PTEN在结肠癌组织中的表达及其临床意义

张谷月 张志勇 王 晔 吴晨鹏 张 林 刘丽云 李 华 云 翔 沈福海

(唐山市工人医院病理科，河北 唐山 063000)

结肠癌源于结肠黏膜上皮，发病率较高，对人群的影响较大〔1〕。磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)是新近发现的肿瘤抑制基因，具有双特异性磷酸酶的活性，广泛作用于细胞信号通路中〔2〕，并通过诱导细胞周期阻滞和调节细胞凋亡发挥调节肿瘤生物学行为的作用。本研究旨在探讨PTEN在结肠癌发生、发展中的作用，为揭示肿瘤的生物学行为提供理论帮助。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2006年1月1日至2007年9月1日在唐山市工人医院普外科住院的结肠癌并行外科手术患者的存档石蜡标本86例。纳入标准:(1)符合WHO在2008年结肠癌的诊断标准，由两位病理主治医师再次确诊分型;(2)患者术前均未接受过放疗和化疗;(3)临床随访资料完全。其中男46例，女40 例，年龄 36 ～78〔平均(52.5±8.7)〕岁。病理类型分组:高分化25例，中分化30例，低分化31例。无淋巴结转移46例，有淋巴结转移组40例。选取癌旁正常组织60例(取自结肠癌患者癌旁＞5 cm组织)为切缘黏膜组，男:女=1∶1。年龄38～75〔平均(51.6±8.0)〕岁。另选取结肠腺瘤伴不典型增生60例为腺瘤组，男 ∶女 =1∶1，年龄 37 ～77〔平均(51.4±7.6)〕岁。

1.2 方法

1.2.1 免疫组化法染色及判定标准 新鲜标本常规取材后经10%中性甲醛固定，苏木素-伊红(HE)染色按常规步骤进行。采用免疫组化(S-P)法对PTEN蛋白进行检测。实验步骤按试剂盒说明书进行。兔抗人PTEN单克隆抗体购自Dako公司;SP免疫组织化学试剂盒和二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒均购自北京中杉生物技术有限公司。结果判定标准:PTEN主要定位于细胞质，呈棕褐色颗粒染色为阳性。每个切片于高倍镜下随机选取10个不重复视野计数200个细胞(对少数不足10个高倍视野的，以观察到的最多高倍视野计算平均值)，根据阳性细胞所占百分比进行判断。以阳性细胞所占百分比＜25%为阴性，阳性细胞数≥25%为阳性。

1.2.2 随访 本组患者随访时间为9～60个月，所有患者术后均按照美国国籍综合癌症网络(NCCN)结肠癌治疗指南进行随访。

1.3 统计学方法 实验数据均应用SAS6.12软件进行分析，组间率的比较采用χ2检验，并进行生存分析。

2 结果

2.1 PTEN在结肠腺癌组、腺瘤组及切缘黏膜组中的表达PTEN 在腺癌组(34.88%，30 例)、腺瘤组(68.33%，41 例)及切缘黏膜组(83.33%，50例)中的表达阳性率差别有统计学意义(P＜0.001)。见图1。

图1 PTEN在结肠腺癌组织(IHC，×200)

2.2 结肠腺癌组中PTEN的表达与临床病理特征的关系PTEN在腺癌组分化程度、淋巴结转移、临床分期、肿瘤大小、浸润深度及不同Ki-67表达的比较差别均有统计学意义(P＜0.05)。结肠腺癌中PTEN在分化较好、无淋巴结转移、Ⅰ+Ⅱ期、肿瘤直径≤3 cm、浸润深度未达浆膜、Ki-67低表达的肿瘤中表达较高。而在不同年龄、不同性别、有无炎细胞浸润、不同结肠部位的比较差别均无统计学意义(均P＞0.05)，见表1。

表1 PTEN在不同临床病理特征结肠腺癌组织中的表达

2.3 结肠腺癌组中PTEN表达与预后的关系 本组患者随访时间为9～60个月，经生存分析显示，结肠癌中PTEN的表达均与预后相关(P＜0.05)。PTEN低表达患者的预后差，高表达患者的预后好。见图2。

图2 PTEN在结肠腺癌组织中的表达与结肠腺癌患者生存时间的关系

3 讨论

结肠癌在我国发病率高，临床最常见，发病率呈上升趋势。目前其发生、发展机制尚不清楚。可能与吸烟、饮酒、饮食、空气污染、病毒感染等因素有关〔1〕。恶性肿瘤在发生和进展过程中，受到某些异常改变基因和蛋白的异常调控，当其成分发生突变或异常表达时，结肠黏膜上皮细胞出现恶变，而腺瘤发生的不典型增生是结肠癌重要的癌前病变〔3，4〕。

PTEN作为抑癌基因，恶性肿瘤中可能存在PTEN/c-myc动态平衡〔5〕。本实验结果说明当癌变发生时，PTEN表达逐渐丢失，提示PTEN在恶变细胞中逐渐失去抑癌的作用。PTEN抑制恶性肿瘤进展是通过抑制血管内皮生长因子(VEGF)的作用实现的〔6，7〕;即PTEN可以通过降低内皮细胞的迁移能力、增加血管内皮生长的抑制因子作用进而减少肿瘤的血管新生。还有观点认为PTEN可以直接使磷脂酰肌醇三磷酸(PIP3)的D3位点去磷酸化，有效的降解丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 B(PKB/AKT)的磷酸化水平，拮抗下游通路的转导〔8，9〕，抑制VEGF的分泌而抑制血管的新生。PTEN通过其脂质磷酸酶活性调节局灶聚集黏附激酶对细胞与细胞间的黏附作用、细胞与细胞外基质的降解作用进行有效的调节，从而多方面调节肿瘤的生物学功能〔10，11〕。实验结果提示PTEN表达丢失参与到结肠癌的分化、淋巴道播散、肿瘤的生长及细胞的增殖中，也提示PTEN的抑癌作用广泛。本研究显示，PTEN的表达与患者的预后相关，即PTEN低表达患者的预后差，因此检测PTEN表达丢失的严重程度可能是判断结肠癌预后的重要指标。

总之，PTEN在结肠癌中低表达并与结肠癌患者临床病理特征及预后密切相关，其可能对结肠癌的进展有抑制作用，检测PTEN蛋白表达可为结肠癌的诊断及预后评估提供帮助。

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