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慢性乙肝患者及HBV携带者CD8+T细胞表面活化分子CD38和HLA—DR表达研究

2015-01-05冯江俞加正郑洁怀陈华忠

中国现代医生 2014年34期
关键词:慢性乙肝

冯江+俞加正+郑洁怀+陈华忠

[摘要] 目的 研究慢性乙肝(CHB)患者阿德福韦酯治疗前后及HBV携带者CD8+T细胞表面活化分子CD38和HLA-DR表达情况,并探讨其与疾病进展的关系。 方法 收集32例经阿德福韦酯治疗的CHB患者,31例HBV携带者和28例正常对照,采集CHB患者治疗前后及HBV携带者和正常对照外周血。采用流式细胞术检测CD4+和CD8+T细胞数量和比例,以及CD8+CD38+和CD8+HLA-DR+T细胞比例,HBV DNA和生化由本院检验室检测。 结果 CHB患者治疗前CD8+CD38+T细胞比例显著高于HBV携带者和正常对照组,阿德福韦酯治疗后显著降低(P<0.05)。HBV携带者CD8+CD38+T细胞比例高于正常对照组(P<0.05)。CHB患者治疗前CD8+HLA-DR+T细胞比例显著高于正常对照组(P<0.01),但与HBV携带者无明显差异,阿德福韦酯治疗后显著下降,仍高于正常水平(P<0.05)。 结论 HBV感染可以引起CD8+T活化水平显著升高,阿德福韦酯抗病毒治疗能够降低CD8+T的活化。CD8+T活化水平是良好的HBV感染病情评价指标。

[关键词] HBV;慢性乙肝;免疫活化;CD38;HLA-DR

[中图分类号] R512.62 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701(2014)34-0014-04

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是一种非细胞致病性病毒,HBV感染的临床结果主要依赖于宿主的免疫应答情况。研究发现T细胞免疫应答对HBV感染的进展十分重要[1],其中CD8+T细胞免疫应答对控制病毒的复制起主要作用[2]。缺乏高强度的、特异性的免疫应答是导致慢性乙肝(chronic hepatitis B,CHB)病毒清除失败和疾病进展的主要原因[3,4]。研究外周血T细胞免疫活化状态对揭示CHB发病机制具有重要意义,尤其是CD8+T细胞的免疫活化。CD38分子是一种表达在早期T细胞表面的糖蛋白,成熟以后消失,但是T细胞活化后又重新出现[5]。作为T细胞免疫活化的标志,CD38在许多急性或慢性感染中均会表达升高,如人类免疫缺陷病毒(HIV)、EB病毒(EBV)等感染[5,6]。另外一个T细胞免疫活化的指标是人类白细胞抗原-DR(HLA-DR),在HIV的感染中可作为预测疾病进展的指标之一[7]。到目前为止,对HBV感染者及CHB患者T细胞免疫活化的研究较少。本文对慢性乙肝患者阿德福韦酯治疗前后及HBV携带者CD8+T细胞表面活化分子CD38和HLA-DR表达情况进行研究,并探讨其与病毒复制和疾病进展的关系。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取我院2010年6月~2011年6月接受阿德福韦酯抗病毒治疗的CHB者32例,其中男20例,女12例,平均年龄(50.2±22.4),平均病程(6.5±5.7)年。诊断标准符合2000年西安全国第10届病毒性肝炎会议所修订的《病毒性肝炎防治方案》诊断标准[3],并排除其他病毒性肝炎、酒精、药物引起的肝损伤等。入组后接受阿德福韦酯10 mg/d 治疗12个月以上。另外,选取HBs抗原阳性的乙肝携带者31例,其中男22例,女9例,平均年龄(44.8±26.9)岁。以本院门诊体检者32人(均无特殊病史,体检无异常发现,anti-HBsAg(-),近2个月无感染史)作为正常对照组,男18例,女10例,平均年龄(42.1±20.6)岁。

1.2 样本的采集

采集慢性乙肝患者治疗前及治疗12个月后的外周血2 mL/人,以及HBV携带者和正常对照组血样2 mL/人,无菌EDTA抗凝管收集做流式细胞术检测,另外采集血样分别送化验室进行生化及HBVDNA等检测。

1.3 流式细胞术检测

荧光标记的单克隆抗体购自美国BD公司,CD4+和CD8+T细胞计数采用BD公司的细胞计数管,其余细胞比例检测采用普通流式管。每管加入50 μl血样及相应抗体,抗体组合如下:CD3-PE/CD4-FITC,CD3-PE/CD8-FITC,CD3-PE/CD8-FITC/CD38-APC,CD3-PE/CD8-FITC/HLA-DR-APC。标记好的血样室温避光孵育15 min,裂解红细胞后,采用BD公司FACScan四色流式细胞仪进行检测。

1.4 统计学分析

检测结果均以均数±标准差表示,应用SPSS 15.0软件进行数据分析,定量资料两组间数据比较采用t检验,多组间数据比较采用One-Way ANOVA(SNK法),相关性分析Persons检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CHB患者、HBV携带者及对照组生化和免疫学比较

CHB患者平均治疗时间为(18.8±5.7)个月,治疗前后相比ALT、TBIL和HBV DNA均有显著下降(P<0.05),CD4+T细胞数量有所上升,CD8+T细胞数量下降(P均>0.05),但仍显著低于正常水平(P<0.01),CD4+T细胞比例改变不明显,CD8+T细胞比例治疗前显著高于正常对照组,治疗后与治疗前比显著下降(P<0.05)。HBV携带者HBV DNA显著高于CHB治疗前,CD4+T细胞数量和比例均高于CHB患者治疗前水平,但CD4+T细胞数量低于正常水平(P均<0.05),CD8+T细胞水平与其余组比较无显著差异。见表1。

2.2 各组CD8+T细胞免疫活化情况比较

CHB患者治疗前CD8+CD38+T细胞比例显著高于HBV携带者和正常对照组,阿德福韦酯治疗后显著降低,低于HBV携带者水平,但仍稍高于正常水平,HBV携带者CD8+CD38+T细胞比例高于正常对照组。以上P均<0.05,见图1A。

各组CD8+HLA-DR+T细胞比例均低于CD8+CD38+T细胞比例,CHB患者治疗前CD8+HLA-DR+T细胞比例显著高于正常对照组(P<0.01),但与HBV携带者无明显差异,阿德福韦酯治疗后显著下降,仍高于正常水平(P<0.05)。见图1B。

2.3 CD8+T细胞免疫活化与病毒学和免疫学指标的相关性分析

CD8+CD38+%和CD8+HLA-DR+%与HBV感染的病情指标均表现出良好地相关性。具体为CD8+CD38+%和CD8+HLA-DR+%与HBV DNA 和ALT水平呈正相关(P<0.05),与CD8+T细胞数呈负相关(P<0.05),与CD4+T细胞数也呈负相关,但P>0.05。见表2。

3 讨论

除了HBV DNA和肝功能外,T细胞的活化状态也是评价HBV感染的重要指标,但是目前这方面的研究报道不多。既往的研究发现,CHB患者与正常人群及HBV携带者相比,外周血T细胞亚群存在比例失衡,体现在CD8+T细胞比例增高、CD4+T细胞比例及CD4+/CD8+的下降[8,9],这与我们的研究相符。在我们的研究中HBV感染能够引起CD8+T细胞的显著活化,并且CHB患者的活化程度高于HBV携带者,说明CD8+T细胞的活化参与了CHB的发病过程。许多研究发现,CD8+T细胞在病毒的清除和疾病的进展方面起有重要作用,CD8+T细胞的活化反映了CD8+T细胞清除病毒的能力[10,11]。但另一方面,CD8+T细胞的过度活化又会引起机体的免疫损伤,造成疾病进展。我们的研究发现,CD8+CD38+和CD8+HLA-DR+T细胞的比例与CD4+和CDC8+T细胞的数量呈反比,说明CD8+T细胞免疫活化可能是造成CHB患者和HBV携带者CD4+T细胞和CD8+T细胞数量下降的重要原因。Cao等[12]研究发现,在CHB患者中存在持续的慢性免疫活化,但不如在HIV和EBV感染中的强烈,这可能与HBV感染主要局限于肝脏有关。大量激活的T细胞,包括CD4+T细胞核CD8+T细胞,最终大部分会凋亡,只有少数会转化为静息型的记忆细胞存活下来。长期慢性的过度免疫活化导致HBV感染者CD4+和CD8+T细胞大量消耗,最后导致免疫功能下降,不能抑制病毒的复制,进展到慢性肝病期[13]。

CD38和HLA-DR分子做为T细胞免疫活化的标志,与许多病原体感染有关[5,6]。有研究发现,在HIV感染中,CD8+CD38+和CD8+HLA-DR+反映的免疫活化水平与HIV疾病的进展密切相关,CD4+T细胞的缺失与免疫活化水平有直接关系,CD8+CD38+和CD8+ HLA-DR+百分比比病毒载量更能反映机体的免疫活化情况[14,15]。我们的研究发现,在HBV感染中,CD8+CD38+和CD8+ HLA-DR+百分比与HBV DNA和ALT呈正相关,这与Cao等的研究结果一致。我们的研究结果提示,CD8+T细胞的活化程度与HBV造成炎症反应程度密切相关,是引起肝脏炎症损伤的重要原因之一。因此,免疫活化指标,尤其是CD8+T细胞上CD38和HLA-DR分子的表达是评价HBV感染者病情的良好指标。

此外,我们的研究还发现,阿德福韦酯抗病毒治疗不仅可以抑制CHB患者体内HBV的复制,使病毒载量显著下降,而且使免疫活化水平显著下降,接近正常水平,但仍然偏高。这一结果表明,CD8+T细胞的免疫活化的直接原因可能是HBV的大量复制,CD8+T细胞免疫活化程度与HBV DNA拷贝数的正相关也证明了这一点。另外,在HIV-1感染中的研究发现,接受高效抗逆转录病毒治疗的艾滋病患者,即使HIV复制被完全抑制,病毒载量下降到检测不到的水平,CD8+CD38+和CD8+ HLA-DR+T细胞的比例仍然高于正常水平,这可能是因为虽然病毒复制水平被抑制到检测限以下,但仍然有少量的病毒持续存在,使T细胞的免疫活化维持在较高水平[16]。对接受阿德福韦酯治疗的CHB患者的随访研究发现,CD8+T细胞的免疫活化在治疗开始的12周内就开始下降,并随着治疗时间的延长发生迅速、持续地降低,并有许多患者恢复到正常水平[12]。这些研究进一步证明,病毒颗粒本身是导致CD8+T细胞免疫活化的直接原因。因此,及时的、持续的抗病毒治疗,最大限度地降低病毒载量,是减少HBV感染者CD8+T细胞免疫活化的重要治疗措施。

综上,我们的研究表明,HBV感染可以导致机体CD8+T细胞的免疫活化,并且这种免疫活化与HBV感染病情进展有关,并可能参与了CHB的发病过程。阿德福韦酯不仅可以抑制HBV的复制,降低病毒载量,还可以通过降低CD8+T细胞的免疫活化,进而改善CHB患者的免疫状况,减少炎症损伤和T细胞的消耗。进一步的研究需要对接受抗病毒治疗CHB患者进行更长时间的随访。

[参考文献]

[1] Baumert TF,Thimme R,von WF. Pathogenesis of hepatitis B virus infection[J]. World J Gastroenterol,2007,13(1):82-90.

[2] Maini MK,Boni C,Ogg GS,et al. Direct ex vivo analysis of hepatitis B virus-specific CD8(+) T cells associated with the control of infection[J]. Gastroenterology,1999, 117(6):1386-1396.

[3] Bertoletti A,Gehring AJ. The immune response during hepatitis B virus infection[J]. J Gen Virol,2006,87(Pt 6):1439-1449.

[4] Maini MK,Boni C,Lee CK,et al. The role of virus-specific CD8(+) cells in liver damage and viral control during persistent hepatitis B virus infection[J]. J Exp Med,2000,191(8):1269-1280.

[5] Savarino A,Bottarel F,Malavasi F,et al. Role of CD38 in HIV-1 infection:An epiphenomenon of T-cell activation or an active player in virus/host interactions[J]. AIDS,2000, 14(9):1079-1089.

[6] Zidovec LS,Vince A,Dakovic RO,et al. Increased numbers of CD38 molecules on bright CD8+ T lymphocytes in infectious mononucleosis caused by Epstein-Barr virus infection[J]. Clin Exp Immunol,2003,133(3):384-390.

[7] Gascon RL,Narvaez AB,Zhang R,et al. Increased HLA-DR expression on peripheral blood monocytes in subsets of subjects with primary HIV infection is associated with elevated CD4 T-cell apoptosis and CD4 T-cell depletion[J].J Acquir Immune Defic Syndr, 2002,30(2):146-153.

[8] Tsai SL,Chen PJ,Lai MY,et al. Acute exacerbations of chronic type B hepatitis are accompanied by increased T cell responses to hepatitis B core and e antigens. Implications for hepatitis B e antigen seroconversion[J]. J Clin Invest,1992,89(1):87-96.

[9] Rehermann B,Lau D,Hoofnagle JH,et al. Cytotoxic T lymphocyte responsiveness after resolution of chronic hepatitis B virus infection[J]. J Clin Invest,1996,97(7):1655-1665.

[10] Bofill M,Borthwick NJ. CD38 in health and disease[J]. Chem Immunol,2000,(75):218-234.

[11] Tilling R,Kinloch S,Goh LE,et al. Parallel decline of CD8+/CD38++ T cells and viraemia in response to quadruple highly active antiretroviral therapy in primary HIV infection[J]. AIDS,2002,16(4):589-596.

[12] Cao W,Qiu ZF,Li TS. Parallel decline of CD8+CD38+ lymphocytes and viremia in treated hepatitis B patients[J].World J Gastroenterol,2011,17(17):2191-2198.

[13] 贾继东. 2010年《慢性乙型肝炎防治指南》更新要点[J].胃肠病学,2011,16(6):321-322.

[14] Sousa AE,Carneiro J,Meier-Schellersheim M,et al. CD4 T cell depletion is linked directly to immune activation in the pathogenesis of HIV-1 and HIV-2 but only indirectly to the viral load[J]. J Immunol,2002,169(6):3400-3406.

[15] Resino S,Seoane E,Gutierrez MD,et al. CD4(+) T-cell immunodeficiency is more dependent on immune activation than viral load in HIV-infected children on highly active antiretroviral therapy[J]. J Acquir Immune Defic Syndr,2006,42(3):269-276.

[16] Rosso R,Fenoglio D,Terranova MP,et al. Relevance of CD38 expression on CD8 T cells to evaluate antiretroviral therapy response in HIV-1-infected youths[J]. Scand J Immunol, 2010,71(1):45-51.

(收稿日期:2014-05-28)

[5] Savarino A,Bottarel F,Malavasi F,et al. Role of CD38 in HIV-1 infection:An epiphenomenon of T-cell activation or an active player in virus/host interactions[J]. AIDS,2000, 14(9):1079-1089.

[6] Zidovec LS,Vince A,Dakovic RO,et al. Increased numbers of CD38 molecules on bright CD8+ T lymphocytes in infectious mononucleosis caused by Epstein-Barr virus infection[J]. Clin Exp Immunol,2003,133(3):384-390.

[7] Gascon RL,Narvaez AB,Zhang R,et al. Increased HLA-DR expression on peripheral blood monocytes in subsets of subjects with primary HIV infection is associated with elevated CD4 T-cell apoptosis and CD4 T-cell depletion[J].J Acquir Immune Defic Syndr, 2002,30(2):146-153.

[8] Tsai SL,Chen PJ,Lai MY,et al. Acute exacerbations of chronic type B hepatitis are accompanied by increased T cell responses to hepatitis B core and e antigens. Implications for hepatitis B e antigen seroconversion[J]. J Clin Invest,1992,89(1):87-96.

[9] Rehermann B,Lau D,Hoofnagle JH,et al. Cytotoxic T lymphocyte responsiveness after resolution of chronic hepatitis B virus infection[J]. J Clin Invest,1996,97(7):1655-1665.

[10] Bofill M,Borthwick NJ. CD38 in health and disease[J]. Chem Immunol,2000,(75):218-234.

[11] Tilling R,Kinloch S,Goh LE,et al. Parallel decline of CD8+/CD38++ T cells and viraemia in response to quadruple highly active antiretroviral therapy in primary HIV infection[J]. AIDS,2002,16(4):589-596.

[12] Cao W,Qiu ZF,Li TS. Parallel decline of CD8+CD38+ lymphocytes and viremia in treated hepatitis B patients[J].World J Gastroenterol,2011,17(17):2191-2198.

[13] 贾继东. 2010年《慢性乙型肝炎防治指南》更新要点[J].胃肠病学,2011,16(6):321-322.

[14] Sousa AE,Carneiro J,Meier-Schellersheim M,et al. CD4 T cell depletion is linked directly to immune activation in the pathogenesis of HIV-1 and HIV-2 but only indirectly to the viral load[J]. J Immunol,2002,169(6):3400-3406.

[15] Resino S,Seoane E,Gutierrez MD,et al. CD4(+) T-cell immunodeficiency is more dependent on immune activation than viral load in HIV-infected children on highly active antiretroviral therapy[J]. J Acquir Immune Defic Syndr,2006,42(3):269-276.

[16] Rosso R,Fenoglio D,Terranova MP,et al. Relevance of CD38 expression on CD8 T cells to evaluate antiretroviral therapy response in HIV-1-infected youths[J]. Scand J Immunol, 2010,71(1):45-51.

(收稿日期:2014-05-28)

[5] Savarino A,Bottarel F,Malavasi F,et al. Role of CD38 in HIV-1 infection:An epiphenomenon of T-cell activation or an active player in virus/host interactions[J]. AIDS,2000, 14(9):1079-1089.

[6] Zidovec LS,Vince A,Dakovic RO,et al. Increased numbers of CD38 molecules on bright CD8+ T lymphocytes in infectious mononucleosis caused by Epstein-Barr virus infection[J]. Clin Exp Immunol,2003,133(3):384-390.

[7] Gascon RL,Narvaez AB,Zhang R,et al. Increased HLA-DR expression on peripheral blood monocytes in subsets of subjects with primary HIV infection is associated with elevated CD4 T-cell apoptosis and CD4 T-cell depletion[J].J Acquir Immune Defic Syndr, 2002,30(2):146-153.

[8] Tsai SL,Chen PJ,Lai MY,et al. Acute exacerbations of chronic type B hepatitis are accompanied by increased T cell responses to hepatitis B core and e antigens. Implications for hepatitis B e antigen seroconversion[J]. J Clin Invest,1992,89(1):87-96.

[9] Rehermann B,Lau D,Hoofnagle JH,et al. Cytotoxic T lymphocyte responsiveness after resolution of chronic hepatitis B virus infection[J]. J Clin Invest,1996,97(7):1655-1665.

[10] Bofill M,Borthwick NJ. CD38 in health and disease[J]. Chem Immunol,2000,(75):218-234.

[11] Tilling R,Kinloch S,Goh LE,et al. Parallel decline of CD8+/CD38++ T cells and viraemia in response to quadruple highly active antiretroviral therapy in primary HIV infection[J]. AIDS,2002,16(4):589-596.

[12] Cao W,Qiu ZF,Li TS. Parallel decline of CD8+CD38+ lymphocytes and viremia in treated hepatitis B patients[J].World J Gastroenterol,2011,17(17):2191-2198.

[13] 贾继东. 2010年《慢性乙型肝炎防治指南》更新要点[J].胃肠病学,2011,16(6):321-322.

[14] Sousa AE,Carneiro J,Meier-Schellersheim M,et al. CD4 T cell depletion is linked directly to immune activation in the pathogenesis of HIV-1 and HIV-2 but only indirectly to the viral load[J]. J Immunol,2002,169(6):3400-3406.

[15] Resino S,Seoane E,Gutierrez MD,et al. CD4(+) T-cell immunodeficiency is more dependent on immune activation than viral load in HIV-infected children on highly active antiretroviral therapy[J]. J Acquir Immune Defic Syndr,2006,42(3):269-276.

[16] Rosso R,Fenoglio D,Terranova MP,et al. Relevance of CD38 expression on CD8 T cells to evaluate antiretroviral therapy response in HIV-1-infected youths[J]. Scand J Immunol, 2010,71(1):45-51.

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