盐酸普萘洛尔造模周期对豚鼠银屑病模型的影响

伍长娟，沈 娟

（1.皖南医学院，安徽芜湖 241002;2.合肥市第一人民医院）

银屑病是一种常见的慢性炎症性疾病，以角质形成细胞过度增生伴角化不全、炎症细胞浸润、新生血管形成为其组织病理学的三项突出改变。银屑病的病因迄今尚不清楚，目前认为主要是多基因遗传背景下T细胞失常的免疫性疾病，表皮过度增殖与分化异常和炎症等疾病现象涉及细胞和分子水 平的异常调控[1-2]。缺乏理想的动物模型是银屑病研究面临的主要问题。β-受体阻断剂普萘洛尔外用能使豚鼠细胞cAMP水平下降，导致表皮角化失常和皮层增厚等类似银屑病的组织病理学改变，常被用于银屑病的药效评价[3-7]。但是，关于盐酸普萘洛尔造模时间长短所引起的豚鼠耳部皮损情况，目前尚无综合性的报导。本研究主要考察了盐酸普萘洛尔造模14d、21d和28d豚鼠耳部的皮损情况，以期为豚鼠银屑病模型的应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 药品:盐酸普萘洛尔，湖北拓楚慷元医药化工有限公司，5%盐酸普萘洛尔乳剂用液状石蜡、阿拉伯胶和羧甲基纤维素钠、蒸馏水配制;氯化钠注射液(批号:2A12092704），青州尧王制药有限公司;甲醛溶液(批号:20131118），国药集团化学试剂有限公司，含8%-14%的甲醇以防聚合，贮于阴凉干燥处，远离火种、热源。

1.1.2 实验动物:24只雄性豚鼠，体重200g±10g，由安徽医科大学动物实验中心提供。动物饲养于无毒塑料盒中，普通豚鼠饲料及青菜喂养，自由进水，保持室内温度18-22℃，相对湿度40%-70%，自然光照。饲养7天适应环境后进行实验。

1.2 实验动物分组及给药 24只豚鼠随机分为4组，正常对照组、造模14d组、造模21d组、造模28d组，每组6只。各造模组豚鼠均用棉棒蘸取5%盐酸普萘洛尔乳剂（约200μl）均匀涂抹于双耳背面皮肤，早晚各一次，分别涂抹14d、21d和28d。

1.3 实验动物取材 分别于最后一次涂抹后1h处死各组豚鼠，取双耳给药部位皮肤，10%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，连续切片。每只豚鼠耳部标本各制作3张切片。

1.4 观察指标

1.4.1 一般状况:包括豚鼠毛发、神态、进食、大小便等。

1.4.2 HE染色:大鼠耳部标本连续切片，行常规HE染色，光学显微镜下观察并摄片。每张切片选取10个高倍视野（×200），用显微测量尺测量表皮厚度，取平均值。

2 结果

2.1 豚鼠一般状况 正常对照组豚鼠精神较好，反应灵敏，毛发密有光泽，紧贴身体，饮食饮水、大小便正常，双耳毛发正常无脱落，局部皮肤无红肿。造模14d组，豚鼠精神较差，反应比较迟钝，饮食饮水减少，体重减轻。造模21d组，豚鼠反应迟钝加重，皮毛光泽度较暗，易于脱落，耳部涂抹普萘洛尔乳剂处毛发全部脱落，局部皮肤红肿，触之表皮温度高。造模28d组，豚鼠上述症状加重，大部分耳部结痂，覆有少量白色痂，部分豚鼠耳廓出现糜烂或渗出。

2.2 豚鼠耳部表皮厚度 3个造模组豚鼠耳部表皮厚度均明显厚于正常对照组（P＜0.01）;随着造模时间的延长，豚鼠耳部表皮厚度逐渐增加，3个造模组间两两比较差异具有统计学意义（P＜0.01）。见附表:

附表 各组豚鼠耳部表皮厚度(±s)

附表 各组豚鼠耳部表皮厚度(±s)

与正常对照组比较:aP＜0.01;与造模14d组比较:bP＜0.01;与造模21d组比较:cP＜0.01

组别 n 表皮厚度(μm)正常对照组 6 50.90±1.83造模14d组 6 150.43±2.56a造模21d组 6 178.72±6.66ab造模28d组 6 233.01±4.39abc

2.3 豚鼠耳部皮肤形态结构的变化 ①正常对照组(图1）:豚鼠耳背皮肤角质层较薄，颗粒层约1-3层，棘层约3-5层，基底层为单层柱状细胞，真皮、表皮交界较平，真皮内散在少数单核细胞浸润。②造模14d组(图2）:耳背皮肤角质层略增厚，毛细血管扩张，棘层略肥厚。③造模21d组(图3）:耳背皮肤角质层增厚，真皮乳头呈杵状突起上伸，表皮突出，棘层肥厚。④造模28d组(图4）:皮肤角质层增厚，棘细胞层增厚，真皮乳头略突起上伸，毛细血管扩张，表皮突出，部分角化不全。

图1 正常对照组

图2 造模14d组

图3 造模21d组

图4 造模28d组

3 讨论

银屑病是一种慢性炎症性皮肤病，以青壮年患者为主，病程较长，易复发，甚至终生不愈，给患者的身体和心理带来极大的痛苦，严重影响了患者的生活质量。银屑病在西方国家的发病率约为1.5%-2%，据现有文献资料，我国银屑病发病率为0.123%，并有逐年上升趋势，估计总患病人数接近500万人[8]。目前，治疗银屑病的方法很多，但效果并不令人满意，患者服用药物的依从性也较差，近期疗效尚可，但不能防止复发，并且各种疗法都有一定的不良反应。因此，国内外学者都希望能够研制出低毒、高效的抗银屑病药物。

研制抗银屑病药物最为关键的是复制银屑病动物模型，现有的动物模型都是基于银屑病的病理表现复制的。目前，较理想的银屑病动物模型主要有:自发性动物模型、诱发型动物模型、皮损移植模型、转基因动物模型等，自发性、皮损移植性、转基因动物模型在造模时间、实验要求、复制银屑病病理生理特点等方面，或多或少具有一定的局限性[9]。盐酸普萘洛尔诱发的豚鼠耳廓皮肤病变，重复性好，在某些方面具有与银屑病患者表皮增殖状况相似的特征，较为常用。使用盐酸普萘洛尔涂抹皮肤的方法诱导类似银屑病的组织学改变，是利用普萘洛尔可阻断角质形成细胞β-肾上腺素受体而降低细胞内cAMP水平这一特有的药理作用,导致动物表皮细胞出现角化过度、角化不全和棘层肥厚等类似银屑病的组织病理学改变。

本研究观察了5%盐酸普萘洛尔乳剂造模14d、21d和28d豚鼠耳部表皮厚度变化和病理学变化，结果显示，随着5%盐酸普萘洛尔乳剂造模时间的延长，豚鼠耳部表皮厚度逐渐增加、病理变化逐渐加重，即造模效果为造模28d＞造模21d＞造模14d。在进行抗银屑病药物的研究中，应注意根据药物的特点选择合适的造模周期。

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