中药大黄不同储存时期内的有效成分含量研究＊

宋文惠 边军昌 刘勤社 陕西省人民医院（西安710068）

△西安医学院（西安710021）

大黄为蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatum L.）、唐古特大黄（Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.）或药用大黄（Rheum officinale Baill.）的干燥根及根茎。主含蒽醌类衍生物、苷类化合物，其他的成分还有鞣质类、有机酸类、挥发油类、脂肪酸及植物甾醇等等［1］。

根及根状茎含大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚等游离蒽醌衍生物，是抗菌成分；另含以上物质的葡萄糖苷及蕃泻叶苷A、B、C等结合状蒽醌衍生物，有致泻作用。此外尚含鞣质类，是收敛、止血成分［2］。大黄根及根状茎有清热泻下、破积去瘀、抗菌消炎等作用。生用为峻下药，炮制后使用为缓下药。炒炭后又可用于止血。小剂量服用时有健胃、收敛作用。

储存时期的不同，导致大黄的有效成分含量发生变化，若不能正确掌握储存时期，就会使有效成分含量下降，影响临床疗效。笔者对大黄的不同储存时期有效成分含量的变化规律进行研究，以指导生产企业和使用单位合理保管应用。

1 仪器、药品与试剂

1.1 仪器 安捷伦1100型液相色谱仪（美国）；HP1100分离系统（四元泵，柱温箱和自动进样器），HP1100紫外检测器，安捷伦化学工作站；旋转蒸发器等。

1.2 试剂与试药 大黄素对照品（中国药品生物制品检定所，20mg/瓶），新鲜大黄药材订制于西安药材公司，其他大黄药材样品以月份、年份储存使用，甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为安捷伦ZORBAX Stable Bound（1.8μm，4.6mm×50mm），以甲醇－0.1%磷酸溶液（体积比85∶15）为流动相，检测波长254nm；流速为0.8mL·min－1，柱温：室温。进样量：5μL；灵敏度：0.02

2.2 标准曲线与线性范围 精密称取大黄素对照品2.0mg，置于50mL量瓶中，加甲醇溶解、定溶，大黄素含量为0.04g/L作为对照品储备溶液。移液管取上述溶液1.0mL于10mL量瓶中，甲醇定溶混匀，既得标准对照液（大黄素含量为4μL/mL）。分别精密吸取上述标品溶液1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、30.0μL，按上述色谱条件，注入液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积值为纵坐标，进样量为横坐标绘制标准曲线，作线性回归，得回归方程 A＝－3.1736＋25.6462C，r＝0.9999，结果表明，线性范围μg 0.04～0.12。

2.3 供试品溶液的制备 取新鲜大黄药材烘干粉碎、过四十目筛，精密称取粉末约0.15g置于具塞锥形瓶中，加甲醇25mL称重，加热回流1h，放冷称重，补足甲醇损失量，摇匀过滤，精密量取继滤液1mL定容至10mL，置于烧瓶中蒸去甲醇，加20% 盐酸10mL超声水解5min，再加氯仿回流提取1h，冷后置于分液漏斗中，少量氯仿洗涤容器，合并滤液，分取氯仿层，酸液再用氯仿萃取三次，每次10mL，合并氯仿层，分别用少量5%的碳酸氢钠、碳酸钠和2%氢氧化钠萃取三次，留取碳酸钠萃取液，酸化得结晶，加甲醇溶解于10mL容量瓶中，定容，摇匀过滤，进样前取2mL再用0.4 5μm微孔滤膜过滤，取滤液即得。其他不同时期的大黄制法同此项。

2.4 精密度实验 精密吸取标准品溶液，连续进样6次，依据大黄素的峰面积计算精密度，结果大黄素的RSD＝0.08%，表明，本方法精密度良好。

2.5 重复性实验 样品依2.3项平行处理6份，测定峰面积来计算相对标准偏差，大黄的RSD为0.07%。

2.6 回收率试验 精密称取已测知含量的样品溶液，加入一定量的大黄素对照品溶液，按供试品制法和测定方法计算加标回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

2.7 不同时期样品的测定 新鲜的药材及不同年限的药材操作时每份取三份，平行操作，测定时取其平均值，结果见表2。

表2 不同时期大黄中大黄素的含量测定结果

3 讨 论3.1 大黄的主要有效成分为蒽醌衍生物，它包括羟基蒽醌、蒽酚、蒽酮及蒽醌衍生物。这些常以游离状态或与糖结合成苷或与金属成盐等形式存在，蒽酚、蒽酮是蒽醌的还原产物，常与蒽醌同时存在于中药中，可以相互转化，还原型多存在于新鲜药材中，它们在储存中会逐渐氧化变成蒽醌［2］。所以含有蒽醌的多数药材采集后需储藏才可药用，目的使其成分氧化完全，蒽醌含量增加。但是大黄药材因储藏不当两年左右极易虫蛀，此后随虫蛀加深有效成分急剧下降，以至于完全不可药用。

3.2 大黄素的提取方法很多，如水提法、碱溶酸沉法、渗滤法、回流法、超声法等等［2，3］。但以乙醇、氯仿和加酸水解提取常见；影响回收率的因素也很多，如药材的产地、采收季节；提取的工艺、溶剂和温度的选择；水解的时间、水解的程度；人为操作因素等等。

3.3 由于大黄的来源复杂，南北各地区的有效成分含量差距很大。所以本法只对其主要成分—大黄素作为检测指标，以检验其随储存年限的变化规律；大黄素的含量测定方法也很多，如薄层扫描法、分光光度法、高效液相法等等，药典为HPLC法，所以本文选用高效液相色谱法测定其含量。

3.4 经本次实验操作，可以得到这样的结论：含蒽醌类的药物如大黄在储存一年左右含量最高，但在两年后极易虫蛀，有效成分含量下降，虎杖、何首乌、萱草、牛膝等也有此现象，故新鲜的、虫蛀的药材其有效成分含量不高，使用保管时需注意。

［1］葛亚宁，魏宝林，董明芝，等.不同炮制方法对大黄有效成分的影响研究［J］.陕西中医，2013，34（08）：1069－1070.

［2］吴立军.天然药物化学［M］.北京：人民卫生出版社，2007：151－171.

［3］李沛清，张 帆，金建文，等.不同产地大黄ITS序列分析［J］.辽宁中医杂志，2010，37（1）：136.