HPLC法测定白子菜中黄酮类物质的含量

彭勇 徐业燕 杜成智

【摘要】目的：建立白子菜中黄酮类物质（芦丁）的含量测定方法。方法：采用Waters Symmetry C18色谱柱，流动相为甲醇-1%冰醋酸（35∶65），检测波长为358nm，柱温25℃。 结果：芦丁在00232～0116μg （r=09998）范围内线性关系良好，平均加样回收率为994%，RSD为09%。结论：该法简便可行，结果准确，重复性好，可用于该药材的含量测定。

【关键词】白子菜;HPLC;芦丁

【中图分类号】R2841【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）07-0020-02

Determination of Rutin in Gynura divaricata（L）DC by HPLCPENG Yong1， XU Ye-yan3， DU Cheng-zhi2*

1 Pharmaceutical factory of Guangxi University of Chinese Medicine， Nanning， Guangxi，530001;

2Guangxi University of Chinese Medicine， Nanning， Guangxi，530001;

3 Guangxi Maternal and Child Health Hospital， Nanning， Guangxi，530001Abstract：Objective： To establish a HPLC method for the determination of Rutin in Gynura divaricata（L.）DC.. Method： Waters Symmetry C18 analytical column was used， mobile phase： methanol-1% glacial acetic acid （35∶65）， UV detection wavelength was at 358nm; Column temperature was at 25℃. Result： Under the chromatographic conditions used， the calibration curve of Rutin was linear in the range of 00232～0116μg （r=09998）. The average recoveries was 994%， RSD： 09%. Conclusion： The method is accurate， effective and feasible. It can be used for the determination of the contents of Rutin in Gynura divaricata（L.）DC..

Keywords：Gynura divaricata（L.）DC.; HPLC; Rutin

白子菜是菊科植物白子菜Gynura divaricata（L.）DC.的全草，別名白背三七、大肥牛、枪刀药、清心菜、土生地、白仔菜药等[1]，多年生草本植物，主产于广西，在南方各省均有分布。全草消热解毒，活血化淤，去风消肿，根入药，有泻火、凉血、生津之功效，是民间治疗乳腺炎、关节炎、气管炎等各种炎症常见中草药[2]。现代药理学研究表明[3-4]，以上功效与黄酮化合物有关。为有效控制药材质量，本研究参考相关文献[5-6]建立了白子菜中芦丁的含量测定方法。

1仪器与试药

美国Agilent 1260 Series高效液相色谱仪：四元泵，在线脱气机，自动进样器 （G1329B），柱温箱;KQ3200B型超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）;LG16-WA台式高速离心机（北京京立离心机有限公司）;超纯水系统（MILLIPORE）;电子分析天平（CP224S，Sartorius 德国）。乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为高纯水。芦丁对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100080-200707）。白子菜（采自南宁市郊区）由广西中医药大学药用植物教研室鉴定为菊科植物Gynura divaricata（L）DC.的全草。

2方法与结果

21色谱条件Waters Symmetry C18色谱柱（250mm ×46mm，5μm），柱温25℃;流动相： 甲醇-1%冰醋酸（35∶65），流速10ml/min;检测波长358nm，进样量10μl。

22对照品溶液制备精密称取芦丁对照品适量，加甲醇制成每1ml含芦丁058mg的溶液，即得芦丁储备液。

23供试品的制备取60℃烘干的白子菜地上部分粉碎后，过筛备用。精密称取经过前处理的白子菜粗粉1g，精密加入甲醇25ml，精密称定后超声处理30min，放冷，补足减失重量。滤过后取续滤液离心10min，静置，用045μm滤膜滤过，即得供试品溶液。

24系统适应性试验吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μl注入高效液相色谱仪，按“21 项”下色谱条件记录色谱图，色谱图见图1-2，芦丁峰与邻近峰达到基线分离，分离度良好（R>1 5）。

25线性试验精密吸取对照品储备液适量，加甲醇定容，配制系列对照品溶液，分别吸取10μl注入高效液相色谱仪，按“21项”下色谱条件测定峰面积。以对照品的进样量（μg）对峰面积进行线性回归，求得回归方程，为Y=16987X-281，r=09998，线性范围为00232～0116μg。

26精密度试验精密吸取对照品溶液10μl，重复进样6次，依次测定。测得RSD为009%（n= 6），表明仪器精密度良好。

27稳定性试验取供试品溶液按“21项”下色谱条件分别于0、2、4、6、8、12h进样测定，测得结果RSD为079% （n = 6）。结果表明样品溶液在12h内稳定。

28重复性试验取白子菜药材，按“23项”下供试品溶液的制备方法平行制备供试品溶液6份并依法测定，计算得大芦丁平均含量为0543mg/g，RSD为16% （ n = 6），说明该法重复性较好。

29加样回收率试验取已知含量并经前处理的药材6份，取约1g，精密称定，分别精密加入一定量的芦丁对照品溶液，其余操作按23项下供试品溶液的制备方法，测定，计算，结果芦丁平均加样回收率为994%，RSD=16% （ n=6 ），说明本方法准确度较好。结果见表1。

表1加样回收率试验结果（n=6）

原有量

/mg加入量

/mg测定量

/mg回收率

/%平均回

收率/%RSD/%0537405800111239912

994

0905428058001121499760544705800112219955053810580011097985505396058001125310100541605800111259843

210樣品含量测定取6批样品，按“23项”制备供试品溶液，在“21项”色谱条件测定，结果见表2。

表2含量测定结果（n=3）

编号（mg/g）RSD/%105520820537143053906405471550543196055315

3讨论

31在实验过程中，曾分别采用不同比例的乙醇、甲醇超声提取和回流考察提取率，结果显示100%甲醇超声提取即可较好去除干扰杂质又可提取完全效果最佳。

32在流动相的选择中，分别考察了多种流动相的分离效果，经过实验分析，综合考虑了分离效果、基线平稳、操作方便性等情况，最终确定甲醇-1%冰醋酸（35∶65）为最佳流动相，该条件下测定物质出峰快，与杂质峰的分离度均达到15以上。

33白子菜的化学成分研究发现其含有黄酮类物质。近现代药理学研究表明，白子菜的药用效果与黄酮化合物有关。国内生物医药企业通过技术开发、粗加工、精细提取人体生理活性有效成分，加工提取白子菜浓缩汁、固体饮料、冻干产品、萃取物（黄酮、多糖提取）等系列产品。本方法对白子菜药材中芦丁的含量测定方法进行初步探索。该法简便可行，结果准确，重复性好，可用于白子菜药材及含白子菜制剂中芦丁的含量测定。

参考文献

[1]国家中医药管理局《中华本草》编委会 中华本草[M ]. 上海： 上海科学技术出版社， 1999： 7841

[2] 广东植物研究所. 海南植物志[M]. 北京：北京科技出版社， 1974： 416

[3] 姜曼花，胡剑卓，邱文高，等. 白背三七多糖和黄酮降血糖及耐缺氧作用[J]. 中国医院药学杂志， 2009，29（13）：1074-1076.

[4] 俞浩，毛斌斌，周国梁，等.白背三七总黄酮对糖尿病大鼠的降血糖作用[J]. 食品科学， 2013， 34（15）： 295-298.

[5] 黄骐，林荣华，郑钊，等. 白子菜总黄酮含量的测定[J]. 福建师范大学学报（自然科学版）， 2006，22（2）：118-120.

[6] 林荣华，代容春，陈由强. 白子菜总黄酮提取工艺研究[J]. 福建轻纺， 2009， （6）： 28-30.

（收稿日期：20140217）