礞石滚痰丸中金胺O与金橙Ⅱ的检测方法

吴嫣艳， 于倩茜

（1.江苏省食品药品监督检验研究院，江苏南京210008；2.南京市江宁中医院，江苏南京211100）

［质量］

礞石滚痰丸中金胺O与金橙Ⅱ的检测方法

吴嫣艳1， 于倩茜2

（1.江苏省食品药品监督检验研究院，江苏南京210008；2.南京市江宁中医院，江苏南京211100）

目的建立检测礞石滚痰丸中2种染色剂 （金胺O与金橙Ⅱ）的方法。方法礞石滚痰丸70%乙醇提取，采用液质联用，高效液相色谱柱为Agela Venusil MP C18（4.6 mm×250 mm，5μm），流动相A为0.02 mol/L乙酸铵溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱，检测波长为430 nm（金胺O）和485 nm（金橙Ⅱ）。结果HPLC法金胺O在2.084～41.680μg/mL范围内、金橙Ⅱ在2.292～45.840μg/mL范围内线性关系良好，金胺O、金橙Ⅱ检测限分别为1.202、0.444 ng，平均回收率为90.9%、94.3%；LC/MS/MS法金胺O、金橙Ⅱ检测限分别为0.305、0.430 ng。结论本方法快速灵敏可靠，可用于礞石滚痰丸中金胺O与金橙Ⅱ的检测。

礞石滚痰丸；液质联用；金胺O；金橙Ⅱ；非法添加

礞石滚痰丸为2013年国家评价性抽验品种，收载于 《中国药典》2010年版一部，处方中含有金礞石、沉香、黄芩、熟大黄四味中药。具有逐痰降火的功效，用于痰火扰心所致的癫狂惊悸，或喘咳痰稠、大便秘结。笔者针对安全性方面做了探索性研究。

近年来，用劣质黄芩非法染色以改善外观，提高售价现象在市场上屡见不鲜。考虑到礞石滚痰丸处方中有黄芩，本实验参考有关文献采用HPLC、LC/MS/MS法建立了礞石滚痰丸中可能非法添加的2种染色剂 （金胺O、金橙Ⅱ） 的检测方法［1-16］。本方法快速、准确、灵敏、可靠，可用于礞石滚痰丸中可能非法添加金胺O、金橙Ⅱ的检测。

1仪器与试剂试药

1.1 仪器 Agilent 1260 HPLC；SHIMADZU LC-10AD HPLC；Agilent1100 Series LC/MSD Trap。

1.2 材料试剂 14批礞石滚痰丸为2013年国家评价性抽验样品，由江苏省食品药品监督检验研究院提供；金胺O对照品 （批号111770-201302）与金橙Ⅱ对照品 （批号111769-200701）均来自中国食品药品检定研究院。

乙腈，色谱纯，Fisher Scientific公司；乙酸铵，色谱纯，Sigma公司；水为超纯水；其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 高效液相色谱法

2.1.1 色谱条件与系统适应性试验 Agela Venusil MP C18色谱柱 （4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相A为0.02 mol/L乙酸铵溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱（0～10 min，A相65%；10～11 min，A相65%→50%；11～18 min，A相50%；18～19 min，A相50%→75%；19～25 min，A相75%；25～27 min，A相75%→20%；27～36 min，A相20%；36～38 min，A相20%→65%；38～60 min，A相 65%）；体积流量为 1.0 mL/min；检测波长为430 nm（金胺O）、485 nm（金橙Ⅱ）；柱温为35℃；进样量为10μL。各成分的理论塔板数均＞50 000，相邻峰的分离度均＞1.5。对照品色谱图及样品典型色谱图见图1、图2。

图1 检测波长430 nm下的高效液相色谱图Fig.1 HPLC chromatogram s by 430 nm

2.1.2 对照品溶液的制备 取金胺O和金橙Ⅱ对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成质量浓度各为20μg/mL的混合对照品溶液，即得。

图2 检测波长485 nm下的高效液相色谱图Fig.2 HPLC chrom atogram s by 485 nm

2.1.3 供试品溶液的制备 取礞石滚痰丸适量，研细，取约1 g，精密称定，加70%乙醇10 mL，超声 （功率为135 W，频率为42 kHz）提取20 min，12 000 r/min离心10 min，取上清液为供试品溶液。

2.1.4 线性关系考察 精密称取金胺O、金橙Ⅱ对照品适量，加70%乙醇制成质量浓度分别为2、4、10、20、30、40μg/mL的系列对照品溶液，在“2.1.1”项所述色谱条件下分别进样10μL。以质量浓度 （μg/mL）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果见表1。

表1 线性关系考察数据Tab.1 Data of linear relation test

2.1.5 精密度试验 取混合对照品溶液 （20 μg/mL），在“2.1.1”项所述色谱条件下连续进样6次，记录峰面积。结果金胺O的RSD为0.32%、金橙Ⅱ的RSD为0.19%，表明仪器精密度良好。

2.1.6 加样回收试验 取礞石滚痰丸样品适量，研细，取约1 g，精密称定，精密加入质量浓度均为200μg/m L的金胺O、金橙Ⅱ混合对照品溶液1 mL，精密加入70%乙醇9 mL，超声 （功率为135 W，频率为42 kHz）提取20 min，12 000 r/min离心10min，取上清液，即得。测定并计算。结果平均回收率（n=6）金胺O为90.9%（RSD= 1.5%）、金橙Ⅱ为94.3%（RSD=1.2%）。

2.1.7 稳定性试验 取同一份加样回收供试品溶液分别于0、2、4、8、12、16、24 h进行测定，结果金胺O的RSD为0.83%、金橙Ⅱ的RSD为0.52%，表明溶液在24 h内基本稳定。

2.1.8 HPLC检测限 取“2.1.4”项下最低浓度对照品溶液加70%乙醇逐步稀释，按 “2.1.1”项所述色谱条件进样，信噪比大于3时，金胺O的检测限为1.202 ng、金橙Ⅱ的检测限为0.444 ng。

2.1.9 样品测定 取礞石滚痰丸样品按上述方法测定，结果14批样品在金胺O、金橙Ⅱ对照品保留时间处均未检出相应的色谱峰。

2.2 液质联用法

2.2.1 条件与参数

2.2.1.1 色谱条件 色谱柱采用Waters Xbridge Shield RP18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相A为0.02 mol/L乙酸铵溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱（0～10 min，A相65%；10～11 min，A相65%→50%；11～18 min，A相50%；18～20 min，A相50%→20%；20～30 min，A相20%；30～31 min，A相20%→65%；31～45 min，A相65%）；体积流量为1.0 mL/min；检测波长为430 nm（金胺O）、485 nm（金橙Ⅱ）；柱温为35℃；进样量为10μL。分流进样，分流比为4∶1。

2.2.1.2 质谱参数 ESI正负离子检测模式（正离子模式检测金胺O，负离子模式检测金橙Ⅱ），雾化器35.0 psi（1 psi=6.895 kPa），干燥气体积流量9.0 L/min，干燥气温度350℃，正离子裂解电压0.80 V，负离子裂解电压1.50 V，扫描范围50～700 m/z。

2.2.2 对照品溶液的制备 即 “2.1.2”项下对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备 即 “2.1.3”项下礞石滚痰丸供试品溶液。

2.2.4 测定结果 取对照品溶液和供试品溶液，按 “2.2.1”项下条件与参数进样，记录质谱图。结果14批礞石滚痰丸均未检出与金胺O、金橙Ⅱ对照品一致的质谱峰。质谱图见图3、图4。

2.2.5 LC/MS/MS检测限 将质谱对照品溶液逐渐稀释，用以确定方法的检出限 （S/N＞3），金胺O检测限为0.305 ng，金橙Ⅱ检测限为0.430 ng。

3 讨论

液质联用法试验时分别采用正离子与负离子方式检测，发现金胺O、金橙Ⅱ分别是正离子方式、负离子方式检测灵敏、稳定，故最终选择金胺O采用正离子方式检测，金橙Ⅱ采用负离子方式检测。

图3 质谱图ESI+Fig.3 LC/MS/MS chrom atogram s by ESI+

中药材及中药饮片是中成药质量的源头，而目前染色药材和饮片在市场上常有发现，势必存在影响中成药质量的可能。为规范市场，保障人民群众安全用药，针对中成药中非法添加染色剂的检测方法研究十分必要。

本研究采用高效液相色谱法和液质联用技术，对礞石滚痰丸中是否含有金胺O、金橙Ⅱ进行检测，建立的方法快速简便准确可靠，可为礞石滚痰丸的质量控制提供参考。

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图4 质谱图ESIFig.4 LC/MS/MS chromatogram s by ESI-

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Identification of auram ine O and orangeⅡin M engshi Guntan Pills

WU Yan-yan1， YU Qian-qian2
（1.Jiangsu Institute for Food and Drug Control，Nanjing 210008，China；2.Nanjing Jiangning Hospital of Traditional Chinese Medicine，Nanjing 211100，China）

AIMTo establish a method for detecting two coloring agents（auramine O and orangeⅡ）in Mengshi Guntan Pills.METHODSThe determination of70%ethanolic extractofMengshiGuntan Pillswasperformed on HPLC and LC/MS/MSmethod.Their column was Agela VenusilMPC18（4.6 mm×250 mm，5μm）with 0.02 mol/L ammonium acctate as mobile phase A and acetonitrile as mobile phase B in a gradient elution manner.The wavelength detection was430 nm for auramine O and 485 nm for orangeⅡ.RESULTSAuramine O and orangeⅡin HPLC chromatogram showed good linearity in the range of 2.084-41.680μg/mL and 2.292-45.840μg/mL，their detection's limits of auramine O and orangeⅡwere 1.202 ng and 0.444 ng，their average recoveries were 90.9%and 94.3%，respectively.The detection's limits of auramine O and orangeⅡin LC/MS/MSwere 0.305 ng and 0.430 ng，respectively.CONCLUSIONThemethod is rapid，sensitive and reliable，and it can be used for the determination ofMengshi Guntan Pillswith adulteration-auramine O and orangeⅡ.

：MengshiGuntan Pills；LC/MS/MS；auramine O；orangeⅡ；adulteration

R927.2

：A

：1001-1528（2015）06-1232-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.06.016

2014-07-03

吴嫣艳 （1984—），女，主管药师，硕士，从事中药质量研究。Tel：（025）86632807，E-mail：21724604@qq.com