不同炮制品瑞香狼毒药材急性毒性试验研究

2015-01-12陈美言

安徽农业科学 2015年9期

关键词：瑞香生品狼毒

胡爽，刘峰，陈美言

(1.沈阳工学院生命工程学院，辽宁抚顺 113122；2.辽宁格林生物药业集团有限公司，辽宁沈阳 110000 ；3.中国医科大学基础医学院，辽宁沈阳 110000 )

不同炮制品瑞香狼毒药材急性毒性试验研究

胡爽1，刘峰2，陈美言3

(1.沈阳工学院生命工程学院，辽宁抚顺 113122；2.辽宁格林生物药业集团有限公司，辽宁沈阳 110000 ；3.中国医科大学基础医学院，辽宁沈阳 110000 )

[目的]通过对瑞香狼毒药材急性毒性试验的研究，对瑞香狼毒生品、醋制品和姜矾制品的急性毒性进行比较，为瑞香狼毒炮制工艺的规范化和临床用药安全提供试验依据。[方法]按照经典急性毒性试验方法，各组试验连续观察10 d，计算各组动物死亡数，采用Bliss法计算小鼠的LD50及其95%的可信限。[结果]瑞香狼毒生品LD50=547.56 mg/kg，其95%的可信限为476.86～625.58 mg/kg；醋制品LD50=689.23 mg/kg，其95%的可信限为546.96～817.22 mg/kg；姜矾制品LD50=976.89 mg/kg，其95%的可信限为826.95～1 134.50 mg/kg。[结论]瑞香狼毒生品经炮制后毒性有所降低，毒性由小到大的排列顺序为姜矾制品<醋制品<生品。

瑞香狼毒；炮制品；急性毒性试验

瑞香狼毒其主要的活性成分有黄酮类、二萜类、香豆素类以及木脂素类化合物[1]。文献资料报道瑞香狼毒中黄酮类和二萜原酸酯类具有较强的体内和体外抗肿瘤作用，同时也是瑞香狼毒的主要有毒成分[2]。所以，采用适当的炮制方法可以避免有效成分的损失，降低毒性。笔者通过对瑞香狼毒药材急性毒性试验的研究，计算急性毒性参数，对生品、醋制品和姜矾制品的毒性进行比较，为瑞香狼毒炮制工艺的规范化和临床用药安全提供试验依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物清洁级昆明种小鼠，体重18～22 g，雌雄各半，由大连医科大学实验动物中心提供，使用许可证号SCXK(辽)2013-0002。

1.2 试验药品瑞香狼毒药材购自于内蒙古，经辽宁中医药大学王冰教授鉴定为正品药材。瑞香狼毒生品、醋制品和姜矾制品的样品液均自制。

1.3 样品液的制备精密称取瑞香狼毒生品、醋制品和姜矾制品的粉末各(过60目筛)50 g，分别加入95%乙醇500 ml，加热回流1 h，过滤，滤液浓缩，蒸干，得干膏，用30%的1，2-丙二醇为溶剂，超声溶解备用。

1.4 主要仪器与设备电子分析天平(D432810821)；腹腔注射器等。

1.5 剂量与分组通过预试验所得到的全死剂量和全不死剂量，设定给药剂量，组距=0.8。同时设立溶媒对照组，即30%的1，2-丙二醇组，以观察溶剂是否对小鼠产生影响。给药剂量分组情况如表1所示。

表1 不同炮制品瑞香狼毒样品液经腹腔注射给药剂量分组情况

1.6 急性毒性测定生品组、醋制品组和姜矾制品组中清洁级小鼠各50只，体重18～22 g，雌雄各半，按体重随机分为5组，每组10只。试验前禁食(不禁水)12 h，采用腹腔注射法，注射剂量0.2 ml/10g。各组连续观察10 d，计算各组动物死亡数，采用Bliss法计算小鼠的LD50及其95%的可信限。

2 结果与分析

2.1 瑞香狼毒生品组急性毒性试验由表2可见，按瑞香狼毒生品组剂量等级1组给药后，小鼠明显出现活动困难、呼吸急促，死亡时间短暂，最短时间约3 min，其余小鼠30 min内全部死亡；剂量等级5组给药，小鼠死亡率明显下降，仅有1只小鼠死亡；其他等级给药，小鼠明显活动困难，呼吸急促、步态不稳。死亡率按照用药剂量的降低有所升高。给药24 h后，未亡小鼠饮食饮水逐渐恢复正常，存活小鼠产生的毒性反应随时间慢慢恢复。空白对照组和溶媒对照组未见有小鼠异常反应和死亡。

表2 瑞香狼毒生品样品液经腹腔注射给药后小鼠急性毒性试验结果

剂量∥mg/kg动物数∥只死亡动物数∥只死亡率∥%900101010072010880576105504611033036910110溶媒对照组1000空白对照组1000

2.2 瑞香狼毒醋制品组急性毒性试验表3显示，按瑞香狼毒醋制品组剂量等级1组给药后，小鼠同样出现活动困难、呼吸急促，但死亡时间延长，在12 h内陆续死亡，仅有1只小鼠存活；剂量等级5组给药，小鼠死亡率下降，仅有2只小鼠死亡；其他等级给药，小鼠肌肉痉挛明显，静伏少动，死亡时间延长至48 h。空白对照组和溶媒对照组未见有小鼠异常反应和死亡。

2.3 瑞香狼毒姜矾制品组急性毒性试验按瑞香狼毒姜矾制品组剂量等级1组给药后，小鼠死亡时间延长至48 h内陆续死亡，1只小鼠存活；剂量等级5组给药，小鼠死亡率下降，仅有1只小鼠死亡；其他等级给药，死亡时间延长至60 h。

空白对照组和溶媒对照组未见有小鼠异常反应和死亡(表4)。

表3 瑞香狼毒醋制样品液经腹腔注射给药后小鼠急性毒性试验结果

剂量∥mg/kg动物数∥只死亡动物数∥只死亡率∥%12001099096010880768106606141044049210220溶媒对照组1000空白对照组1000

表4 瑞香狼毒姜矾制品样品液经腹腔注射给药后小鼠急性毒性试验结果

剂量∥mg/kg动物数∥只死亡动物数∥只死亡率∥%1600109901280108801024106608191033065510110溶媒对照组1000空白对照组1000

2.4 LD50及其可信限由表5可知，生品LD50=547.56 mg/kg，其95%的可信限为476.86～625.58 mg/kg；醋制品LD50=689.23 mg/kg，其95%的可信限为546.96～817.22mg/kg；姜矾制品LD50=976.89 mg/kg，其95%的可信限为826.95～1 134.50 mg/kg。