炮制对巴戟天中茜草素型蒽醌类成分的影响

史 辑， 崔 妮， 景海漪， 贾天柱

（辽宁中医药大学药学院，辽宁大连116600）

炮制对巴戟天中茜草素型蒽醌类成分的影响

史 辑， 崔 妮， 景海漪， 贾天柱*

（辽宁中医药大学药学院，辽宁大连116600）

目的采用HPLC法比较巴戟天不同炮制品中1，2-二甲氧基-3-羟基蒽醌、1-甲氧基-2-羟基蒽醌、1，3-二羟基-2-甲氧基蒽醌、甲基异茜草素-1-甲醚、甲基异茜草素的含有量。方法巴戟天炮制品以三氯甲烷提取，使用Thermo Syncronis C18色谱柱（150 mm×4.6mm，5mm），流动相为乙腈-0.2%磷酸水，梯度洗脱，检测波长277 nm。结果

巴戟天；炮制方法；蒽醌；1，2-二甲氧基-3-羟基蒽醌；1-甲氧基-2-羟基蒽醌；1，3-二羟基-2-甲氧基蒽醌；甲基异茜草素-1-甲醚；甲基异茜草素

中药巴戟天为茜草科植物巴戟天Morinda officinalis How.的干燥根，具有祛风湿、补肾阳、强筋骨之功效，多用于风湿痹痛，筋骨痿软，遗精阳痿，月经不调，少腹冷痛，宫冷不孕等症［1］。化学和药理实验表明巴戟天中的蒽醌类成分是其主要的生理活性成分，包括rubiadin、rubiadin-1-methylether等。《中国药典》2010年版收载巴戟天的炮制品种有巴戟天、巴戟肉、盐巴戟天和制巴戟天。炮制方法涉及到蒸去心、盐蒸、盐炒、甘草水煮等多种方法。目前药典仅以寡糖耐斯糖的含有量考察巴戟天及其炮制品的质量，并不全面，故本实验采用高效液相色谱法测定巴戟天炮制品中5种茜草素型蒽醌类成分的量，并与巴戟天生品进行同步比较，试图探索炮制前后巴戟天中茜草素型蒽醌类成分的变化规律，为中药炮制品中发挥药效的化学成分及质量评价提供了依据。

1 仪器与材料

Waters2695型高效液相色谱仪，Waters2998检测PDA器；KQ-250DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Mettler AE240电子分析天平 （瑞典）；磷酸 （色谱级），乙腈、甲醇 （色谱级），纯净水，其他试剂均为分析纯。

1，2-二甲氧基-3-羟基蒽醌、1-甲氧基-2-羟基蒽醌、1，3-二羟基-2-甲氧基蒽醌、甲基异茜草素-1-甲醚、甲基异茜草素均为本实验自制，经NMR和MS确认结构，采用HPLC峰面积归一化法计算，纯度均大于98.5%。巴戟天药材购自安徽省亳州市药材市场，产地广西，经辽宁中医药大学翟延君教授鉴定为巴戟天Morinda officinalis How.的干燥根。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验 Thermo Syncronis C18色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 mm），流动相为乙腈（A）-0.2%磷酸水（B），梯度洗脱（0～5 min，20%A；5～20 min，42%A；20～45 min，42%A；45～50 min，60%A）。体积流量0.8 mL/min，检测波长277 nm，柱温30℃，进样量20μL。在此条件下，各色谱峰理论板数均不小于8 000，1，2-二甲氧基-3-羟基蒽醌、1-甲氧基-2-羟基蒽醌与相邻色谱峰的分离度均大于1.5，拖尾因子均符合要求，见图1。

2.2 炮制方法

2.2.1 巴戟天 除去杂质，干燥。

2.2.2 巴戟肉 （蒸去心） 取净巴戟天，照蒸法蒸透，趁热除去木心，切段，干燥。

2.2.3 巴戟肉 （扒去心） 取净巴戟天，手扒除去木心，剪成小段，干燥。

图1 5种蒽醌对照品 （A）和供试品 （B）的高效液相色谱图Fig.1 HPLC chromatogram s of reference substances of five anthraquinones（A）and sam p le（B）

2.2.4 盐蒸巴戟 取净巴戟天，用盐水拌匀，闷润，置适宜容器内，蒸至盐水被吸尽，表面呈黑色时，取出，除去木心，干燥，得巴戟天盐蒸品（每100 g药材，2 g盐加100 mL纯水溶解）。

2.2.5 盐炒巴戟 取净巴戟天，用盐水拌匀，闷润，置锅内，文火炒至盐水被吸尽，表面呈黑褐色时，取出，除去木心，干燥，得巴戟天盐炒品（每100 g药材，2 g盐加100 mL纯水溶解）。

2.2.6 制巴戟 （甘草水煮） 取甘草，捣碎，加水煎汤，加入净巴戟天拌匀，闷润，煮透，趁热除去木心，切段，干燥 （每100 g药材，6 g甘草）。

2.2.7 制巴戟 （甘草水蒸） 取甘草，捣碎，加水煎汤，加入净巴戟天拌匀，闷润蒸制2 h，趁热除去木心，切段，干燥 （每100 g药材，6 g甘草）。

2.2.8 酒蒸巴戟 取净巴戟天，加适量黄酒拌匀，闷润，蒸制2 h，取出，除去木心，干燥，得巴戟天酒蒸品 （每100 g药材，10 m L黄酒）。

2.2.9 酒炒巴戟天 取净巴戟天，加适量黄酒拌匀，闷润，文火炒干，取出，除去木心，干燥，得巴戟天酒炒品（每100 g药材，10 mL黄酒）。

2.3 对照品溶液的制备 取1-甲氧基-2-羟基蒽醌、1，2-二甲氧基-3-羟基蒽醌、甲基异茜草素-1-甲醚、1，3-二羟基-2-甲氧基蒽醌、甲基异茜草素对照品适量，精密称定，分别置于10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成质量浓度分别为1.428 mg/mL、1.634 mg/mL、1.15 mg/mL、0.624 mg/mL、0.508 mg/mL的对照品贮备液。然后分别取上述溶液1 mL、1 mL、1.5 mL、1 mL、0.5 mL置于10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即为混合对照品溶液。

2.4 供试品溶液的制备 取巴戟天药材粉末 （过60目筛）2 g，精密称定，至圆底烧瓶中，加三氯甲烷80 m L回流提取2次，每次2 h，滤液合并，回收三氯甲烷，残渣加甲醇定容至5 mL量瓶中。过0.45 mm微孔滤膜，得巴戟天样品溶液。8种不同炮制品也分别按照该法处理。

2.5 方法学考察

2.5.1 线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.5、0.7、1.0、1.5 mL至10 mL量瓶中，甲醇定容至刻度，摇匀，进样20 mL，按上述色谱条件测定，记录色谱峰面积。以峰面积Y为纵坐标，对照品溶液质量浓度X（mg/L）为横坐标，绘制标准曲线，进行线性回归。回归方程及线性范围见表1，结果表明各组分在各自质量浓度范围内线性关系良好。

表1 5种蒽醌类成分的标准曲线方程Tab.1 Regression equations，linear ranges and correlation coefficients

2.5.2 精密度试验 取 “2.3”项下所得混合对照品溶液，按 “2.1”项下色谱条件进样，连续进样6次，测得5种蒽醌的峰面积的RSD分别为1.5%、1.6%、1.5%、1.7%、1.8%，表明本实验精密度良好。

2.5.3 重复性试验 取巴戟天生品粉末，平行称定6份，按 “2.4”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样，测得1-甲氧基-2-羟基蒽醌、1，2-二甲氧基-3-羟基蒽醌、甲基异茜草素-1-甲醚、1，3-二羟基-2-甲氧基蒽醌、甲基异茜草素的质量分数分别为0.036 7、0.045 2、0.034 0、0.036 3、0.008 mg/g，RSD分别为0.8%、2.9%、0.9%、0.2%、0.2%，表明本实验方法重复性良好。

2.5.4 稳定性试验 取巴戟天生品粉末，按“2.4”项所述方法制备样品溶液，分别于0、1、2、4、6、8、10 h测定，测得5种蒽醌峰面积的RSD分别为 0.8%、2.9%、0.9%、0.2%、 0.2%，表明供试品溶液在10 h内稳定。

2.5.5 加样回收率试验 精密称取已知含有量的巴戟天 （201207001）生品粉末，平行取样6份，每份分别精密加入对照品贮备液，按 “2.4”项下方法制备供试品溶液，按 “2.1”项下色谱条件进行测定，根据测得量和加入量，计算各待测成分的加样回收率，结果见表2。

表2 加样回收试验结果Tab.2 Results of recovery tests

2.6 样品测定 分别取上述9种样品粉末2 g，平行测定3份，精密称定，按 “2.4”项下方法制备供试品溶液，按 “2.1”项下色谱条件各测定3次，得相应色谱峰面积，带入回归方程，计算相应的蒽醌含有量，结果见表3。

3 讨论

3.1 供试品溶液制备工艺的优化 本实验考察了不同比例的甲醇-水、乙酸乙酯、三氯甲烷、乙醇、丙酮作为提取溶剂，不同的提取方法，如超声法、回流法、索氏提取器法，根据考察结果，将提取方法设定为以三氯甲烷为提取溶剂，回流提取2次，每次2 h，能够将蒽醌类成分提取完全。

表3 巴戟天生品及不同炮制品中蒽醌类成分的测定结果 （mg/g，n=3）Tab.3 Detem ination results of anthraguinones in p rocessed samp les（mg/g，n=3）

3.2 色谱条件的优化 本实验考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-磷酸水、乙腈-磷酸水溶液等流动相系统，结果显示以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相时分离度及峰形能够达到较好效果，因此采用乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱。

3.3 炮制过程中蒽醌类成分的变化 实验结果表明巴戟天经炮制后，蒽醌类成分含有量有所变化，盐蒸巴戟天、蒸去心巴戟天、甘草水煮巴戟天的5种蒽醌总量均有所增加，3种炮制方法均为药典收载的炮制方法，也是目前较常用的炮制品种。本课题曾对巴戟天补肾壮阳有效部位进行筛选，发现蒽醌类成分为补肾阳的有效部位，提示巴戟天用于肾阳虚症治疗时，应用盐巴戟、制巴戟和巴戟肉，效果更好。

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Effect of processing on alizarin type anthraquinones content from Morindae officinalis Radix

SHIJi， CUINi， JING Hai-yi， JIA Tian-zhu*
（Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，China）

AIMTo compare the effects of processingmethods on the contents of alizarin anthraquinones（including 1-methoxy-2-hydroxy anthraquinone，1，2-dimethoxy anthraquinone，rubiadin-1-methyl ether，1，3-dihydroxy anthraquinone，and rubiadin）from Bajitian（Morindae officinalis Radix）.METHODSThe analysis of Bajitian chloroform extractwas performed on Thermo Syncronis C18column（4.6 mm×150 mm，5μm）with acetonitrilephosphoric acid water asmobil phase in a gradient elution mode，and the detection wavelength was set at277 nm.RESULTSThe calibration curveswere linear in the range 7.1-57.1 mg/L for 1-methoxy-2-hydroxy anthraquinone（r=1.000），8.2-65.4 mg/L for 1，2-dimethoxy anthraquinone（r=1.000），8.6-345mg/L for rubiadin-1-methyl ether（r=1.000），3.1-124.8 mg/L for 1，3-dihydroxy anthraquinone（r=0.999 9），and 1.3-50.8 mg/L for rubiadin（r=0.999 5），respectively.Their average recoveries were 102.6%，95.2%，99.7%，103.8%，and 103.0%，respectively.Their RSDswere 1.2%，0.8%，1.4%，1.3%，and 2.2%，respectively.CONCLUSIONAs compared with raw Bajitian，processingmakes five anthraquinones contents increase in Bajitian，which compose steaming-and-remove-xylem，processing with salt-water，and coboiling with Gancao.

Morindae officinalis Radix；processing；anthraquinone；1-methoxy-2-hydroxy anthraquinone；1，2-dimethoxy anthraquinone；rubiadin-1-methyl ether；1，3-dihydroxy anthraquinone；rubiadin

R283.3

：A

：1001-1528（2015）06-1294-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.06.029

2014-12-04

国家自然科学基金青年基金项目 （81001635）；国家中医药管理局行业专项 （201107007）

史 辑，女，博士，副教授，硕士生导师，主要从事中药炮制化学研究，E-mail：lnshiji@163.com，Tel：（0411）85890146

*通信作者：贾天柱，男，硕士，教授，博士生导师，主要从事中药炮制原理研究，E-mail：jiatz@126.com，Tel：（0411）85890135

5种成分分别在7.1～57.1 mg/L、8.2～65.4 mg/L、8.6～345 mg/L、3.1～124.8 mg/L、1.3～50.8 mg/L范围内线性关系良好，r2分别是1.000、1.000、1.000、0.999、0.999，加样回收率分别为102.6%、95.2%、99.7%、103.8%、103.0%，RSD分别为1.2%、0.8%、1.4%、1.3%、2.2%。结论与生品相比，巴戟肉 （蒸去心）、盐蒸巴戟、甘草水煮巴戟天中5种蒽醌的含有量有不同程度的增加。