氨基酮戊酸光动力疗法治疗尖锐湿疣对病灶乳头瘤病毒复制的影响

王辉 赵学良

氨基酮戊酸光动力疗法治疗尖锐湿疣对病灶乳头瘤病毒复制的影响

王辉 赵学良

目的检测氨基酮戊酸光动力方法(ALA-PDT)治疗前后,尖锐湿疣患者病灶局部人乳头瘤病毒(HPV)6/11型DNA载量的变化。方法选择电离子去除疣体后HPV6/11阳性患者分为两组,光动力组32例采用ALA-PDT治疗,对照组29例不治疗。3个月后用荧光定量PCR检测病灶局部HPV6/11型DNA载量。结果3个月后光动力组29例中有26例HPV DNA阴转(89.7%),对照组19例中有13例HPV DNA阴转(68.4%);光动力组HPV DNA载量为(1.70×105±7.86×105)拷贝/ml,对照组HPVDNA载量为(1.27×106± 2.21×106)拷贝/ml,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论ALA-PDT能降低尖锐湿疣患者病灶局部HPV病毒载量。

尖锐湿疣;光化学疗法;人乳头状瘤病毒

氨基酮戊酸光动力疗法(ALA-PDT)治疗尖锐湿疣,具有疗效好、安全性高、复发率低等优势,但其治疗的机制需进一步研究。90%的尖锐湿疣是由人乳头瘤病毒(HPV)HPV6/11亚型感染引起[1]。本研究通过ALA-PDT治疗尖锐湿疣前后检测尖锐湿疣患者病灶局部HPV6/11亚型DNA载量变化,观察ALA-PDT对HPV DNA复制的影响,探讨ALA-PDT治疗尖锐湿疣的机制。

一、对象与方法

1.对象:2011年6月至2013年9月来本院皮肤性病科门诊就诊患者,根据文献[2]确诊为尖锐湿疣,有典型的皮损,醋酸白试验阳性。排除标准:自身免疫性疾病、恶性肿瘤、严重内科疾病、肝肾功能异常、6个月内曾使用糖皮质激素、免疫抑制或免疫调节药物、感染及合并其他性传播疾病、妊娠或哺乳妇女、血液系统疾病。皮损部位:男性位于冠状沟、龟头、包皮内外板、系带、阴茎、阴囊、肛周等处;女性位于大小阴唇、处女膜残端、阴道口、肛周等处。疣体直径0.5～1.6 cm,数目2～16个。96例患者均在局麻下采用GX-Ⅲ型多功能电离子手术治疗机(购于广西科学院应用物理研究所)电灼去除疣体,治疗后创面外用红霉素软膏,治疗后7～10 d复诊时取皮损局部脱落细胞检测HPV6/11载量,阳性病例(HPV载量＞103 IU/ml)61例作为研究对象。将61例分为2组,光动力组32例,男19例,女13例,平均27.8岁(17～46岁);对照组29例,男17例,女12例,平均29.1岁(18～45岁),两组患者性别、年龄、HPV载量比较,差异无统计学意义。本研究经本院伦理委员会批准,受试者均签署知情同意书。

2.治疗方法:光动力组:盐酸氨基酮戊酸散(上海复旦张江生物医药股份有限公司提供)配制成20%盐酸氨基酮戊酸溶液均匀敷于原疣体部位及其周围2 cm内的正常皮肤,用保鲜膜封包后再以纱布覆盖,胶带固定,局部避光3 h后,用XD-635AB型光动力(PDT)激光治疗仪(购于桂林市兴达光电医疗器械有限公司)进行治疗。设定治疗参数:波长635 nm,照射时间20 min,光纤头与皮损呈垂直方向,两者之间的距离为10～15 cm,能量密度l00 J/cm2。照射中疼痛明显者适当调节输出功率,但不低于150 mW,同时延长照光时间。每7～10天治疗1次,共2次。对复发的病例增加治疗次数,最多治疗4次。对照组:电离子手术去除疣体后不再进行治疗,在随访过程中出现复发病例则进行电离子手术去除疣体或外用咪喹莫特去除疣体。两组复发病例不再进入HPV载量检测的统计。两组患者初次治疗后连续随访3个月,第1个月每7～10天随访1次,以后每月随访1次,连续观察3个月。治疗3个月后取原病灶表面脱落细胞做HPV DNA检测。

3.标本采集:分别于电离子手术治疗去除疣体后7～10 d和治疗后3个月采集61例CA患者病灶局部表皮脱落细胞HPV DNA载量检测。为确保采样的标准化,固定1名护士负责采样,用生理氯化钠溶液浸润过的无菌棉拭子来回擦拭原病灶部位3次,将棉拭子浸入备有1 ml无菌生理氯化钠溶液的无菌试管中,充分漂洗后弃棉拭子,扣紧试管盖,做好标记,放置-20℃冰箱保存。

4.试剂与仪器:试剂为中山大学达安基因股份有限公司提供人乳头瘤病毒(6,11型)核酸定量检测试剂盒(PCR荧光法)。LightCycler 480荧光定量PCR扩增仪购于瑞士罗氏公司。生物安全柜购于上海瑞仰净化装备公司。Legend Micro 21高速离心机为美国Sorvall公司生产。

5.检测方法:取出待测样本全部转至1.5 ml离心管中, 13 874×g离心5 min,去上清液,沉淀加灭菌生理氯化钠溶液1 ml混匀,13 874×g离心5 min,去上清液,沉淀加入50 μl DNA提取液后,煮沸制备DNA模板,置入配置好的PCR反应管,放入PCR扩增仪。扩增参数为93℃预变性2 min,93℃45 s,55℃60 s扩增10个循环,然后按93℃30 s,55℃45 s, 30个循环。通过配套软件分析数据,直接给出样本定量结果,每次实验均做阳性和阴性对照。

6.统计学分析:采用SPSS19.0进行统计学处理,两组间均数比较采用t检验;复发率和HPV DNA阴转率的比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

二、结果

1.疗效:光动力组32例在治疗后3个月内29例治愈(90.6%),3个月内无复发,另3例复发1次。对照组29例在治疗后3个月内19例治愈(65.5%),10例复发(34.5%),其中4例复发1次,4例复发2次,2例复发3次。两组治愈率和复发率比较,差异有统计学意义(均P＜0.05)。

2.病灶局部HPV6/11型DNA载量检测情况:剔除复发病例最终48例进入病毒载量检测统计;光动力组29例,对照组19例。在电离子手术去除疣体后7～10 d两组病例病灶局部病毒HPV载量比较,差异无统计学意义。3个月后两组病例病毒HPV载量均有大幅下降,光动力组26例阴性(HPV载量＜103);对照组13例阴性,但下降幅度低于光动力组。见表1。

表1 光动力组与对照组病灶局部HPV6/11型DNA载量变化

三、讨论

尖锐湿疣用传统治疗方法容易复发,复发的确切机制尚不清楚,但病原体的数量即病毒载量和毒力是一个很重要的因素。蒋艺等[3]检测62例尖锐湿疣患者治疗前后HPV6/11载量,治疗后的病毒载量较治疗前下降或阴性,治疗后仍阳性者复发率高于检测阴性者,认为病毒载量与尖锐湿疣患者复发密切相关。ALA-PDT治疗尖锐湿疣,具有疗效好、安全性高、复发率低等优势[4-5]。本研究以病灶局部HPV6/11型载量作为观察指标。光动力组病例3个月治愈率90.6%,复发率仅为9.4%显著低于单纯电离子除疣组(对照组)。光动力组29例中有26例HPV DNA检测呈阴性,阴转率为89.7%;对照组19例有13例HPVDNA检测阴转,阴转率为68.4%,但差异无统计学意义,可能与两组样本少有关。治疗前两组病毒载量无明显差异(P＞0.05),ALA-PDT治疗后光动力组病毒载量为(1.7×105±7.86×105)拷贝/ml,显著低于对照组的(1.27×106±2.21×106)拷贝/ml(P＜0.05)。可见ALAPDT能够有效地降低CA患者病灶局部HPV病毒载量,消除局部HPV感染,防止CA复发。病灶局部HPV病毒载量降低的机制可能与ALA-PDT治疗后感染病毒的细胞凋亡、坏死和脱落有关[6],其确切机制尚待进一步研究。

[1]Stanley MA.Genital human papillomavirus infections:current and prospective therapies[J].J Gen Virol，2012，93:681-691.

[2]中华人民共和国卫生部.尖锐湿疣诊疗规范(试行).2000-8-7.

[3]蒋艺，吴洋，陈岚华，等.尖锐湿疣患者治疗前后人乳头瘤病毒核酸的荧光定量分析[J].中华皮肤科杂志，2007，40(5):307-308.

[4]Wang XL，Wang HW，Wang HS，et al.Topical 5-aminolaevulinic acid-photodynamic therapy for the treatment of urethral condylomata acuminata[J].Br J Dermatol，2004，151(4):880-885.

[5]涂平，郑和义，顾恒，等.外用盐酸氨基酮戊酸光动力疗法治疗尖锐湿疣多中心随机对照研究[J].中华皮肤科杂志，2007，40(2):67-70.

[6]张云峰，缪飞，王宏伟，等.氨基酮戊酸光动力治疗尖锐湿疣局部免疫反应的研究[J].中华皮肤科杂志，2013，46(5):309-312.

2014-01-15)

(本文编辑:吴晓初)

Inhibitory effect of 5-aminolevulinic acid photodynamic therapy on human papillomavirus replication in condyloma acuminatum lesions

Wang Hui，Zhao Xueliang.Department of Dermatology，Weifang People′s Hospital，Weifang 261041，Shandong，China

Zhao Xueliang，Email:zhxl5801@163.com

ObjectiveTo detect the changes in DNA loads of human papillomavirus(HPV)type 6/11 in lesions of patients with condyloma accuminatum(CA)before and after 5-aminolevulinic acid photodynamic therapy (ALA-PDT).MethodsAfter removal of warts by electrocautery，HPV6/11-positive patients with CA were divided into two groups:treatment group(32 cases)receiving two sessions of ALA-PDT with intervals of 7-10 days，and control group(29 cases)remaining untreated.Exfoliated cells were collected from the lesional sites of these patients before and 3 months after the first session of ALA-PDT，and fluorescence-based quantitative PCR was conducted to estimate the DNA loads of HPV 6/11 in these cells.Results Three months after the first session of ALA-PDT，89.7%(26/29)of the patients in the treatment group and 68.4%(13/19)in the control group became HPV DNA negative，with significant differences between the treatment group and control group in the DNA loads of HPV ((1.70±7.86)×105vs.(1.27±2.21)×106copies/ml，P＜0.05).Conclusion ALA-PDT can reduce HPV DNA loads in lesions of CA in patients.

Condylomata acuminata;Photochemotherapy;Human papillomavirus

10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2014.10.019

潍坊市科技发展计划(201302029)

261041山东,潍坊市人民医院皮肤科

赵学良,Email:zhxl5801@163.com