布鲁菌BLS分子增强抗原分子Omp31免疫刺激能力的研究

单生苗 王建英 杜志强

（内蒙古科技大学 数理与生物工程学院，内蒙古 包头014010）

布鲁菌是造成布病的直接病原，可以使得人畜之间共患疾病，称为布病；针对这种二类传染病，目前为止仍然没有有效的疫苗。本文以猪型布鲁菌的omp31基因与bls基因作为研究对象，通过基因的融合表达、蛋白纯化、抗体制备与抗体质量检测等研究，试图揭示布鲁菌BLS分子增强蛋白质抗原分子免疫刺激能力的作用。

1 材料与方法

1.1 试验材料

rOmp31蛋白表达菌株、rOmp31-BLS融合蛋白表达菌株：试验前期构建，在实验室低温冰箱保存。

1.2 方法

1.2.1 重组蛋白的融合表达

将rOmp31蛋白表达菌株、rOmp31-BLS融合蛋白表达菌株过夜活化处理，之后利用新鲜LB液体培养基进行转培养，再用IPTG进行诱导表达，表达结果用SDS-PAGE检测[1]。

1.2.2 亲和纯化

诱导表达之后低速离心收集菌体，超声波破碎菌体之后，高速离心收集上清液，rOmp31蛋白利用GST亲和柱进行纯化，rOmp31-BLS融合蛋白利用His-tag镍柱进行亲和纯化[2]。

1.2.3 抗体制备

将纯化后的rOmp31蛋白和rOmp31-BLS融合蛋白分别作为抗原免疫家兔，制备抗血清[3]。

1.2.4 抗体质量检测利用western blot检测两种抗体的质量[4]。

2 结果与分析

2.1 重组rOmp31蛋白的诱导表达与纯化结果

图1的SDS-PAGE检测结果显示：rOmp31蛋白被正确表达，图示的蛋白大小与理论值55.3 kD一致。

图1 布鲁菌重组rOmp31的诱导表达与纯化结果

2.2 rOmp31-BLS融合蛋白的诱导表达与纯化结果

图2的SDS-PAGE检测结果显示：rOmp31-BLS融合蛋白被大肠杆菌正确表达，理论预测融合分子的分子量为49.4 kD，图中条带位置与其一致。

图2 布鲁菌rOmp31-BLS融合蛋白的诱导表达与纯化结果

2.3 抗体质量检测结果

以等量的纯化后的rOmp31蛋白和rOmp31-BLS融合蛋白作为western blot的蛋白质样品，进行电泳处理，转膜后分别进行等量的对应抗体的识别，从图1右侧和图2右侧的western blot显色条带来看：相同的抗体和等量的蛋白质进行识别rOmp31-BLS融合蛋白产生了较粗的条带，说明rOmp31-BLS融合蛋白刺激家兔产生的抗体的滴度要比rOmp31蛋白对应的抗体的滴度要高。

3 讨论

目前，关于布鲁菌的蛋白亚单位疫苗研究的较为深入，主要集中在关于布鲁菌的外膜蛋白质的免疫原性研究方面。但是，Omp系列的外膜蛋白的免疫刺激能力有限，能够成为亚单位疫苗的候选分子的Omp分子很少。因此，本论文以布鲁菌的omp31抗原基因与bls基因作为研究对象，将omp31与bls基因进行融合表达，获得多克隆抗体之后研究BLS分子的增强抗原分子免疫刺激能力的作用。试验结果显示：重组Omp31蛋白与BLS分子融合表达之后，免疫家兔产生的抗体的滴度有所提高，进一步加强了Omp31蛋白的免疫刺激作用。

［1］Du ZQ，Li XC，Wang ZH，et al.A single WAPdomain(SWD)-containing protein with antipathogenic relevance in red swamp crayfish，Procambarus clarkia[J].Fish Shellfish Immunol，2010，28(1)：134-142.

［2］Ren Q，Zhou J，Jia YP，et al.Cloning and characterization of Rap GTPase from the Chinese white shrimp Fenneropenaeus chinensis[J].Dev Comp Immunol，2012，36(1)：247-252.

［3］Du ZQ，Ren Q，Zhao XF，et al.A double WAP domain (DWD)-containing protein with proteinase inhibitory activity in Chinese white shrimp，Fenneropenaeus chinensis[J].Comp Biochem Physiol B Biochem Mol Biol，2009，154(2)：203-210.

［4］Li XC，Du ZQ，Lan JF，et al.A novel pathogen-binding gC1qR homolog，FcgC1qR，in the Chinese white shrimp,Fenneropenaeus chinensis[J].Dev Comp Immunol，2012，36(1)：400-407.