病毒性脑炎的病原学检测与分析

李东瑞 丁雪冰 王雪晶 滕军放

郑州大学第一附属医院神经内科 郑州 450052

脑炎是感染性疾病中较严重的一种，病毒是急性脑炎中最常见的感染源。病毒性脑炎是指病毒直接侵犯脑实质而引起的原发性脑炎，临床表现主要为发热、头痛、意识障碍、癫痫、精神行为异常及神经系统定位体征。

1 流行病学

流行病学报告脑炎的发病率有很大的地理差异性，在正常情况下，年发病率3．5／100 000～7．5／100 000。虽然病毒性脑炎可影响各个年龄段，但在儿童期更加明显［1-4］。

2 病原学分类

许多患者被诊断为脑炎，却没有检测到特定的病原体。随着分子生物学技术，特别是聚合酶链反应（PCR）技术的应用及进步，特发性的病例相对比例可能会下降，但不到半数的患者能检测出病原体，可能与未知的免疫相关性脑炎有关［5］。在全球范围内及特殊地区发现的几十种病毒和细菌可能引起脑炎［1］。见表1。

3 病原学检测方法分析

不同类型VE的诊断技术类同，但目前普遍缺少病原学与基因组学的诊断方法。近年来病原学诊断方法的研究有很大进展。

3．1 病毒分离 目前被认为是病毒性脑炎诊断的金标准，特点是诊断特异性好，操作复杂，且成功率低，花费较高，临床上较难普及。

3．2 病毒特异性抗体检测 有数种病毒可在血清和脑脊液中通过酶免疫测定，如单纯疱疹病毒1 型与2 型（HSV-1／HSV2）、水痘病毒（VZV）、EB病毒、呼吸道合胞病毒（RSV）、人类免疫缺陷病毒（HIV）、腺病毒、流感病毒等［6］。蛋白质印记法（Western blot）用于识别脑脊液及血清中的特异性抗体，在病毒感染性疾病中被作为确诊实验，但由于其敏感性较ELISA 低，因此未成为首选诊断技术。

酶联免疫吸附试验（ELISA）检出率低，存在假阴性，并在许多检测中都有相关报道［7-8］，主要有以下几种原因：（1）试剂本事的质量问题；（2）操作过程中出现的问题；（3）钩状效应，即抗原-抗体需要在最适比浓度下进行，如有大量抗体存在同时其浓度大大超过抗原，可导致阴性结果。但随着ELISA 方法的改良及进步，其敏感性逐渐升高，可用于大规模血清学监测。

表1 病原学

3．3 病毒抗原检测 虽然在血清中HSV、VZV、RSV、流感病毒A、B以及腺病毒可通过传统的免疫荧光法对其咽拭子标本进行抗原检测，但由于脑脊液中抗原含量较低，检出率较低，不能用于脑脊液病毒抗原检测。

新型ELISA 方法基于双抗体夹心模式，同样可应用病毒抗原检测。2001年BODE等曾用该方法检测博尔纳病病毒（Borna disease virus，BDV）的磷蛋白（p24）和核蛋白（p40）构象。该方法兼顾有较高的特异性及敏感性，同时有EILSA法的稳定性好、操作方便等优点。

3．4 联合检测 Bode等［9］研究也同时提出了BDV-CIC、有利抗体和血浆抗原检测相同样本的差异性，该方法检测感染阳性率比单纯血清学检测敏感10倍以上，但仍需进一步研究是否用于大规模检测。

3．5 应用聚合酶链式反应（PCR） CSF-PCR 是将CSF 中微量的病毒基因迅速扩增百万倍，常规RT-PCR分反转录和扩增两步骤，该方法是在同一体系下，同时进行反转录及PCR，可在短时间内完成，是早期快速诊断的常用方法。但由于PCR 技术敏感性较高，因此，在实验操作中必须采取严格无菌措施防止污染，以提高诊断的特异性。

随着PCR 技术的进步和扩展，目前已从最初的RT-PCR发展到与各项技术集合起来的新技术，如实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR）、多重RT-PCR等。

实时荧光定量PCR 起源于1999年Scorpions引物的发现，后经改进诞生的二聚体Scorpion［10］、特异引物、PCR 终止物和荧光基团组成的一条寡核苷酸，淬灭剂结合在与探针完全互补的另一条寡核苷酸的3＇末端。荧光实时PCR 定量具有范围宽、敏感性高、精度高、无PCR 后处理步骤，避免了交叉污染，同时可进行多重检测等优点。

病毒性脑炎是中枢神经系统常见的感染性疾病，严重的颅内病毒感染可能会导致死亡，患者往往遗留永久性的神经后遗症［11-14］。目前，支持对症治疗超过抗病毒治疗［15-16］。因此，病毒性脑炎的病原学检测尤为重要。通过对样本的抗原、抗体及免疫复合物检测以及分子生物学技术应用，为病毒性脑炎的诊断提供病原学依据，帮助诊断和治疗病毒性脑炎患者。

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