不同生长方式防风色原酮物质含量测定及差异性分析

王文祎 徐 佳 刘 杰 杨瑶珺

(北京中医药大学中药学院，北京，100102)

不同生长方式防风色原酮物质含量测定及差异性分析

王文祎 徐 佳 刘 杰 杨瑶珺

(北京中医药大学中药学院，北京，100102)

目的：以同时测定防风中的两种色原酮物质升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷为目标，建立了上述两种物质的的含量测定方法。方法：色谱柱采用Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；梯度洗脱的流动相为水、甲醇，检测波长254 nm，流速1 mL/min，柱温35 ℃，进样量10 μL。结果：不同生长方式的防风样品的5-O-甲基维斯阿米醇苷含量无统计学意义，野生和栽培防风的升麻素苷含量有差异，不同生长方式对防风样品的色原酮含量有差异。结论：野生防风质量较好，同时测定两种色原酮方法简便，结果准确，精密度、重现性、稳定性较好，可以此作为防风中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的测定方法。

防风；色原酮；升麻素苷；5-O-甲基维斯阿米醇苷

2010版《中华人民共和国药典》使用固定流动相比例的方法对升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷进行含量测定。本实验通过考察发现，采用固定比例流动相的方法在前10 min时，标准品出峰完全，但样品中色谱峰未能完全分离，可能会影响实验的结果。

因此本实验参考相关文献[7-15]以梯度洗脱的方法同时测定升麻素苷，5-O-甲基维斯阿米醇苷为目标，建立了防风中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量测定方法。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本实验共收集野生防风样品15份，栽培防风25份，所有样品经北京中医药大学杨瑶珺教授鉴定为伞形科植物Saposhnicoviadivaricata(Turcz.)Schischk.的干燥根。样品见表1。

仪器使用Sigma 3K15离心机(Sigma公司)，Sartorious BP110S分析天平(北京赛多利斯仪器有限公司)，DFT-100手提式高速中药粉碎机(温岭市大德中药机械有限公司)，Aglient 1100液相系统(Aglient公司，美国)，KQ5200E超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

试剂使用甲醇(Fisher公司，色谱纯)，屈臣氏蒸馏水，升麻素苷对照品(111522-201209，纯度98%，中国食品药品检定研究院)，5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品(111523-201208，纯度98%，中国食品药品检定研究院)。

表1 测定防风样品表

1.2 方法

1.2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：水、甲醇(梯度洗脱如表2)；检测波长254 nm，流速1 mL/min，柱温35 ℃，进样量10 μL。

表2 梯度洗脱表

1.2.2 对照品溶液的配置 精密称取升麻素苷对照品4.14 mg，5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品3.27 mg，加甲醇定容到10 mL容量瓶中，再分别精密吸取两种对照品溶液各1 mL，混合、定容，制成每1 mL含升麻素苷0.0828 mg，5-O-甲基维斯阿米醇苷0.0654 mg的混标溶液。

近年来，随着大数据、互联网、云计算等智能化信息技术在教育领域的深入，加之新课改提倡以人为本的全新发展观的实施，我国开始逐渐进入网络强国时代，并积极推进信息技术与学校教育教学的全面融合，试图改善旧式教学方式.那么说到底，什么样的教育才能克服学校教育在过去乃至现在始终存在的漏洞？本文提出一种新型教育方式，即智慧教育，它可以引导学生发现、发展和培养智慧.而要想实现这一切就必然需要创造一个具备智慧教育所有要求的环境——智慧学校.同时放眼国际，世界多个国家也均在围绕智慧学校不同程度地展开了相应的研究，在数学教学领域尤为凸显[1].

1.2.3 样品溶液的配置 精密称取防风样品粉末(过60目筛)0.5 g，加甲醇10 mL，浸泡过夜，超声提取20 min，离心15 min，取滤液用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，即得。

1.3 方法学考察

1.3.1 标准曲线绘制及线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液2 μL、4 μL、6 μL、8 μL、10 μL、16 μL、24 μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积值，以对照品进样量为横坐标，峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线。结果：升麻素苷计算回归方程为Y=2249.3X+13.749，r=0.9999，含量在0.1656-1.9872 mg/mL范围内；5-O-甲基维斯阿米醇苷计算回归方程为Y=2747.1X+20.482，r=0.9997，含量在0.1308～1.5696 mg/mL范围内，表明线性关系良好。

1.3.2 精密度考察 分别吸取对照品溶液，0.45 μm滤膜滤过，进样5次，每次10 μL，分别测定升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷峰面积。结果：RSD分别为0.28%、0.34%，表明仪器精密度良好。

1.3.3 重现性考察 精密称取防风药材(FFA-15)2批，每批5份，每份0.5 g，加甲醇10 mL，浸泡过夜，超声提取20 min，离心15 min取滤液用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，分别进样10 μL，测定峰面积计算含量。结果：升麻素苷RSD为0.48%，5-O-甲基维斯阿米醇苷RSD为1.25%，表明重现性良好。

1.3.4 稳定性考察 精密吸取同一供试品溶液10 μL，在0 h，4 h，8 h，12 h，24 h分别测定峰面积。结果：升麻素苷RSD为0.62%，5-O-甲基维斯阿米醇苷RSD为1.43%，表明样品在24 h内基本稳定。

1.3.5 加样回收率考察 精密称取已知升麻素苷含量的防风药材粉末6份，分别加入相同含量的升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液，测定峰面积，计算含量。结果：升麻素苷平均加样回收率为98.98%，RSD为2.56%，5-O-甲基维斯阿米醇苷平均加样回收率为96.72%，RSD为1.13%，符合要求。

2 结果

2.1 野生和栽培防风样品的含量测定 本实验对25份栽培防风样品、15份野生防风样品，按“样品溶液配置”方法制备供试品溶液，分别进样10 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱峰面积，根据标准曲线方程计算升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量。测定结果见表3。

表3 防风样品中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷含量测定结果表

样品编号升麻素苷(%)5-O-甲基维斯阿米醇苷(%)总含量(%)样品编号升麻素苷(%)5-O-甲基维斯阿米醇苷(%)总含量(%)FA-10.36240.13230.4947FB-10.19230.17020.3626FA-20.38480.12440.5092FB-20.12710.09930.2263FA-30.23590.09570.3315FB-30.17360.19130.3649FA-40.20540.19450.3999FB-40.12030.16490.2853FA-50.11470.29480.4095FB-60.19670.18670.3834FA-60.30410.11310.4172FB-70.15750.08620.2437FA-70.17390.05520.229FB-80.22870.15370.3825FA-80.85470.25071.1054FB-90.13120.05660.1877FA-90.26380.19370.4575FB-100.26260.11810.3807FA-110.12420.33530.4594FB-110.20470.13360.3382FA-120.35620.12780.484FB-120.14720.13190.2791FA-130.14010.13860.2787FB-150.23210.21450.4467FA-150.37210.1030.4751FB-160.20320.29240.4956FA-160.21170.0820.2938FB-170.01890.42010.4391FA-170.29520.14340.4386FB-200.58240.44471.0271平均含量0.2930.1590.452FB-210.10550.15960.265FB-220.07010.10330.1733FB-230.15140.11950.2709FB-240.15910.12910.2882FB-250.14550.22450.37FB-260.16170.20490.3666FB-270.13990.06550.2055FB-280.10270.06960.1723FB-290.09860.14880.2474FB-300.11430.04260.1569平均含量0.1690.1650.334

本实验对25份栽培防风样品，15份野生防风样品进行了含量测定。2010版《中华人民共和国药典》规定防风中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的总量不得少于0.24%。

40份样品中有7份样品的升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的总量低于0.24%。其中栽培防风样品中FFB-2、FFB-9、FFB-22、FFB-27、FFB-28、FFB-30六批升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的总量低于0.24%，不合格率为24%。野生防风样品中FFA-7批样品升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的总量总量低于0.24%，不合格率为6.7%。野生防风的合格率高于栽培防风。

栽培防风升麻素苷平均含量为0.17%，5-O-甲基维斯阿米醇苷平均含量为0.16%，升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷平均含量为0.33%。野生防风升麻素苷平均含量为0.29%，5-O-甲基维斯阿米醇苷平均含量为0.16%，升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷平均含量为0.45%。从总体上看，野生防风的色原酮类成分高于栽培防风。

2.2 野生和栽培防风在升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷含量上的差异性 将野生和栽培防风分别与升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷含量相关联，使用SPSS软件对其进行分析，显著性差异情况见表4。

表4 野生和栽培防风的色原酮含量显著差异表a

注：a.分组变量：品种(1=栽培，2=野生)

升麻素苷含量数据、5-O-甲基维斯阿米醇苷含量数据和色原酮总含量数据通过正态性检验，sig<0.05均不服从正态分布，因此用非参数的秩和检验。升麻素苷含量渐进显著性(双侧)<0.05，说明野生和栽培防风的升麻素苷含量有统计学意义，不同生长方式的防风样品的升麻素苷含量不一样。5-O-甲基维斯阿米醇苷含量渐进显著性(双侧)>0.05，说明野生和栽培防风的5-O-甲基维斯阿米醇苷含量无差异，不同生长方式的防风样品的5-O-甲基维斯阿米醇苷含量无统计学意义。色原酮总含量渐进性显著性(双侧)<0.05，说明野生和栽培防风的色原酮总含量有统计学意义，不同生长方式对防风样品的色原酮含量有差异。

3 讨论

通过实验数据可看出栽培与野生防风色原酮总量的含量有差异，野生防风的色原酮总量要高于栽培防风，说明野生防风的质量要优于栽培防风。而从两种色原酮物质含量来看，差异主要体现在升麻素苷的含量。野生防风升麻素苷含量明显高于栽培防风升麻苷含量，而5-O-甲基维斯阿米醇苷含量在栽培和野生防风中含量基本相同，差异性不显著。因此可增加样本量，继续探究栽培与野生防风和升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷的关系，考察升麻素苷的含量是否适合作为鉴别栽培和野生防风、评价防风质量优劣的依据。

本实验通过梯度洗脱方法同时测定升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷，有效避免呀药典方法中色谱峰未能完全分离的问题，而且方法简便，结果准确，精密度、重现性、稳定性较好，可以此作为防风中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的测定方法。

本实验还考查了栽培与野生防风中两种色原酮物质含量的差异，并采用SPSS软件分析，但数据显示栽培与野生防风只在升麻素苷含量有差异，5-O-甲基维斯阿米醇苷无统计学意义，这可能与防风的内在生长机制有关，值得进一步探究。

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(2014-09-28收稿 责任编辑：张文婷)

Content Determination and Difference Analysis of Chromone in Fangfeng with Different Growth Patterns

Wang Wenyi, Xu Jia, Liu Jie, Yang Yaojun

(TMCCollege,BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100102,China)

Objective:To establish a content determination method to simultaneously determine two kinds of chromoneS including Prim-O-glucosylcimifugin and 4'-O-beta-Glucopyranosyl-5-O-Methylvisamminol in Fangfeng. Methods: Agilent TC-C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) was used as chromatographic column; water and methanol were used as gradient elution of the mobile phase, wave length of 254nm was detected, with the flow rate of 1 mL / min, column temperature of 35 ℃, the injection volume 10μL. Results: 4'-O-beta-Glucopyranosyl-5-O- Methylvisamminol content of Fangfeng with different growth patterns had no significant difference; there was difference in the content of Prim-O-glucosylcimifugin between wild and cultivated Fangfeng; there were differences in Chromones contents in Fangfeng with different growth patterns. Conclusion: Wild Fangfeng has better quality, and the simultaneous determination of two Chromones method is simple, accurate, with good precision, reproducibility and stability, and this can be used as determination method of Prim-O-glucosylcimifugin and 4'-O-beta-Glucopyranosyl-5-O-Methylvisamminol in Fangfeng.

Fanbfeng; Chromone; Prim-O-glucosylcimifugin; 4'-O-beta-Glucopyranosyl-5-O-Methylvisamminol

北京中医药大学“重点学科”开发课题(编号：2013-2DXKKF-21)

杨瑶珺(1969—)，女，博士，教授，硕士研究生导师，黑龙江哈尔滨人，北京中医药大学中药学院，研究方向：中药品种及质量鉴定，E-mail：yangyaojunbucmtcm@163.com

R284.1

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.09.031