不同程度阿尔茨海默病患者血清可溶性Fas及其配体水平的变化

陈同伟

(嘉善县中医医院检验科，浙江嘉善314100)

随着全球人口老龄化日益加剧，老年期认知障碍的发病率也逐渐增加，其中阿尔茨海默病(Alzheimer disease，AD)的发病率最高，已成为当今社会面临的难题之一。AD是一种以进行性认知障碍和记忆能力损害为主的中枢神经系统退行性疾病。有研究表明[1]在多种神经系统疾病中存在细胞凋亡的异常，而 Fas/Fas配体(sFas ligand，FasL)系统在介导细胞凋亡过程中起到重要的信号传递作用。研究表明Fas介导的细胞凋亡参与了AD的病理生理过程[2]。为此，本研究通过检测不同程度的AD患者的血清可溶性Fas(soluble Fas，sFas)及其配体(sFasL)水平，探讨其与AD发生的关系。

材料和方法

一、研究对象

选取2012年10月至2013年12月在嘉善县中医医院住院的AD患者100例，男55例，女45例，年龄56～83岁，均符合美国精神障碍诊断与统计手册(第4版)制定的AD诊断标准。根据临床痴呆评定量表(clinical dementia rating，CDR)评分将AD患者分为轻度痴呆组(30例，男16例，女14例，年龄54～80岁)、中度痴呆组(45例，男24例，女21例，年龄57～84岁)和重度痴呆组(25例，男15例，女10例，年龄62～86岁)。另选取同期嘉善县中医医院体检者100例，根据临床体检结果有无异常分为老年疾病对照组和正常对照组。老年疾病对照组共54例，男28例，女26例，年龄60～87岁，包括17例糖尿病患者、18例高血压患者、15例高血脂患者及4例其它内分泌疾病患者。正常对照组共46名，男20名，女16名，年龄57～85岁，均无心脑血管疾病、无高血压、无智能障碍、无神经精神科疾病史、内分泌疾病史及痴呆家族史，近期无感染性疾病。各组之间年龄及性别构成差异无统计学意义(P＞0.05)，见表1。所有研究对象均签署知情同意书。

表1 AD组和对照组一般资料比较

二、纳入及排除标准

1.纳入标准 (1)根据神经心理量表检测证实有痴呆，简易智能精神状态量表(mini-mental state examination，MMSE)评分 ＜17(文盲)、20(小学)、24(中学及以上)测评确定;Hachinski缺血指数量表(Hachinski ischemic scale，HIS)＜4分，不以抑郁为起病形式;(2)至少有两项认知功能的受损:记忆力、计算力或定向力等;(3)记忆或其他认知功能进行性损害;(4)无意识障碍;(5)发病年龄在50～90岁;(6)进行性记忆力和其他认知功能障碍，不能用系统性疾病或其它脑部疾病来解释;(7)病程半年以上。

2.排除标准 (1)突然地卒中样起病;(2)早期出现局灶性神经系统特征，如偏瘫、感觉丧生、视野缺损、共济失调;(3)早期或起病时出现癫痫发作或步态障碍;(4)近期有感染性疾病发生;(5)近期服用激素类药物;(6)颅内肿瘤、占位性病变等疾病。

三、方法

1.测试工具 (1)以MMSE为痴呆筛查工具，筛选对照组;(2)以HIS评定痴呆类型，4分以下多为AD;(3)以CDR评定痴呆程度。以上评定均由2名具有高级职称的临床医生进行。

2.标本的采集和测定 血样本采集均经当事人或家属同意，患者于入院后次日早晨8点前抽取空腹静脉血4 mL，室温静置凝集1 h后，以900×g离心10 min，取血清分装于EP管中，置－70℃保存待检。体检者同样按上述要求留取血样保存待检。采用酶联免疫吸附试验(enzymelinked immunosorbent assay，ELISA)检测血清 sFas和sFasL水平，试剂盒购自美国R＆D公司，严格按照操作说明书进行。测定标本在450 nm波长下的吸光度(A)值，根据标准曲线的直线回归方程计算出sFas和sFasL水平。

四、统计学方法

采用SPSS 13.0软件进行统计分析。数据均呈正态分布，采用±s表示，组间比较采用独立样本t检验，多组比较采用单因素方差分析，相关分析采用Pearson相关。以P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

一、AD组、老年疾病对照组及正常对照组血清sFas、sFasL水平比较

AD组血清sFas、sFasL水平明显高于老年疾病对照组和正常对照组(P＜0.01)。AD组轻度痴呆、中度痴呆及重度痴呆血清sFas、sFasL水平明显高于正常对照组(P＜0.01)，且随着痴呆程度的加重，血清sFas和sFasL水平也逐渐增高。见表2。

二、AD患者血清 sFas和 sFasL与病程、年龄、MMSE评分及HIS评分的相关性分析

血清sFas与年龄、病程、MMSE评分呈正相关(r值分别为 0.856、0.834、0.799，P ＜0.01)，与 HIS评分呈负相关(r= －0.714，P ＜0.01);血清sFasL与年龄、病程呈正相关(r值分别为0.863、0.857，P ＜0.01)，与 MMSE、HIS 评分呈负相关(r值分别为 －0.801、－0.745，P ＜0.01)。

表2 AD组、老年疾病对照组及正常对照组血清sFas、sFasL水平比较 (±s，μg/L)

表2 AD组、老年疾病对照组及正常对照组血清sFas、sFasL水平比较 (±s，μg/L)

注:与正常对照组比较，*P＜0.01;与老年疾病对照组比较，#P ＜0.01

组别 例数sFas sFasL AD 组 100 52.4 ±16.7*#118.2 ±34.1*#轻度痴呆组 30 34.3 ±5.7*# 89.3 ±11.7*#中度痴呆组 45 50.4 ±8.5*# 107.4 ±22.1*#重度痴呆组 25 64.5 ±12.4*#123.5 ±29.5*#老年疾病对照组 54 20.3 ±8.3* 75.5 ±25.6*正常对照组46 12.4 ±5.5 51.8 ±22.7

讨 论

细胞凋亡是机体在生长、发育过程中受到外来刺激时，为保持机体内环境的一种自我调节方式，而Fas/FasL途径是细胞凋亡中最主要的途径之一。Fas属肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)家族，主要在激活的B细胞、巨噬细胞、NK细胞上表达，FasL主要在激活的T细胞上表达，两者结合可致表达Fas的细胞凋亡[2]。研究认为Fas抗原介导凋亡的机制是通过与之相应的配体(FasL)或单克隆抗体结合后发出凋亡信号，并传递至细胞内，调节基因转录，从而诱导细胞凋亡。细胞过度凋亡会引起神经退行疾病，如AD。AD是常见的中枢神经系统退行性病变。研究表明Fas介导的细胞凋亡参与了AD的疾病发展过程[3-4]。本研究结果显示 AD患者血清 sFas和sFasL水平明显高于正常对照组和老年疾病对照组，与文献报道[5]相符;且随着痴呆程度的提高，血清sFas和sFasL呈逐渐升高趋势。由此提示sFas和sFasL可能参与了AD疾病中的神经细胞凋亡的过程，与AD的发生、发展有密切关系。因此血清sFas和sFasL对于痴呆的严重程度有一定的预示作用，临床上可考虑将血清sFas和sFasL水平作为痴呆病情发展的监测指标之一。

智能水平和脑缺血指数是评定老年人大脑神经细胞功能的量化指标。本研究结果显示AD患者sFas与年龄、病程及MMSE评分呈正相关(r值分别为0.856、0.834、0.799，P ＜0.01)，而与 HIS评分呈负相关(r= －0.714，P ＜0.01)，这与国外研究结果(随着年龄增长，sFas的表达明显增高)[6]相一致。血清sFasL与年龄、病程呈正相关(r值分别为0.863、0.857，P ＜0.01)，而与 MMSE和HIS评分呈负相关(r值分别为 －0.801、－0.745，P ＜0.01)。原因可能是 sFas形成寡聚体与sFasL结合，反过来加剧sFasL阳性细胞的死亡，从而加速患者的痴呆进程，这与PROUSSAKOVA等[7]的报道一致。提示血清sFas和sFasL浓度与患者的智能水平和脑缺血程度存在某些关联。但因本研究的病例数较少，该结论还需要大样本、长期的研究才能进一步证实。

总之，AD患者存在血清sFas和sFasL水平异常，且其水平的高低与患者的痴呆程度有关，可能是AD患者病情进一步发展的原因之一。

[1]许静，蒲传强.Fas/FasL在神经系统疾病作用的研究进展[J].国际神经病学神经外科学杂志，2013，40(3):297-298.

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[7]PROUSSAKOVA OV，RABAYA NA，MOSHNIKOVA AB，et al.Oligomerization of soluble Fas antigen indues its cytotoxicity [J].J Biol Chem，2003，278(38):36236-36241.