SD大鼠血常规参考值区间建立

王 蕊(通信作者)，温贤涛，王 辉，汤菊莉，管 博，曾亚力

(1北京市医疗器械检验所，北京101111;2医疗器械检验与安全性评价北京市重点实验室，北京101111)

SD大鼠血常规参考值区间建立

王 蕊1，2(通信作者)，温贤涛1，2，王 辉1，2，汤菊莉1，2，管 博1，2，曾亚力1，2

(1北京市医疗器械检验所，北京101111;2医疗器械检验与安全性评价北京市重点实验室，北京101111)

血常规是医疗器械亚慢(亚急)试验中必须测定的项目，但由于血常规易受动物品种、来源、年龄、饲养环境、人员操作、检测试剂等因素的影响，各实验室有必要建立自己的血常规参考值区间。本文以建立我室大鼠血液学检测指标参考区间为目的，以我室常用的SD大鼠为研究动物，结合医疗器械亚慢(亚急)试验周期，90d、28d、14d，对不同周龄(8～10周龄、10～12周龄、19～21周龄)的大鼠进行常规血液学检测，并对结果进行统计学分析，以95%可信范围得出参考值区间。分析发现，各周龄雌雄大鼠白细胞计数(WBC)、红细胞比容(HCT)及网织红细胞(RET)均有显著性差异，且随着周龄增加，各周龄雌雄大鼠红细胞计数(RBC)、血红蛋白测定(HGB)及血小板计数(PLT)等指标也开始出现显著性差异。由此可见大鼠各项血常规指标受年龄及性别等因素影响很大，本研究所建立的血常规参考值区间非常有必要，为我室亚慢(亚急)试验提供血液学判定依据。

血液学检测;SD大鼠;参考区间

0 背景介绍

血液学分析是医疗器械亚慢(亚急)试验中临床病理学观察项目之一，是用以研究、组织、器官和其他系统毒性反应的重要依据［1－2］。目前医疗器械亚慢(亚急)试验主要使用大鼠作为实验动物，大鼠的血常规参考区间也能在一些动物实验相关文献中查到，但考虑到这些指标本身受实验室条件、人员操作、仪器试剂、动物种属年龄等因素的影响［3－6］，其他实验室建立的参考区间不宜直接作为我室的参考，各实验室建立自己的血常规参考区间很有必要，在对实验结果进行毒性判定时，使用本实验室自己建立的参考区间更科学，更可信，本文以我室常用的SD大鼠作为研究动物，在实验设计时充分考虑到大鼠年龄、人员操作、饲养条件、仪器试剂等因素的影响，结合医疗器械亚慢(亚急)试验周期90d(13周)、28d(4周)、14d(2周)对不同周龄的大鼠血常规进行检测，并进行统计分析，初步建立常规参考区间。

1 材料与方法

(1)实验动物:SD大鼠 ，6～8周，雌雄各半(雌雄无孕)，由中国食品药品检定研究院提供，SCXK(京) 2009－0017，雌雄动物分笼于无毒塑料盒内，每笼5只，每周鼠笼清洗2次，食物为提供的标准颗粒饲料，由科澳协力实验动物有限责任公司提供，自由饮水。室温为20～24℃，相对湿度为40%～70%，饲养2～3周，大鼠活动情况和体征无异常后进行本实验。

(2)仪器及耗材:血常规使用的全自动血液分析仪XT－2000i和配套试剂，采用执信医疗提供的配套质控。EDTA抗凝采血管、5mL注射器。

(3)试验方法:SD大鼠起始周龄6－8周，按饲养时间分三组:13周组、4周组、2周组。饲养结束时这三组大鼠分别为19～21周龄、10～12周龄、8～10周龄。用注射器进行下腔静脉采血并储存于EDTA抗凝采血管中，充分混匀后，在血液分析仪上读数。

(4)统计学处理:应用SPSS 11.0 for windows软件，进行统计学分析，比较不同性别及不同周龄大鼠血常规指标的差异。进行数据正态性分布检验，参考范围采用95%可信区间。

2 结果

表1为8～10周龄雌雄大鼠血常规指标均值及参考区间，统计分析结果显示，该周龄大鼠的 HCT、MCV、MCHC、WBC、LY、MONO、NEU、BASO及RET等指标雌雄存在显著性差异。表2为10～12周龄大鼠血常规结果，统计分析结果显示，该周龄大鼠的 HGB、RBC、HCT、WBC、LY、MONO、NEU、EO及RET等指标雌雄存在显著性差异。表3为19～21周龄大鼠血常规结果，该周龄大鼠的HGB、RBC、HCT、MCV、MCH、WBC、LY、MONO、NEU、EO、BASO、PLT及RET等指标雌雄存在显著性差异。从变异系数CV%值看，所有周龄的大鼠白细胞计数及分类CV%值都较高。

表4为8～10周龄与10～12周龄大鼠血常规指标比较，结果显示雄性大鼠的HGB、RBC、MCV、MCH、WBC、PLT及RET等指标存在显著性差异。雌性大鼠的MCV、MCH、BASO、PLT及RET等指标存在显著差异。表5为8～10周龄与19～21周龄大鼠血常规指标比较，雄性大鼠在HGB、RBC、MCV、MCH、MCHC、NEU、BASO、PLT及RET等指标存在显著性差异。雌性大鼠的 RBC、MCV、MCH、MCHC、WBC、LY、BASO、PLT及RET等指标存在显著差异。表6为10～12周龄与19～21周龄大鼠血常规指标比较，雄性大鼠在RBC、MCV、MCH、MCHC、WBC、LY、NEU及BASO等指标存在显著性差异。雌性大鼠的HGB、RBC、MCV、MCH、MCHC、WBC、LY、BASO及RET等指标存在显著差异。

表1 8～10周龄SD大鼠的血常规指标增均值及参考区间(雌雄各140只)

表2 10～12周龄SD大鼠的血常规指标均值及参考区间(雌雄各40只)

表3 19～21周龄SD大鼠的血常规指标均值及参考区间(雌雄各30只)

(续表)

表4 8～10周龄与10～12周龄SD大鼠的血常规指标比较

(续表)

表5 8～10周龄与19～21周龄SD大鼠的血常规指标比较

(续表)

表6 10～12周龄与19～21周龄SD大鼠的血常规指标比较

(续表)

3 讨论

统计分析发现，各周龄雌雄大鼠白细胞计数(WBC)、红细胞比容(HCT)及网织红细胞(RET)均有显著性差异，且各周龄雄性大鼠WBC、HCT及RET均显著高于雌性大鼠的 WBC。随着周龄增加各雌雄大鼠红细胞计数(RBC)、血红蛋白测定(HGB)及血小板计数(PLT)等指标也开始出现显著性差异。不同周龄大鼠的大部分血常规指标也存在显著性差异，可见大鼠血常规指标受性别及周龄等因素影响。与目前能查到的文献参考值相比，我室所得的WBC值相比林健［3］、王学文［7］、王德军等［8］研究结果偏低，但与刘科亮等［9］的研究结果相近。其他指标如HGB、RBC、PLT等也与其它实验室的参考值存在差异。这充分证明了血常规指标受动物品种、来源、年龄、饲养环境、人员操作、检测试剂等因素的影响。因此各实验室应该建立本实验室的血常规参考区间，为结果评判提供参考。从各指标的变异系数(CV%)来看，WBC及分类的变异系数均较大，说明这些指标的离散度大，可能是由于这些指标绝对值较小，比较容易受到偶然因素的影响［3］。

医疗器械亚慢(亚急)毒性试验中，血常规是必须检测的项目之一，是亚慢(亚急)毒性判定的重要指标之一［10－11］。在判断实验组大鼠血常规指标是否正常时，不仅需要与同批对照组大鼠比较，判断是否具有统计学差异，还应与各实验室建立的健康大鼠血常规正常参考区间进行比较。一些血常规指标进行统计学分析时，实验组和对照组进行比较时可能具有显著性差异，但其值仍落在正常参考区间中，可以认为这种统计学差异没有临床意义。当然，血常规指标只是判断亚慢(亚急)性毒性的依据之一，还应该结合血生化及病理结果进行综合判断。血常规指标检测相对病理分析等时间短，出结果快，在亚慢(亚急)试验过程中，可将血常规结果作为初步毒性判定依据，如果血常规结果显示被测样品可能具有毒性，可以考虑暂缓后期的病理试验，待充分讨论后，有必要时再进行病理试验，即为委托方节约时间和费用，也为检测中心节约大量的人力和时间。

4 结论

大鼠血常规指标受动物品种、来源、年龄、饲养环境、人员操作、检测试剂等因素的影响，各实验室应该建立本实验室的大鼠血常规指标参考区间。且在条件许可的情况下，尽可能建立不同年龄、不同性别、不同品种的血常规参考区间。由于血常规指标受采血方式、样本放置时间、检测试剂、人员操作等的影响明显，应该制定统一的操作规程及严格遵守，尽可能避免不必要的误差。作为医疗器械检测机构，各医疗器械检测中心应该建立自己的参考区间，不可随意采用其它实验室或文献提供的参考区间。

［1］苗明.实验动物和动物实验技术［M］.北京:中国医药出版社，1997，336，337，353－354.

［2］刘成玉.临床检验基础 ［M］.北京:科学技术文献出版社，2005.

［3］林健，郑丽宏.大鼠血常规正常参考值范围及评价方法的探讨［J］.海峡预防医学杂志，2007，13(4):57－58.

［4］刘帅，李军延.不同采血方法对Wistar大鼠血常规的影响［J］.实验动物科学，2014，31(2):32－34.

［5］陈华，李春海，贺苏兰.性别因素对大鼠部分血液学，血液生化指标和脏器系数的影响［J］.实验动物科学与管理，1996:13(1);21.

［6］高明，朱华，黄澜.清洁级Wistar大鼠标准指标［J］.医学动物防治，2003，19(6):346.

［7］王学文，高俊峰，胡建国.SD大鼠静血标本放置时间对血常规测定数据的影响［J］.实验动物科学，2012，29(1):63－65.

［8］王德军，周卫民，王辉.光照不均匀性对正常SD大鼠血液生理生化指标的影响［C］.第五届中国中医药实验动物科技交流会.

［9］刘科亮，王林，王睿.SD大鼠血常规指标正常参考范围的探讨［C］.中国西部第八届实验动物管理与学术研讨会.

［10］GB/T 16886.11－2011医疗器械生物学评价第11部分:全身毒性试验［S］.2011.

［11］YY/T 0127.15－2009口腔医疗器械生物学评价第2单元:试验方法亚急性和亚慢性全身毒性试验:经口途径［S］.2009.

R446.1

A

1002－2376(2015)07－0011－05

2014－12－16