热休克蛋白27在人脑星形胶质细胞瘤中的表达及意义

陈晓杰 南飞飞 张明智△

1）山东中医药大学第一临床医学院 2）郑州大学第一附属医院 郑州 450052

热休克蛋白（heat shock protein，HSP）由美国学者最初在高温环境的细胞中发现。是一个高度保守的多肽类蛋白质家族，其成员众多、含量丰富、广泛存在。研究证实，其合成受很多应激因素的影响，如感染、中毒、恶变以及缺血等。目前，其分类主要按照分子量大小划分，包括HSP110、HSP90、HSP70、HSP60、HSP27等。在其家族中，与肿瘤关系较为密切的主要有HSP90和HSP27［1-2］。

1 资料与方法

1．1 一般资料 选择2009-01—2012-12平顶山市第一人民医院神经外科经手术切除的12例星形胶质细胞瘤手术标本（胶质瘤组），诊断全部有病理检查支持，男7例，女5例；年龄36～72岁。所有患者术前均未经放化疗。病理诊断和分级全部按2007年WHO 中枢神经系统肿瘤分类标准确定：Ⅱ级7例，Ⅲ级3例，Ⅳ级2例。另选取12例同期住院的经手术切除的正常脑组织患者（正常脑组织组），男8例，女4例；年龄18～49岁。标本切除离体后，6h内放入-80 ℃冰箱保存。

1．2 方法

1．2．1 常规HE染色：二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）各15min，二甲苯：无水乙醇＝1：1 2min，100%乙醇（Ⅰ）、（Ⅱ）各5min，80%乙醇5min，蒸馏水5min，苏木精液染色5min，流水稍洗1～3 s，1%盐酸乙醇1～3s，0．5%伊红液染色1～3min，蒸馏水稍洗1～2s，80%乙醇稍洗1～2s，95%乙醇（Ⅰ）、（Ⅱ）各3 s，无水乙醇5～10 min，石炭酸二甲苯5～10 min，二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）、（Ⅲ）各2min，中性树胶封固［3］。

1．2．2 免疫组织化学方法：检测HSP27蛋白在人脑星形胶质细胞瘤、瘤旁以及正常脑组织中表达情况。①免疫组化二步法：脱蜡、水化组织切片，预处理组织切片，蒸馏水漂洗，置于TBS 中10 min，一抗孵育10～30 min，TBS 漂洗10 min，EnVisionTM 孵育10～30 min，TBS漂洗10 min，色源底物溶液孵育10min，蒸馏水漂洗，复染及封片，显微镜下观察［3］。②判定免疫组化结果的标准：由本院2位病理科医师进行双盲阅片，对每张切片进行10个高倍镜下（×400）视野内阳性细胞随机计数，阳性细胞数为最终判断标准：没有着色为0分，淡黄色着色为1分，棕黄色着色为2分，棕褐色着色为3分；判断阳性范围：0分为＜5%，1分为5%～25%，2分为26%～50%，3分为51%～75%，4分为＞75%；最终判定结果为二者相加分数：阴性（-）为＜2分，弱阳性（＋）为2～3分，中度阳性（＋＋）为4～5分，强阳性（＋＋＋）为6～7分［3］。

1．3 统计学处理 对所有数据的统计学处理采用SPSS 13．0软件，配对设计等级资料。P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 HSP27表达检测结果 根据免疫组织化学染色的结果显示，细胞染色定位于胞质内，呈棕黄色，弥漫状分布为HSP27表达阳性。人脑星形胶质细胞瘤组织HSP27总阳性表达率和强阳性表达率分别为100．00%（12／12）、50．00%（6／12）；瘤旁组织为100．00%（12／12）、25．00%（3／12）；正常脑组织为91．66%（11／12）、25．00%（3／12）。根据Wilcoxon符号秩检验结果看出，人脑星形胶质细胞瘤旁组织及正常脑组织中HSP27的表达差异无统计学意义（P＞0．05）。但人脑星形胶质细胞瘤组织中分别与二者的表达相比，差异有统计学意义（P＜0．05）。

2．2 HSP27的表达与临床病理特征二者之间关系 肿瘤不同生长部位、肿瘤不同分化程度、肿瘤的体积、周围卫星结节转移个数等对HSP27的表达差异无统计学意义（P＞0．05）。

3 讨论

脑星形胶质细胞瘤是人类最常见的神经系统肿瘤之一，脑星形胶质细胞瘤的治疗以手术为主，临床需手术切除的大多数患者为中晚期患者，治疗效果差，预后不良，当前5a生存率在确诊该病患者中仅有50%左右。HSP是一类多肽类蛋白质家族，结构复杂且广泛存在于各种组织，维持蛋白质的稳定性是其主要作用，相当于分子伴侣。其与肿瘤的关系密切，在目前肿瘤学研究中受到越来越多的重视。HSP27分子量较小，为27kD，在HSP 庞大家族中属于小分子量的HSP，HSP27在很多肿瘤细胞中异常高表达，如卵巢癌、结肠癌、乳腺癌、肾癌、肝癌、骨癌、前列腺癌、肺（非小细胞）癌、食管癌、膀胱癌等，特别是起源于腺癌的肿瘤［3］。在这些肿瘤细胞中，HSP27异常高表达，因此有可能增加这些肿瘤细胞对抗人体免疫系统的能力，从而逃离免疫系统介导的凋亡过程。大量对于结肠癌和卵巢癌等腺癌组织的研究表明，肿瘤细胞的分化程度、肿瘤的浸润深度和淋巴结转移的数目与HSP27的异常表达呈正相关。分化程度越差、肿瘤浸润越深、淋巴结转移数目越多则HSP27 的表达越显著。肺癌的组织学类型与HSP27的表达关系密切，可通过非小细胞肺癌组织中HSP27的表达，判断其增殖分化的程度，从而为临床疗效和预后的判断、治疗计划的制定提供重要的参考信息。本研究运用免疫组化检测了瘤组织、瘤旁组织以及正常组织HSP27的阳性表达率，发现脑星形胶质细胞瘤组织中HSP27的阳性表达基本高于癌旁组织和正常脑组织，提示随着脑星形胶质细胞的恶变HSP27的表达量有所增加。肿瘤不同生长部位、不同分化程度、体积、周围卫星结节转移个数均不影响HSP27的表达。肿瘤标志物能够提示机体肿瘤细胞的存在。神经胶质瘤起源于中枢神经系统的胶质细胞，成分复杂，异质性很高，包括星形胶质细胞瘤、少突胶质细胞瘤和室管膜瘤等多个亚型。星形胶质细胞瘤是中枢神经系统最常见的一种肿瘤，目前仍缺乏敏感特异的标志物分子。寻找精确、非主观因素决定的分子肿瘤标志物对星形胶质细胞瘤的诊断、治疗和预后判断均具有重要的理论意义［4］。肿瘤标志物为星形胶质细胞瘤的早期诊断及预后提供依据［5］。根据周金桥研究［6］我们发现，HSP27的表达与肿瘤有极其密切的联系，许多肿瘤组织中均HSP27的高表达，但对其进一步的研究，如具体联系及机制有待深入。对于HSP27 与肿瘤的关系更深入研究有助于更好地了解肿瘤发病的机制，并在此基础上找到一个以HSP27为目标新的检测和治疗肿瘤的方法。

［1］Castro GN，Cayado-Gutiérrez N，Moncalero VL，et al．Hsp27（HSPB1）：apossible surrogate molecular marker for loss of heterozygosity（LOH）of chromosome 1p in oligodendrogliomas but not in astrocytomas［J］．Cell stress ＆ Chaperones，2012，17（6）：779-790．

［2］Alam R，Schultz CR，Golembieski WA，et al．PTEN suppresses SPARC-induced pMAPKAPK2 and inhibits SPARC-induced Ser78HSP27phosphorylation in glioma［J］．Neuro Oncol，2013，15（4）：451-456．

［3］邵少慰．病理学实验教程［M］．武汉：华中科技大学出版社，2010：15-20；72-80．

［4］Vila-Carriles WH，Zhou ZH，Bubien JK，et al．Participation of the chaperone Hsc70in the trafficking and functional expression of ASIC2in glioma cells［J］．J Biol Chem，2007，282（47）：34 381-34 389．

［5］McClung HM，Golembieski WA，Schultz CR，et al．Deletion of the SPARC acidic domain or EGF-like module reduces SPARC-induced migration and signaling through p38 MAPK／HSP27in glioma［J］．Carcinogenesis，2012，33（2）：275-284．

［6］周金桥，王景涛，刘秋红，等．人脑星形胶质细胞瘤恶性程度相关蛋白表达谱的分析与鉴定［J］．中华神经医学杂志，2012，11（8）：780-783．