五加生化缓释片治疗功能性子宫出血的研究
2014-11-18王雪李铁男张宁李建民徐艳明王业
王雪+李铁男+张宁+李建民+徐艳明+王业秋+王发善
[摘要] 目的 研究五加生化缓释片对功能性子宫出血的作用及机制。 方法 选取40只雌性KM小鼠，随机分成空白组、产复康颗粒组以及五加生化缓释片低、中、高剂量组，每组8只，采用断尾法和毛细管凝血法测定小鼠的出血及凝血时间。另取早孕SD大鼠30只，随机分成模型组（造模方法：灌服米非司酮和米索前列醇造成不完全流产模型）、产复康颗粒组以及五加生化缓释片低、中、高剂量组，每组6只，采用毛细玻璃管法测定出血时间，采用剪尾法测定凝血时间，采用酶标仪对置入阴道棉球的血浸渍液进行子宫出血量测定，观察五加生化缓释片对该模型大鼠出、凝血时间及子宫出血量的影响。 结果 与空白组比较，五加生化缓释片高、中、低剂量组能明显缩短小鼠的出血及凝血时间（P<0.01、P<0.05）；而与产复康颗粒组比较，五加生化缓释片高、中剂量组能明显缩短小鼠的出血及凝血时间（P<0.01）；与空白组比较，五加生化缓释片高、中、低剂量组能明显减少大鼠的子宫出血量（P<0.01、P<0.05）；与产妇康颗粒组比较，五加生化缓释片高剂量组能明显减少大鼠的子宫出血量（P<0.01）。 结论 五加生化缓释片能显著减少大鼠的子宫出血量。
[关键词] 五加生化缓释片；出血时间；凝血时间；子宫出血量
[中图分类号] R711.52 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）10（a）-0008-03
功能性子宫出血是指下丘脑-垂体-卵巢轴神经内分泌调节机制失常所致的子宫异常出血，此类疾病的主要症状表现为月经周期不规律、经量过多、不规则出血等[1-2]，严重影响患者生活和工作质量，本研究主要探讨五加生化缓释片对功能性子宫出血的作用及作用机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物
昆明种小鼠，雌性，购自中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心；SD大鼠，雌鼠30只、雄鼠60只，由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供。
1.2 实验药物与试剂
五加生化缓释片由佳木斯多多药业有限公司生产；产妇康颗粒由深圳三顺制药有限公司生产，批号：110714；米非司酮由北京紫竹药业有限公司生产，批号：110301；米索前列醇由北京紫竹药业有限公司生产，批号110121；NaOH由国药集团化学试剂有限公司生产，批号：20100114。
1.3 实验仪器
玻片、秒表、毛细玻璃管，分析天平（上海精科），高速冷冻离心机（上海浦东天本离心机械有限公司），酶标仪（美国BioTek公司）。
1.4 实验方法
1.4.1 五加生化缓释片对小鼠出血及凝血时间的影响[3] 取40只健康KM小鼠，体重17～22 g，按体重随机分成5组，分别为空白组、产复欣颗粒组（阳性对照组）以及五加生化缓释片高、中、低剂量组。各剂量组每日灌胃给药1次，空白组给予等体积的生理盐水，连续给药1周，最后一次给药30 min后将小鼠固定，用量尺测量鼠尾长度并标记，用剪刀在小鼠尾部4 mm处剪断，血液流出时开始计时，每隔半分钟用滤纸吸取血滴1次，直至无血液流出计为小鼠尾部的出血时间。凝血时间的测定是末次给药30 min后，将内径10 mm、长10 cm的毛细玻管自眼内眦插入，血液注满后取出，毛细管中血液凝固所用的时间即为小鼠的凝血时间。
1.4.2 造模[4] 筛选发情期的大鼠，按雌雄比例1∶2合笼，第2天早晨检查阴道涂片，以发现阴道有精子者为妊娠第1天。每组均在第7天灌胃给予米非司酮溶液8.3 mg/kg（8：00）和米索前列醇溶液100 μg/kg（18：00），造成大鼠不完全流产的模型。
取上述模型大鼠30只，随机分成5组（每组6只），分别为模型组、产复欣颗粒组（阳性对照组）以及五加生化缓释片高、中、低剂量组。在每只大鼠阴道内置入消毒棉球1个（棉球重75～90 mg），分别于次日8：00和18：00将棉球取出，同时更换新的棉球，将取出的棉球放入袋中密闭冷藏保存，连续上述操作14 d，每组大鼠每天均灌胃给药1次，连续7 d。
大鼠子宫出血量的计算方法[4]：取大鼠静脉血0.02 ml，加入0.05 mg/ml NaOH溶液4 ml中混匀。将每只大鼠的出血棉球放入烧杯内，根据出血量加适量0.05 mg/ml NaOH浸泡挤压搓洗棉球血渍，将浸提液倒入另一个烧杯内保存，重复上述操作直至棉球无血渍为止。将先后所有浸提液混匀，记录所用0.05 mg/ml NaOH的总量，取已过滤的浸提液，空白大鼠静脉血的NaOH溶液各4 ml，以0.05 mg/ml NaOH溶液为空白对照，在546 nm波长处测得吸光度（OD）值。大鼠子宫出血量（ml）=尾静脉血量0.02 ml×（子宫浸提液OD值×V2）/（尾静脉血OD值×V1），其中V1=稀释尾静脉血所用NaOH溶液的量（ml）、V2=浸提子宫血所用NaOH溶液量。
1.5 统计学处理
所得数据均采用SPSS 17.0统计软件进行处理，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用单因素方差分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 五加生化缓释片对小鼠出血及凝血时间的影响
实验结果显示，五加生化缓释片高、中、低剂量组和产妇康颗粒组均能缩短小鼠的出血及凝血时间，与空白组比较差异有统计学意义，且五加生化缓释片高、中剂量组的小鼠出血时间明显缩短（P<0.01）（表1）。
2.2 五加生化缓释片对大鼠药物流产模型子宫出血量的影响
五加生化缓释片低、中、高剂量组及产复康颗粒组均能使大鼠子宫出血量减少，与空白组比较，五加生化缓释片高、中、低剂量组均能明显减少大鼠的子宫出血量（P<0.01、P<0.05）；与产妇康颗粒组比较，五加生化缓释片高剂量组能明显减少大鼠的子宫出血量（P<0.01）（表2）。
3 讨论
五加生化胶囊是目前常用的剂型，主要由刺五加、当归、川芎、桃仁、甘草、炮姜等药物组成，用于人工流产和药物流产后不良刺激造成的机体失调状态的改善，可以促进机体康复[5-8]，但其作用机制不明确。本研究通过改变药物剂型来探讨五加生化缓释片对功能性子宫出血的影响。
五加生化缓释片是利用现代缓释制剂技术开发的缓释制剂，其优点是减少用药剂量及给药次数、减少药物的不良反应、提高生物利用度、适应慢性病患者长期用药。其主要成分有阿魏酸、绿原酸和异嗪皮啶[9-12]。本研究结果表明，五加生化缓释片能显著缩短小鼠的出血及凝血时间，并且呈现剂量依赖性。五加生化缓释片能显著减少功能性子宫出血型大鼠的子宫出血量，其机制可能与五加生化缓释片的止血作用有关，但具体机制还有待进一步研究。
[参考文献]
[1] 张国境，路欣，许晴，等.功能性子宫出血子宫内膜血管变化的研究[J].首都医科大学学报，2005，26（2）：163-166.
[2] Chen BH，Ciudice LC.Dysfunctional uterine bleeding[J].West J Med，1998，169（5）：280.
[3] 陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，1994：484-485.
[4] 王晓东，赵军宁，张白嘉，等.药物致早孕大鼠子宫出血.模型的建立[J].中国药理学通报，1999，15（2）：182-183.
[5] 翟婷婷，孟昱琼，丁丽仙.补肾活血方对大鼠药物流产后阴道流血影响及动情周期恢复的实验研究[J].山西医药杂志，2008，37（3）：240-242.
[6] 张凤，董玉国.五加生化胶囊药理作用及临床应用[J].今日科苑，2009，13（8）：290-291.
[7] 张颖智，路娟，宋婷，等.五加生化胶囊对气虚血瘀模型大鼠血液流变学和细胞内皮因子的影响[J].中成药，2013， 35（7）：1536-1539.
[8] 药典委员会.临床用药须知[M].北京：人民卫生出版社，2005：553.
[9] 耿放，朱魁元，王发善，等.HPLC同时测定五加生化胶囊中3种有效成分的含量[J].中国实验方剂学杂志，2012， 18（9）：109-111.
[10] 耿放，王发善，邹韬博，等.五加生化胶囊UPLC-MS指纹图谱研究[J].药物分析杂志，2012，32（7）：1171-1175.
[11] 耿放，王发善，朱魁元，等.五加生化胶囊的GC-MS指纹图谱研[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（16）：89-92.
[12] 耿放，朱魁元，王发善，等.五加生化胶囊的高效液相色谱指纹图谱研究[J].分析科学学报，2012，28（3）：408-410.
（收稿日期：2014-07-28 本文编辑：林利利）
3 讨论
五加生化胶囊是目前常用的剂型，主要由刺五加、当归、川芎、桃仁、甘草、炮姜等药物组成，用于人工流产和药物流产后不良刺激造成的机体失调状态的改善，可以促进机体康复[5-8]，但其作用机制不明确。本研究通过改变药物剂型来探讨五加生化缓释片对功能性子宫出血的影响。
五加生化缓释片是利用现代缓释制剂技术开发的缓释制剂，其优点是减少用药剂量及给药次数、减少药物的不良反应、提高生物利用度、适应慢性病患者长期用药。其主要成分有阿魏酸、绿原酸和异嗪皮啶[9-12]。本研究结果表明，五加生化缓释片能显著缩短小鼠的出血及凝血时间，并且呈现剂量依赖性。五加生化缓释片能显著减少功能性子宫出血型大鼠的子宫出血量，其机制可能与五加生化缓释片的止血作用有关，但具体机制还有待进一步研究。
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[12] 耿放，朱魁元，王发善，等.五加生化胶囊的高效液相色谱指纹图谱研究[J].分析科学学报，2012，28（3）：408-410.
（收稿日期：2014-07-28 本文编辑：林利利）
3 讨论
五加生化胶囊是目前常用的剂型，主要由刺五加、当归、川芎、桃仁、甘草、炮姜等药物组成，用于人工流产和药物流产后不良刺激造成的机体失调状态的改善，可以促进机体康复[5-8]，但其作用机制不明确。本研究通过改变药物剂型来探讨五加生化缓释片对功能性子宫出血的影响。
五加生化缓释片是利用现代缓释制剂技术开发的缓释制剂，其优点是减少用药剂量及给药次数、减少药物的不良反应、提高生物利用度、适应慢性病患者长期用药。其主要成分有阿魏酸、绿原酸和异嗪皮啶[9-12]。本研究结果表明，五加生化缓释片能显著缩短小鼠的出血及凝血时间，并且呈现剂量依赖性。五加生化缓释片能显著减少功能性子宫出血型大鼠的子宫出血量，其机制可能与五加生化缓释片的止血作用有关，但具体机制还有待进一步研究。
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[12] 耿放，朱魁元，王发善，等.五加生化胶囊的高效液相色谱指纹图谱研究[J].分析科学学报，2012，28（3）：408-410.
（收稿日期：2014-07-28 本文编辑：林利利）
