硫氰酸红霉素溶剂残留分析方法的探索

李 萍，张黎明

（天津科技大学生物工程学院，天津 300457）

近年来，红霉素衍生物的开发和应用研究较为活跃[1,2]，其中衍生物之一硫氰酸红霉素，已被我国归类到了兽用药品中。硫氰酸红霉素为红霉素硫氰酸盐，为最新一代动物专用大环内酯类抗生素，主要用于革兰氏阳性菌和支原体感染，更多用于合成红霉素、罗红霉素、阿奇霉素、克拉霉素等大环内酯类抗生素[3]。《中国兽药典》（2010 年版）对有机溶剂残留做了限度规定[4]。但是关于对硫氰酸红霉素溶剂残留分析方法的研究，国内未见报道。本次研究旨在探讨一种适用于硫氰酸红霉素溶剂残留中丙酮的测定方法，对进一步提高产品质量控制具有重要的理论和实践指导作用。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

安捷伦7820A 型气相色谱仪，丙酮、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）为色谱纯，硫氰酸红霉素样品（样品1、2、3）。

1.2 分析方法的色谱条件

色谱柱：PEG-20M Agilent 毛细管柱（1.0 μm，0.53 mm×30 m），载气：氮气，检测器：氢火焰离子检测器；汽化室温度：200 ℃，色谱柱温度：80 ℃，检测器温度：250 ℃，柱流量：1.0 mL/min，顶空进样。

1.3 试验溶液的制备

1.3.1 对照品溶液 取丙酮约5 000 μg ，置100 mL容量瓶中，加DMF 溶解并定容稀释至刻度，摇匀，转入顶空瓶中作为对照品溶液。

1.3.2 空白溶液 DMF。

1.3.3 供试品溶液 精密称取硫氰酸红霉素样品1 批约0.05 g，置100 mL 容量瓶中，用DMF 溶解并稀释定容至刻度，混匀，转入顶空瓶中作为供试品溶液。

1.3.4 准确度实验溶液的制备 精密称取硫氰酸红霉素样品1 批约0.05 g，共计9 份。分别置于100 mL 容量瓶中，分别加入含丙酮50 μg、100 μg、150 μg 的水溶液，加入DMF 溶解并定容稀释至刻度，摇匀，制备成溶液浓度为50 %、100 %、150 %的溶液各3 份。

1.3.5 线性实验溶液的制备 取丙酮约6 000 μg，置100 mL 容量瓶中，加DMF 溶解并定容稀释至刻度。分别吸取4.0 mL、5.0 mL、6.0 mL、7.0 mL、8.0 mL、9.0 mL、10.0 mL 于10 mL 容量瓶中，加DMF 溶解并定容稀释至刻度。转入顶空瓶中作为线性溶液，配制浓度分别是24.0 μg/mL、30.0 μg/mL、36.0 μg/mL、42.0 μg/mL、48.0 μg/mL、54.0 μg/mL、60.0 μg/mL，相当于检测样品含量的48 %、60 %、72 %、84 %、96 %、108 %、120 %。1.3.6 检测限、定量限溶液的制备 吸取1.3.1 项下溶液1 mL 至10 mL 容量瓶中，用DMF 溶解并稀释定容至刻度，混匀，作为溶液1#，即稀释为10-1，依次稀释至10-n，（依次编号为2#、3#、4#…n）转入顶空瓶中备用。

1.4 评价标准

系统适用性参数结果及其它实验结果数据的评价参考《中国兽药典》[4]的要求。

2 方法与结果

2.1 系统适用性试验

取对照品溶液顶空平衡30 min 后，注入气相色谱仪，记录色谱图至丙酮峰保留时间的3 倍。重复进样5次。所得图谱中丙酮峰面积RSD 为1.0 %，理论塔板数（N）为86 416，拖尾因子（T）为1.0，分离度（R）为1.6。

2.2 专属性实验

取对照品溶液、空白溶液、供试品溶液顶空平衡30 min 后，注入气相色谱仪，记录色谱图至丙酮峰保留时间的3 倍。空白溶液对对照品溶液和供试品溶液无干扰，主成分与相邻物质能完全分离，分离度为1.6。

2.3 精密度实验

取供试品溶液6 份，并依次编号。取上述6 份溶液顶空平衡30 min 后，注入气相色谱仪，记录色谱图至丙酮峰保留时间的3 倍，重复进样6 次，其丙酮含量的RSD 为2.3 %。

2.4 准确度实验

取准确度实验溶液顶空平衡30 min 后，注入气相色谱仪，记录色谱图至丙酮峰保留时间的3 倍，测定丙酮的色谱峰面积。丙酮的平均回收率为99.7 %，RSD为1.2 %。

2.5 线性关系实验

取线性实验溶液顶空平衡30 min 后，注入气相色谱仪，记录色谱图至丙酮峰保留时间的3 倍。以峰面积Y 对浓度X（μg/mL）进行线性回归，得到线性方程Y=0.1065X+1.7536，R2=0.999 0（见图1）。

图1 线性实验回归曲线

2.6 检测限、定量限实验

将空白溶液和检测限、定量限检测溶液顶空平衡30 min 后，注入气相色谱仪，记录色谱图至丙酮峰保留时间的3 倍。计算对照品溶液中主峰信号响应值与空白响应值的比值。信噪比为3：1 时的对照品溶液浓度即为检测限，信噪比为10：1时的对照品溶液浓度即为定量限。结果最低检测限为4.0 μg/L，最低定量限为8.0 μg/L。

2.7 样品检测

称取硫氰酸红霉素样品0.05 g，加入DMF 溶解并定容稀释至刻度，摇匀。取上述溶液顶空平衡30 min后，注入气相色谱仪，记录色谱图至丙酮峰保留时间的3 倍，测定丙酮的色谱峰面积。另取丙酮对照品0.25 g，加入DMF 溶解并定容稀释至刻度，摇匀。稀释后加DMF 溶解并定容稀释至刻度，摇匀，同法测定。按外标法以峰面积计算（见表1）。

表1 样品丙酮残留测定结果

3 讨论

药物中的溶剂残留[4]系指在原料药或辅料的生产中，以及在制备过程中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂。残留溶剂不但没有疗效，而且具有毒性和致癌作用，已逐渐引起国际医药界和管理部门的重视。本研究建立的气相色谱法首次全面、准确的对其中最主要的丙酮残留溶剂分析方法进行了报道。

该法操作简便、快速，最低检测限和定量限较低，分别为4.0 μg/mL 和8.0 μg/mL，可以满足兽药溶剂残留检测的要求；测定结果的重复性好，样品测定RSD＜10.0 %的要求；同时样品加标回收率在90.0 %～110.0 %范围之内，具有较高的准确度；专属性强，分离度符合＞1.5 的要求；线性结果表明丙酮浓度在24～60 μg/mL的线性范围内，其线性关系良好；对其不同批号样品的残留进行测定，结果均小于0.50 %的限度，从而证明了该分析方法适合于对硫氰酸红霉素的残留检测。

［1］ 陈悦.反相HPLC 分析硫氰酸红霉素的相关物质及主组分含量［J］.中国药学杂志，2007，42（23）：1822-1826.

［2］ 魏琦，李欣.反相高效液相色谱法测定硫氰酸红霉素组分［J］.基层医学论坛，2009，（28）：920-921.

［3］ 徐铮奎.硫氰酸红霉素如日中天［N］.医药经济报，2008.

［4］ Ch.P（2010）Vol Ⅱ（中国兽药典2010 年版，二部）［S］.2010：81-86.