广枣叶总黄酮的急性毒性作用和镇静催眠作用的初步观察△

董永和 邱 敏 张浩楠 杨玉梅

(包头医学院，内蒙古包头 014060)

广枣为蒙医常用药材之一，具有行气活血、养心、安神之功效，主治气滞血瘀、胸痹作痛、心悸气短、心神不宁等［1］。经初步统计，内蒙古蒙成药标准共收载内服药101种，含广枣的制剂就有11种。广枣的传统药用部位是干燥成熟果实，其提取物广枣总黄酮(Total Flavones of Choerospondias Axillaris Fructus，TFC)具有明显的抗心律失常作用、耐缺氧和保护心肌缺血作用、抑制血小板聚集和改善血液流变学、并且可以增强小鼠的免疫功能［2－4］。研究发现，在广枣叶中也含有总黄酮，即广枣叶总黄酮(Total Flavones of Choerospondias Axillaris Folium，TFCF)。本实验旨在观察TFCF的急性毒性作用和对镇静催眠作用的影响，为其进一步的研究开发提供实验依据。

1 实验材料

1.1 实验药品与试剂:TFCF(广东海洋大学理学院提供，批号20070610)，提取物中总黄酮类化合物的含量≥5.00%(g/g)，临用时用蒸馏水配成所需浓度。安定(山东省平原制药厂，批号H37023039)，临用时研磨后用蒸馏水配成所需浓度。

1.2 实验动物:昆明种小鼠(体重18～22g)，雌雄各半，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号:SCXK(京)2007—0001。

2 实验方法

2.1 急性毒性实验［5－6］:预实验结果表明，TFCF口服毒性小，无法测出半数致死量。故进行最大给药量实验。取小鼠40只，随机分为对照组和给药组，每组20只，雌雄各半。在实验条件下(恒温恒湿)喂养3d，给药前禁食不禁水一夜(12h)。给药组以70%的TFCF混悬液按20ml·kg－1灌胃给药，1次/8h×3;对照组给予等容量的生理盐水。给药后即刻观察小鼠反应。常规饲养，观察15d。记录小鼠体重、外观、食欲、行为活动、死亡等情况。

2.2 小鼠自发活动的测定［7］:小鼠50只，随机分为生理盐水对照组、安定组(0.002g·kg－1)、TFCF 大剂量组(0.4g·Kg－1)、TFCF 中剂量组(0.2g·Kg－1)、TFCF 小剂量组(0.1g·Kg－1)，每组10只，雌雄各半。每只小鼠在程控自主活动箱放置1 min后，记录其2 min内的活动次数。小鼠灌胃前禁食不禁水16h，以0.2ml·10g－1灌胃，连续灌胃给药7d，1 次/d，末次给药后的20、40、60、90、120 min 同法复测每只小鼠2 min内的活动次数。

2.3 戊巴比妥钠催眠作用［8］

2.3.1 单次给药实验:小鼠50只，分组同2.2。各实验组小鼠第一次给药1h后腹腔注射阈剂量的戊巴比妥钠50mg·kg－1(0.1mL·10g－1)，以翻正反射的消失至恢复的时间为指标测定睡眠时间。

2.3.2 连续给药实验:小鼠50只，分组同2.2。小鼠灌胃前禁食不禁水16h，连续灌胃给药7d，1次/d，给药1h后腹腔注射阈剂量的戊巴比妥钠 50mg·kg－1(0.1mL·10g－1)，以翻正反射的消失至恢复的时间为指标测定睡眠时间。

2.4 统计方法:实验结果均以(s)表示，应用SPSS 13.0统计软件进行处理，两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 TFCF急性毒性作用:给药后小鼠即开始进食，无异常表现。15d内，小鼠活动自如，反应灵敏，毛色光滑，排便及活动均无异常;食量正常，平均每天进食5～7g/只;体重正常增长，与对照组比较无统计学差异(P＞0.05)，见表1;且无1例死亡。实验结束颈椎脱臼处死小鼠，肉眼观察心、肝、脑、脾、肾、胃、肠、子宫、睾丸等重要脏器，均无异常改变。实验结果计算得出小鼠一日的最大给药量为42g·kg－1。

表1 TFCF对实验小鼠体重的影响(±s，n=20)

表1 TFCF对实验小鼠体重的影响(±s，n=20)

组别 体重增长百分率(%)体重(g)给药前 给药15d后生理盐水组19.5 ±3.7 30.5 ±2.0 36.2 TFCF组19.0 ±3.9 29.4 ±2.6 36.0

3.2 TFCF对小鼠自发活动的影响:与自身给药前比较，TFCF各剂量组小鼠自发活动均显著下降(P＜0.05或P＜0.01);与同时段生理盐水对照组比较，TFCF大剂量组和中剂量组小鼠自发活动在不同时间均有下降(P＜0.05或 P ＜0.01)，见表2。

表2 TFCF对小鼠自发活动的影响(±s，n=10)

表2 TFCF对小鼠自发活动的影响(±s，n=10)

注:与同时段生理盐水对照组同时刻比较，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;同组别给药前后比较，#P ＜0.05、##P ＜0.01

组别小鼠自发活动次数(次/2min)0min 10min 20min 40min 60min 120min生理盐水组 7.9 ±0.9 7.6 ±2.7 8.0 ±2.2 8.8 ±1.9 8.2 ±1.8 8.0 ±1.5安定组 7.9 ±0.9 2.3 ±1.5＊＊## 2.1 ±2.0＊＊## 1.3 ±1.0＊＊## 0.5 ±0.7＊＊## 0.8 ±0.6＊＊##TFCF 大剂量组 7.7 ±1.3 3.1 ±0.7＊＊## 3.1 ±0.9＊＊## 2.0 ±0.7＊＊## 1.6 ±0.8*## 1.8 ±1.2*##TFCF 中剂量组 8.0 ±1.2 4.3 ±1.8＊＊## 3.4 ±1.5*## 3.4 ±1.6＊＊## 3.4 ±1.4＊＊## 2.9 ±1.4*##TFCF 小剂量组 8.2 ±1.0 5.6 ±1.5## 5.3 ±0.8## 5.6 ±1.7## 6.1 ±1.0## 6.8 ±1.5#

3.3 TFCF对小鼠戊巴比妥钠睡眠时间的影响

单次给药和连续给药实验结果显示，与生理盐水对照组比较，各剂量组TFCF对小鼠戊巴比妥钠入睡潜伏时间均有显著降低(P＜0.05或P＜0.01);而对小鼠戊巴比妥钠睡眠持续时间，TFCF只有大、中剂量组才能延长小鼠戊巴比妥钠的睡眠持续时间(P ＜0.05或P ＜0.01)，见表3。

表3 TFCF对小鼠睡眠时间的影响(±s，n=10)

表3 TFCF对小鼠睡眠时间的影响(±s，n=10)

注:与同组生理盐水对照组比较，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01.

组别单次给药(min) 连续给药(min)入睡潜伏时间 睡眠持续时间 入睡潜伏时间 睡眠持续时间生理盐水组20.8 ±4.0 188.5 ±83.3 17.4 ±1.7 95.7 ±36.7安定组 6.6 ±1.0＊＊ 307.5 ±39.1＊＊ 5.9 ±1.0＊＊ 155.5 ±30.6＊＊TFCF 大剂量组9.6 ±1.8＊＊ 273.8 ±51.7* 9.9 ±2.1＊＊ 142.3 ±45.4*TFCF 中剂量组10.5 ±2.4＊＊ 249.8 ±26.9*11.8 ±5.5＊＊ 140.5 ±37.8*TFCF 小剂量组 14.2 ±9.6* 244.8 ±49.4 12.9 ±5.5*104.9 ±78.4

4 讨论

受药物浓度和给药体积的限制，对小鼠一次灌胃给药无法测出半数致死量。经最大给药量测定，小鼠每日口服的最大给药量为42g·kg－1，提示TFCF口服给药急性毒性很低，但长期毒性作用有待于进一步研究。本次镇静实验结果表明，在自发活动实验中，TFCF各组均能抑制小鼠自发活动次数;在单次给药和连续给药的实验中，TFCF均能缩短小鼠睡眠潜伏时间;只有大、中剂量组的TFCF才能延长小鼠睡眠持续时间。提示广枣叶总黄酮有镇静作用，但并无叠加性。

此前，不论是国家药典还是内蒙古成药标准收载的广枣及广枣制剂，都是指广枣的干燥成熟果实，即广枣药材，而广枣叶长期以来是弃之不用的。本实验结果表明，TFCF毒性较小，且具有不同程度的镇静和催眠作用。广枣叶是否具有其它药理作用还有待于进一步研究。广枣叶产量充足，如果能合理开发应用，变废为宝，必然会提高广枣的综合药用价值。

［1］张琪，杨玉梅，刘凤鸣，等.广枣总黄酮对大鼠缺血性心肌组织蛋白质表达的影响［J］.中国药理学通报，2006;22(11):1344－8.

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［3］王玉珍，任建梅，王若愚，等.广枣总黄酮对小鼠免疫功能的影响［J］.中国药理学通报，1991;7(3):214－7.

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［6］唐大轩，熊静悦，梁娅君，等.川楝子对大鼠完全急性毒性作用研究［J］.时珍国医国药，2011;22(10):2387－2389.

［7］张岗强，何昕，董宪喆，等.肝胆两益汤镇静催眠作用及其机制研究［J］.中国实验方剂学杂志，2013;19(14):226－229.

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