液基细胞学与细胞蜡块对肺癌的诊断价值比较

何立群

（诸暨市人民医院，浙江 诸暨311800）

·临床与检验·

液基细胞学与细胞蜡块对肺癌的诊断价值比较

何立群

（诸暨市人民医院，浙江 诸暨311800）

目的分析比较液基细胞学 （TCT）与细胞蜡块单独应用及两者联合应用对肺癌的诊断价值。方法选择本院2013年1～12月住院疑似肺癌的患者共58例作为观察对象，所有患者行纤维支气管镜针吸活检（TBNA）收集标本，并应用TCT及细胞蜡块免疫组化进行检测，分别比较两种诊断方法单独应用与联合应用的敏感性、特异性和准确性。结果细胞蜡块免疫组化肺癌诊断阳性率（86.20%）显著高于TCT检测阳性率（70.69%）（P＜0.05），TCT联合细胞蜡块免疫组化肺癌诊断阳性率显著高于单用细胞蜡块免疫组化肺癌诊断阳性率（P＜0.05）。58例疑似肺癌患者最终经病理组织学证实为肺癌者56例，液基细胞学组敏感性（73.21%）和准确性（70.69%）显著低于细胞蜡块免疫组化检测的敏感性（89.29%）和准确性（86.20%），联合诊断组敏感性、特异性、准确性均为100.0%，显著高于细胞蜡块免疫组化检测组（P＜0.05）。结论细胞蜡块方法较液基细胞学方法检测肺癌有更好的灵敏度和准确性，液基细胞学（TCT）和细胞蜡块方法联合应用能提高肺癌诊断准确性，检测敏感性、特异性好，可为肺癌的早期诊断和治疗提供依据。

TBNA；液基细胞学；细胞蜡块；肺癌

肺癌是临床上常见的恶性肿瘤，近年来，随着空气污染和工业化进程，我国肺癌的发病率和死亡率逐年升高，严重威胁人类健康。尽管现在诊治手段在不断的更新，但肺癌的5年生存率仍仅在14%左右[1]。早期肺癌临床症状不明显，绝大多数患者在确诊时已为中晚期[2]，所以早期诊断并及时治疗是降低肺癌患者死亡率的关键。液基细胞学检验技术是近年来开展的一项新技术，具有标本采集方便、易于保存、图像清晰、三维立体感突出等优点，提高了标本的满意度和异常细胞检出率，对恶性肿瘤检查有重要的诊断价值。近年来，本院单独及联合采用液基细胞学（TCT）与细胞蜡块对肺癌进行诊断，取得满意结果，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取本院2013年1～12月住院疑似肺癌的患者共58例作为观察对象，所有患者临床症状和胸部CT检查均疑似为肺癌，其中男38例，女20例；年龄45～67岁，平均（48.3±1.31）岁。胸部CT表现：肺部斑片状高密度影19例，肺部肿块或结节32例，肺叶或肺段实变7例，伴有单侧或双侧胸腔积液10例，伴有肺叶或肺段不张8例。所有患者及家属同意行TBNA检查，检查前查血常规、凝血常规、乙肝五项、心电图等均正常，并排除相关禁忌证。

1.2方法

1.2.1穿刺步骤 术前仔细阅读胸部CT片，结合2009 IASLC新淋巴结分布图确定淋巴结穿刺点。先经鼻行常规纤维支气管镜检查。对于支气管镜检查发现支气管黏膜粗糙隆起肥厚的病例先行TBNA，再行活检刷检。对支气管检查腔内正常的病例根据CT显示淋巴结位置行TBNA。多组淋巴结穿刺的顺序按照先健侧（N3），再中间（N2），然后患侧（N1）的原则。抽取到足够的细胞，完成后用新柏氏TCT保存液冲洗穿刺塑料管并尽量冲洗干净，对不同组淋巴结穿刺物冲洗至一个TCT瓶中，将TCT样本瓶尽快送到细胞室检查。

1.2.2液基细胞学检查 将样本放入液基细胞学检测专用杯内，每10mL加入二硫苏糖醇1mL，混合后放在振荡器上震荡15分钟，至粘液基本溶解，将液体倒入50mL离心管中，3500r/min离心5分钟，弃上清液后加入细胞清洗液3500r/min离心5分钟，弃上清液后吸取沉淀物加入到新柏氏TCT细胞保存瓶中静置10分钟后上机（ThinPrep2000薄层制片仪）制成液基薄片，巴氏染色，中性树胶封片。

1.2.3细胞蜡块制作及免疫组化 将TCT保存瓶中剩余的样本倒入尖底离心管中，2000～3000r/min离心5分钟，弃去上清液，加入10%中性福尔马林20mL，固定1小时，2000～3000r/min离心5分钟后弃去固定液，加入95%酒精离心沉淀，静置30分钟，使细胞凝成团块，弃去上清液，用棉签轻轻将细胞块取出，用包埋纸将细胞块包好，放入100%乙醇中脱水，二甲苯透明，浸蜡后包埋成蜡块，进行连续切片，行HE染色，同时进行免疫组化（S-P法）检测，选择TTF1、CEA、CK5/6、P63、Syn等抗体,相关抗体及二抗均购自北京中杉金桥生物技术有限公司，对来源不明的肿瘤细胞进行免疫组化标记。首先将切片常规烤片，二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，应用PBS缓冲液0.01mol/L在高温高压中进行抗原修复，内源性过氧化物酶体在37°C环境下孵育30分钟，流水冲洗，山羊血清在37°C环境下孵育40分钟，一抗过夜，加入TTF1、CEA、CK5/6、P63、Syn生物学二抗、辣根过氧化物酶孵育30分钟，链霉素过氧化物酶溶液孵育30分钟，DAB显色，苏木精复染，中性树胶封片。在显微镜下观察切片，并拍照。免疫组化阳性判断方法：镜下观察发现，经过抗体孵育及DAB显色后变为棕色或者红棕色的部位为免疫组化阳性部位。首先确定目的蛋白在胞核还是胞浆表达，核表达就应该是核阳性，经苏木素复染后，棕色部位与细胞核染色后重叠。若表达于胞浆或胞膜，则细胞质或者细胞膜染为棕色，不与核的苏木素染色相互重叠。

1.3统计学处理 应用SPSS15.0进行统计学分析，计数资料比较采用χ2检验。

2 结果

2.1细胞蜡块免疫组化检测 镜下显示可疑肿瘤细胞散在分布或聚集成团，细胞核异型性明显，核大小不等，N/C比例失调。对可疑的肿瘤细胞免疫组化检测可见肿瘤组织特征，细胞异型性明显，腺癌可见腺腔形成，鳞癌可见角化珠或细胞间桥，抗体阳性。各病理分型如下图：小细胞癌见第78页图7-8，部分鳞癌；低分化鳞癌见封三图1；腺癌见封三图2-3。

2.2不同方法检测肺癌细胞的比较TCT镜下能清晰的观察到细胞三维结构及细胞背景，本次检测41例阳性，17例阴性，肺癌诊断阳性率为70.69%。细胞蜡块免疫组化镜下观察细胞类似形态与组织学活检相似，可见组织与间质之间的联系，本次检测50例阳性，8例阴性，肺癌诊断阳性率为86.20%。TCT肺癌诊断阳性率显著低于细胞蜡块免疫组化肺癌诊断阳性率（χ2=4.130，P＜0.05）；TCT联合细胞蜡块免疫组化肺癌诊断阳性率显著高于单用细胞蜡块免疫组化肺癌诊断阳性率（χ2=3.940，P＜0.05），详见表1。

2.3敏感性、特异性和准确性58例疑似肺癌患者最终经病理组织学证实为肺癌56例，液基细胞学诊断敏感性为73.21%，特异性为50.0%，准确性为70.69%；细胞蜡块免疫组化组诊断敏感性为89.29%，特异性为50.0%，准确性为86.2%；联合检测组诊断敏感性为100.00%，特异性为100.0%，准确性为100.00%。细胞蜡块免疫组化诊断肺癌的敏感性和准确性均高于液基细胞学（P＜0.05），两组诊断特异性差异无统计学意义（P＞0.05），而两组联合检测诊断肺癌的敏感性、特异性、准确性均显著高于单用液基细胞学组或细胞蜡块免疫组化组 （P＜0.05），详见表2。

3 讨论

TBNA技术是诊断肺癌较为实用的技术，特别对原发或转移肺癌的肺门、纵隔淋巴结评估，对纵隔肿瘤的诊断以及支气管周围有或无外压改变的肺内肿瘤的诊断。近年来，随着操作方法和定位诊断技术的不断完善，以及穿刺活检针的不断改进，TBNA在临床应用越来越广泛，目前TBNA已经成为欧美等国家常规检查的重要组成部分。与传统“金标准”纵隔镜相比较，具有微创、价廉、重复性好等优点，一旦发现疑似肿瘤病灶可以实时穿刺细胞学活检，操作方便。

在纤维支气管镜下进行细胞学检测或病理活检是目前诊断肺癌的主要方法。TCT比传统细胞学检查优势大，与普通涂片相比，TCT均匀薄层，细胞结构清晰，背景色低，能清晰的观察细胞三维结构，肺癌诊断率较高，但敏感性和特异性不高。细胞蜡块技术的基本原理是将细胞凝成团块固定后石蜡包埋，切片后进行免疫组织化学实验。该技术能显著提高肺癌诊断准确率，也可用于液基细胞学诊断。李印等[3]报道采用宫颈细胞学标本中的残余液基细胞样本做成细胞蜡块，可显著提高诊断率。

本文对支气管镜检查发现支气管黏膜粗糙隆起肥厚的病例先行TBNA，再行活检刷检。对支气管检查腔内正常的病例则根据CT显示淋巴结位置行TBNA进行取材，提高了组织活检的准确性。同时在TBNA过程中出血极少，不影响其它操作。本文结果显示，TCT肺癌诊断阳性率显著低于细胞蜡块免疫组化的肺癌诊断阳性率（P＜0.05），这与先前的文献[4]报道结果一致，说明细胞蜡块免疫组化诊断肺癌阳性率较高。而TCT联合细胞蜡块免疫组化诊断肺癌的敏感性、特异性、准确性显著高于各自单独诊断方法（P＜0.05），说明两种检测方法联合应用可进一步提升肺癌诊断率。细胞蜡块组织切片与液基涂片中的肺癌细胞相比较，形态结构差距较小，单用两种方法肺癌细胞的敏感性诊断较弱，本文通过采用液基细胞学法与细胞蜡块组织切片法相结合，两者间相互补充能够更好的提升诊断效果，还能够达到组织学活检的目的，能为肿瘤的组织学分型、来源以及个体化治疗提供帮助[5-8]。晚期肺癌患者有时以体腔积液为首发症状，而传统细胞学检查仅提供恶性肿瘤的诊断，对于原发病灶的寻找并没有帮助，但细胞蜡块组织切片具有可以反复连续切片的优点，因此应用细胞切片进行的其他辅助检查，可以为寻找原发病灶提供线索，该方法的应用对于不易获取组织标本的晚期肺癌患者具有更重要的意义[9]。将液基细胞学法与细胞蜡块组织切片法相结合后，作为一种改良的细胞学制片技术，更能提高肺癌组织学分型的符合率[10]。液基细胞学法联合细胞蜡块组织切片法对于难以取得组织活检标本的肺癌 （如肿块表面出血坏死、气管镜下看不到肿块等情况）的病理组织分型诊断有着非常重大的意义。

综上所述，TCT和细胞蜡块方法联合应用对于诊断肺癌细胞临床效果很好，为肺癌的早期诊断和治疗提供依据。

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