复方花生肽口服液对化学性肝损伤的保护作用

成 静，袁宏丽，莫朝晖，陈栋梁

(1.武汉天天好生物制品有限公司，湖北武汉430090;2.湖北省肽类物质工程技术研究中心，湖北武汉430090)

花生肽是花生蛋白经降解所得，具有良好的吸收性、溶解性、流动性以及低致敏性。近年来，大量国内外研究显示花生肽具有抗氧化、抗菌、ACE抑制、抗疲劳等［1-5］生理功能。然而在护肝方面的活性报道较少，我国学者陈贵堂［6］以及彭维兵［7］等研究显示花生肽对半乳糖以及CCl4所致急性肝损伤具有明显的保护作用。

蒲公英是我国常见的野生蔬菜和中草药，具有清热解毒、消肿散结、利尿通淋的功能。国内外学者研究显示蒲公英具有抗菌、抗胃损伤、保肝胆、抗肿瘤、抗氧化、降血糖、降血脂、增强机体免疫力等功能［8］。Domitrovi.R 等［9］对蒲公英研究显示蒲公英根水提物可显著减少四氢化碳肝纤维化，增强肝脏再生能力。任丽平［10］等研究显示蒲公英能显著降低乙醇引起急性肝损伤小鼠血清ALT和AST水平。

本文以花生肽和蒲公英提取物配制复方口服液并对其急性毒理及护肝功能进行研究，探索花生肽与蒲公英提取物复配口服液的安全性及护肝效果。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

复方花生肽口服液 武汉天天好生物制品有限公司提供，其主要原料为花生肽和蒲公英提取物。口服液蛋白质含量17.92%、多肽含量13.45%、类黄酮含量0.038%;ALT、AST、LDH、MDA、SOD、GSH-PX检测试剂盒 南京建成生物工程研究所;实验室常规试剂;CCl4分析纯。

AR2140电子天平 奥豪斯公司;TGL-16G离心机 上海安亭科学仪器厂;FAITH-1000全自动生化分析仪 南京劳拉电子有限公司;手术器材。

华中科技大学同济医学院动物中心提供KM系小鼠(许可证号 SCXY2004-0007)，104只，雌雄各半，体重20±2g。

表1 小鼠体增重检测结果(±s)Table 1 The results of weight gain of mice(±s)

表1 小鼠体增重检测结果(±s)Table 1 The results of weight gain of mice(±s)

时间(d)正常对照组 模型组 低剂量组 中剂量组 高剂量组 蒲公英提取物组 花生肽组0 20.78±1.98 21.25±2.23 21.16±0.89 21±1.14 20.76±1.32 21.06±1.78 20.89±1.12 6 28.06±2.24 25.96±1.94 26.56±1.41 27.94±1.76 27.61±1.47 28.43±3.43 27.84±2.23 12 29.04±3.46 27.02±2.69 27.96±2.67 28.26±3.43 29.64±2.32 30.02±2.04 28.41±2.79 18 31.39±1.74 28.89±3.33 29.04±5.64 31.54±4.27 31.78±2.79 29.94±1.98 30.46±3.44 24 33.18±4.27 31.12±3.47 30.64±4.23 32.79±5.12 32.37±3.81 31.04±5.67 31.87±5.16 30 34.49±5.08 32.18±6.02 32.76±4.78 34.47±4.73 33.87±3.34 32.23±4.91 33.64±4.98

1.2 实验方法

1.2.1 急性毒理实验 按照《保健食品功能学评价程序与检验方法规范》，KM系小鼠20只，雌雄各半，实验室室温适应性喂养3d，采用最大剂量法进行实验，剂量为35.8mL/kg bw(干物质剂量为10.0g/kg bw)，24h内灌胃3次，连续观察14d。

1.2.2 护肝功能实验 小鼠随机分为7组，每组12只，雌雄各半。实验室室温适应性喂养3d，进入实验期。空白对照组、模型组每天灌胃给予生理盐水20mL/kg，低剂量组灌胃剂量为8.35mL/kg，中剂量组灌胃剂量为 16.7mL/kg，高剂量组灌胃剂量为50.1mL/kg，对照组以中剂量组灌胃计量为依据灌胃纯花生肽或纯蒲公英提取物，花生肽对照组灌胃计量为3.33g/kg，蒲公英提取物对照组灌胃计量为0.167g/kg;连续灌胃30d，于末次给药禁食16h后模型组及各剂量组一次性灌胃给予1%CCl480mg/kg bw，空白对照组灌胃食用大豆油。

1.2.3 检测方法

1.2.3.1 血清中ALT、AST、LDH活力检测 禁食24h后，眼眶静脉取血，3000r/min离心15min分离血清，24h内全自动生化分析仪检测血清中ALT、AST、LDH活力。

1.2.3.2 肝脏组织中MDA、SOD及GSH-PX活力检测 小鼠断颈处死，取肝脏称重，加入生理盐水匀浆，离心取上清。MDA活力采用TBA法测定，按测定试剂盒操作规程进行。SOD活力采用比色法测定，按测定试剂盒操作规程进行。GSH-PX活力采用比色法测定，按测定试剂盒操作规程进行。

1.3 数据处理

2 结果与分析

2.1 急性毒理实验

实验期间，实验动物未见明显中毒症状和死亡，依据急性毒性分级评价标准规定，本复方花生肽口服液属于实际无毒物质。

2.2 护肝功能实验

实验期间，空白对照组、对照组、模型组以及各剂量组体重增重基本相同，组间无显著差异(p＞0.05)。模型组 ALT、AST、LDH、MDA 含量都明显高于空白对照组，且差异呈现极显著性(p＜0.01);SOD及GSH-PX活性明显低于空白对照组，且差异呈现极显著性(p＜0.01)。表明急性肝损伤模型造模成功。

低剂量组ALT、LDH、MDA含量显著低于模型组(p＜0.05)，SOD及GSH-PX活性显著高于模型组(p＜0.05);中剂量组ALT、AST、LDH显著低于模型组(p＜0.05)，MDA含量极显著低于模型组(p＜0.01)，SOD及GSH-PX活性显著高于模型组(p＜0.05);高剂量组 ALT、AST、LDH、MDA 含量极显著低于模型组(p＜0.01)，SOD及GSH-PX活性显著高于模型组(p＜0.05);蒲公英提取物组各项指标与模型组比较无显著性差异，与中剂量组比较显示ALT、AST、LDH含量显著高于中剂量组(p＜0.05)，MDA含量极显著高于中剂量组(p＜0.01)，SOD及GSHPX活性显著低于中剂量组(p＜0.05);花生肽组ALT、LDH、MDA含量显著低于模型组(p＜0.05)，SOD及GSH-PX活性显著高于模型组(p＜0.05);与中剂量组比较显示ALT、AST、LDH、MDA含量均显著高于中剂量组组(p＜0.05)，SOD及GSH-PX活性显著低于中剂量组(p＜0.05)。

复方花生肽口服液中、高2个剂量组均能抑制CCl4致小鼠急性肝损伤血清中ALT、AST、LDH升高，降低肝脏中MDA含量，提高肝脏中SOD及GSH-PX活性，对CCl4所致肝损伤有一定辅助保护作用。蒲公英提取物在此灌胃剂量条件下辅助保护肝脏损伤作用有限，花生肽组能有效降低急性肝损伤小鼠血清中ALT、AST、LDH含量，降低肝脏中MDA含量，提高肝组织中SOD及GSH-PX活性，对肝损伤有一定的保护作用，但与中剂量组相比具有显著性差异(p＜0.05)。口服液中剂量组对CCl4所致肝损伤的辅助保护作用优于同剂量的单纯蒲公英提取物及花生肽。

3 结论

CCl4经肝微粒体色素P450激活后生成CCl3，CCl3可攻击肝细胞膜上磷脂分子，引起脂质过氧化，或与肝微粒体脂质和蛋白质发生共价结合，损伤肝细胞膜结构和功能的完整性，使胞浆内可溶性酶如转氨酶(AST、ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)渗入血液中，导致相关酶活性降低，能量产生减少，影响细胞呼吸，造成细胞气球样变和坏死［11］。

表2 小鼠血清及肝脏组织生化指标测定结果(±s)Table 2 The biochemical results of serum and liver tissue of mice(±s)

表2 小鼠血清及肝脏组织生化指标测定结果(±s)Table 2 The biochemical results of serum and liver tissue of mice(±s)

注:Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01与空白组比较;*p＜0.05，＊＊p＜0.01与模型组比较;▲p＜0.05，▲▲p＜0.01与中剂量组比较。

检测项目 空白对照组 模型组 低剂量组 中剂量组ALT(U/L) 6.08±1.18 367.36±27.35ΔΔ 191.37±19.97* 87.63±19.57*AST(U/L) 7.81±2.83 401.33±33.94ΔΔ 223.17±22.74 103.26±19.87*LDH(U/L) 7492.45±791.83 14974.62±1094.73ΔΔ 12914.65±733.48* 12163.59±783.64*MDA(mol/mg) 4.22±1.95 8.39±1.19ΔΔ 6.56±1.18* 6.11±0.19＊＊SOD(U/mg) 4.45±0.15 1.83±0.24ΔΔ 2.21±0.24* 2.35±0.29*GSH-PX(mol·L-1·mg-1) 88.57 ±7.11 69.78 ±5.97ΔΔ 79.53 ±6.35* 81.75 ±6.32*检测项目 高剂量组 蒲公英提取物组 花生肽组ALT(U/L) 47.13±8.57＊＊ 369.57±30.13▲ 174.59±16.32*▲AST(U/L) 71.29±11.78＊＊ 389.35±34.71▲ 190.63±18.64▲LDH(U/L) 10857±658.19＊＊ 14816±968.54▲ 12891±762.53* ▲MDA(mol/mg) 5.33±0.13＊＊ 8.27±1.63▲▲ 6.46±0.74* ▲SOD(U/mg) 2.43±0.19* 1.79±0.19▲ 2.26±0.18* ▲GSH-PX(mol·L-1·mg-1) 82.08 ±4.89* 70 ±6.07▲ 80.06 ±5.27*▲

实验结果显示，复方花生肽口服液中、高2个剂量组均能抑制CCl4致小鼠急性肝损伤模型血清中ALT、AST、LDH升高，降低肝脏中MDA含量，提高肝脏中SOD及GSH-PX活性，对CCl4所致肝损伤有一定辅助保护作用。且在剂量相同的条件下，复方花生肽口服液的辅助护肝功能优于单纯的花生肽及蒲公英提取物。提示复方花生肽口服液对于肝脏具有较好的保护作用。同时急性毒理实验结果显示，复方花生肽口服液属于实际无毒物质。

［1］陈贵堂，赵立艳，李博，等.花生肽对衰老模型大鼠血清和心、脑组织抗氧化效果的影响［J］.中国粮油学报，2002，27(1):43-46.

［2］赵海明.以花生蛋白为原料制备抗菌月桂酰基肽［D］.无锡:江南大学，2000.

［3］王瑛瑶，王璋，陈尚卫.花生肽ACE抑制活性肽的分离纯化与结构鉴定［J］.食品科学，2008，29(10):341-344.

［4］张宇昊，马良，王强.花生短肽降血压活性研究［J］.食品科学，2008，29(6):399-403.

［5］彭维兵，何秋霞，刘可春，等.花生肽对小鼠抗运动性疲劳的实验研究［J］.山东科学，2011，24(5):35-38.

［6］陈贵堂，赵立艳，赵霖，等.花生肽对半乳糖致大鼠肝损伤的抑制作用［J］.食品科学，2011，32(5):296-300.

［7］彭维兵，何秋霞，刘可春，等.花生肽对四氯化碳致小鼠肝损伤的保护作用［J］.中国食物与营养，2011，17(9):71-73.

［8］林云，江林，蒋健，等.蒲公英的药理作用研究进展［J］.中国现代中药，2011，13(8):42-47.

［9］Domitrovi R，Jabovace H，Romi Z，et al.Antifibrotic activity of Taraxacuin officinale root in carbon tetrachloride induced liver damage in mice［J］.J Ethnopharmacol，2010，130(3):569-577.

［10］任丽平，杜钢军，崔新萍.蒲公英对酒精性肝损伤的影响［J］.中国实验方剂学杂志，2011，17(11):178-181.

［11］黄钟锈，陈冠敏，黄佳宁，等.枸杞多糖对化学性肝损伤的保护作用［J］.预防医学情报杂志，2005，21(3):37-38.46.