黄绿色带有异味则混有浓液;黄色则混有尿液。各种色泽、气味异常的精液应废弃禁用，查找发生原因，及时采取措施。

4.3 pH 值 新鲜精液可用精密pH 试纸或酸度计测定。正常猪精液pH 值为7 ～7.5，如果精液中含有大量微生物污染或含大量死精时，可使pH 值上升而呈偏碱性，可使精子存活率、受精力和保存效果受到明显影响。

4.4 活力 采精、稀释后，保存、输精前都要进行精子活力检查。观察精子活力必须在35 ～38℃的显微镜恒温台或可置入显微镜的保温箱中进行，在100 ～150 倍显微镜下观察。低温保存的精液必须先缓缓升温。将需要检查的精液轻微摇动或用玻璃棒稍稍搅动至均匀，滴在载玻片盖上盖玻片后检查。活力采用十级评分，即按一个视野中直线前进运动精子的估计百分比分成十级，从0 开始，活精子每上升10%，评分上升0.1 分。凡作旋转运动、原地摆动的精子均不作活精计算。旋转运动或倒退运动的精子往往是受到冷休克或稀释液与精液不等渗等原因所致，有可能恢复正常;原地摆动则是精子衰老即将死亡的标志。一般精子活力在0.6 以下不宜作输精用;用于稀释保存或做冻精的原液精子要求活力在0.8 以上。

4.5 密度 测定精子密度，一般可采用估测法或光电比色计法测定。

估测法估测精子密度简便易行，常与精子活力测定(原精)同时进行，根据显微镜观察精子间的间隙大小分为密、中、稀三级。密级:精子间空隙很小，小到容不下1 个精子;中级:精子间有一定空隙，可容纳1 ～2 个精子;稀级:精子间空隙很大，可容纳2 个以上精子。

光电比色计法测定精子密度是将精确计数的精液以不同比例稀释制成标准管，用光电比色计测定其透光度，制成透光度和密度的对照表或曲线图。将需要测定的精液样品先在光电比色计上测得透光度，便可在对照表或曲线图中查出其密度。该法要求测定精液必须将胶状物等过滤干净，以免影响测定的准确度。

4.6 死活精子比例 以伊红(刚果红)―苯胺黑(苯胺兰)染色涂片检查，死精主要因精子头部在苯胺黑的暗背景中可被染成红色，活精则因其机能的半透过性膜能防止色素侵入，故不着色。由于非直线前进运动的精子亦不着色，故采用该法得出的测定结果常比直接镜检方法要高，一般只适用于新鲜精液检查。

4.7 畸形率 精子形态是否正常和受精力密切相关，畸形率是其中一项重要的检查项目。具体步骤是制片―阴干―酒精固定―漂洗―阴干―染色(红、蓝墨水，美蓝，龙胆紫均可)―阴干，然后在显微镜(400 倍)下观察计数。检查精子总数应不少于200 个，计算出畸形精子的百分率。常见的畸形精子类型有:头部巨大，圆形，细长或双头;颈部膨大，纤细，屈折，带有原生质滴;中段膨大，纤细，弯曲，双体，带有原生质滴;主段短小，弯曲、双尾和带原生质滴等。如精子畸形率超过20%，则禁止用作输精用，公猪则应停用一段时间，改善环境，加强饲养，恢复正常后再采精使用。

4.8 精子存活时间 精子存活时间是指精子在体外的一定条件下能生存的时间。通常将精液稀释后置于0℃冰箱中，定时取出少量精液逐步升温至37℃，用显微镜检查，每天2 ～3 次，直到精子全部死亡或只有摇摆运动时止，所需总的时数即为精子存活时间。存活时间越长，说明精子活力越强，品质越好。

4.9 美蓝褪色时间 美蓝是氧化还原指示剂，氧化时呈蓝色，容易氢化还原而褪色。因为精液中有去氢酶，活精在呼吸时氧化脱氢而使美蓝还原成无色。美蓝褪色时间也就可以作为精子代谢能力的一个简明标志，也能反映出精子活力和密度的高低。一般以含0.02%美蓝的生理盐水与4 倍量的精液混匀，装入1 mL 小试管中，以石蜡封口隔绝氧气，放在40℃下观察褪色所需时间。

4.10 抗力系数 抗力可大致表示出精子在体外对所处环境的生活力。方法是在0.02 mL 精液中逐次加入1%氯化钠溶液10 mL，同时用显微镜观察精子的存活状况，直至精子全部死亡，加入氯化钠溶液总量与精液量之倍数即为抗力系数。

5 精液稀释

通过检查精液的精子密度、活力、数量，结合输精的母猪头数，以确定稀释倍数。一般要求每mL稀释精液中含有0.5 亿个以上的精子数，保证每头母猪每次输精后获得80 mL 输精量时能有不少于40 亿个有效精子。

例如:某公猪一次采精量为200 mL，活力为0.8，密度为2 亿个/mL，则总精子数为400 亿个，按每瓶需要40 亿个精子，可以稀释成10 瓶，按每瓶精液80 mL，需要向200 mL 精液中加入稀释液600 mL。

用稀释液稀释精液时，先用温度计检查稀释液和精液温度，当两者温差不超过1℃时才能稀释，稀释时最好用玻璃棒引流，将稀释液沿玻璃棒缓慢导入精液中，并用玻璃棒缓慢搅拌。当稀释倍数大时，先低倍(1－2 倍)稀释，静置1 min 后，再稀释。精液稀释后静置片刻对精子的活率再次镜检，确定正常后分装，或输精或逐步降温、保存。

6 精液的分装与保存

6.1 稀释后的精液经再次检查合格后，方可进行分装(每瓶80 ～100 mL)，将精液缓慢沿瓶壁倒入输精瓶内，挤出瓶内的空气，最后盖上盖子。贴上标签，标明公猪品种、耳号、采精日期。

6.2 分装好的精液置于合适温度下(22℃～25℃)1 h，其间要避免强光直射，待精液冷却后平放入17℃冰箱中，保存期间每隔12 h 摇匀一次精液(上下颠倒)，防止精子沉淀凝集死亡。

6.3 定期检查冰箱内温度，确保冰箱内温度的准确性。平时应尽量少开启冰箱门，以免内外温差对精子活力产生影响。

7 发情母猪鉴定

母猪的发情一般经历发情前期(2 ～4 d)、发情期(1 ～3 d)和发情后期(1 ～3 d)，期间可见行为、外阴和黏液变化:食欲显著下降，甚至废食，圈内走动，时起时卧，爬墙、拱地、跳栏，允许公猪接近和爬跨。用手按其臀部，出现静立反射。几头母猪同栏时，发情母猪爬跨其他母猪。外阴粘膜呈紫红色，粘液多而浓。静立反射行为的确定是判断母猪发情的最佳依据。

发情母猪的静立反射是在自身雌激素水平的升高和公猪分泌外激素的相互作用下发生的。所以利用公猪试情对准确判断静立反射是最好的方法，通过每天短期接触公猪能增强其静立反射。在利用公猪试情时同时综合其它发情症状进行判断，准确性将更高。

受配期的母猪外阴由鲜红转紫红或淡红，肿胀稍退出现微皱;黏液量多且稠，可拉成短丝;行为上狂躁和静立交替出现。有人进入猪栏内就移臀部靠近，推之不动，压背不走，且有弓背反应;触摸肋部、推搡臀部，尾渐上举，黏液增多，身体微颤，表现出静立反射。

8 输精技术

8.1 输精时间判定 一般母猪在发情后24 ～48 h内排卵，排卵高峰期在发情后36 h 左右，排卵时间持续10 ～15 h，卵子保持受精能力的时间是8 ～10 h，精子在母猪生殖道内保持受精能力的时间是24 h。发情期短的母猪(如经产老母猪，培育母猪)开始排卵早，应提前输精，发情期长的母猪(如初配母猪，本地母猪)开始排卵较晚，输精时间要适当延迟。

首次输精时间应在出现静立反射(接受公猪爬跨)后的6 ～10 h，经12 h 后进行第二次输精。经产母猪可根据断奶后发情间隔确定输精时间，有试情公猪时，断奶后5 d 内发情的经产母猪出现静立反射后12 h 进行第一次输精;断奶后6 d 以上发情的经产母猪出现静立反射时，立即进行输精。无试情公猪的情况下，发现有静立反应的母猪应立即输精，12 h 后进行第二次输精。青年母猪应根据外阴肿胀情况，粘液情况并结合试情公猪确定输精时间，母猪粘膜肿胀，发亮，略呈暗红色，阴道粘液粘稠浑浊，手指间缓缓拉开可拉成丝，出现静立反射后立即输精，返情母猪出现发情症状后立即进行输精。

8.2 输精前准备

一是将输精母猪转入可单独饲养的配种栏内，用卫生纸或消毒抹布擦净母猪外阴。

二是输精用器械应严格消毒，使用前用生理盐水或稀释液冲洗。输精管不经消毒不能共用。

三是使用经保存的精液要逐步回温至30℃左右，检查精子活力应在0.7 以上方可使用。

四是输精人员要戴好一次性手套，减少输精过程中的污染。

8.3 输精方法 输精管与输精瓶(袋)连接，输精管前1/3 涂抹少量润滑剂(如液体石蜡)，轻轻将输精管插入母猪阴道，沿阴道上壁旋转向前滑进，遇到阻力后退旋转输精管再往深部插入，直到输精管的螺旋头部有被咬住的感觉(即被锁住在子宫颈)为止。

插入深度青年母猪为25 cm 左右，经产母猪30～35 cm。插入后将输精管稍稍退出一点，抬高输精瓶(袋)，借助高差压力输入精液。如精液停止流入或有倒流现象，暂时停止输精，重复前面过程将输精管再次抽插。整个输精过程不少于5 min，输精完毕，将输精管尾部打折留置片刻，防止精液流出。任其自然停止宫缩后缓缓抽出。

输精过程中如遇到母猪排粪、尿而污染了输精管，应立即更换新的输精管。

8.4 输精次数和间隔时间 同一母猪，情期内输精2 次或3 次都足以使有效精子覆盖母猪的整个排卵期，使精子和卵子有相遇受精的机会。一般做法是全人工授精采用间隔24 h 输精2 次，发情良好母猪可进行第三次输精。

9 资料记载

9.1 公猪使用频率记录 记录公猪使用(采精或自然交配)日期，以调整、控制公猪(使用频率应在每周1 ～4 次幅度内)。

9.2 采精及精液品质检查记录 记录公猪号、采精日期及精液品质检查的各项数值。

9.3 精液稀释保存记录 记录公猪号、原精数量、稀释倍数、稀释后活力、分装袋数;保存期间活力抽检情况、摇匀时间;如有外供，应记录精液发出时间、数量，发出前的检查结果。

9.4 配种记录 记录与配公、母猪耳号，配种时间，配种方式;测孕时间，测孕结果;返情时间，流产时间。