巴中产栀子利胆退黄药理效应比较研究

★ 王利国 唐灿 刘艳 李梅 雷燕 黄丽萍 (.泸州医学院附属中医医院 四川 泸州646000;.泸州医学院药学院 四川泸州646000)

栀子为茜草科植物栀子的干燥成熟果实，主产于四川、湖北、江西、重庆、浙江、湖南、福建等省［1］，具有泻火除烦、清热凉血解毒之功效，适用于热病心烦，黄疸尿赤、血淋涩痛、血热吐衄、目赤肿痛、火毒疮疡等证［2］，现代药理研究证明栀子具有显著的保肝降酶、利胆退黄、解热抗炎、抗菌等药理作用。有报道表明巴中产栀子主要有效成分——栀子苷、西红花苷－Ⅰ、熊果酸含量均远远高于其它产地(四川乐山、青川、纳溪、宜宾，重庆江津、湖北枣阳等)栀子相应有效成分含量，从主要有效成分的含量优势初步证明巴中产栀子品质优异、质量稳定［3］。建立一个品质优异的川产道地药材——巴中产栀子，除上述报道检测主要有效成分的含量外，还必须通过主要药效学指标与江西、江津、湖北等地产栀子的药理效应横向比较，进一步从药理效应这个方面再证明巴中产栀子的优异品质。本课题对栀子主要药效学利胆退黄作用进行以下研究［4］。

1 材料

1.1 药物与试剂 巴中产30年生栀子成熟果实采自巴中市巴州区平梁乡青包山村－－四川省栀子产业科技示范园区(四川省巴中市百顺中药饮片有限公司);湖北产栀子成熟果实(采自湖北省枣阳市新市镇);江西产栀子成熟果实(采自江西省抚州市金溪具黄栀子GAP种植基地);江津产栀子(采自重庆市江津区贾嗣镇红阳村)。经课题组鉴定均为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实。栀子水溶性有效部位0.3g/mL，栀子70%乙醇溶性有效部位0.3g/mL(提取物中乙醇已除尽)。总胆红素(TBIL)测定试剂盒、总胆固醇(CHOL)测定试剂盒(均购于浙江夸克生物科技有限公司)。生理盐水(购于四川科伦有限责任公司)。戊巴比妥钠(购于泸州天根生化科技有限责任公司)。

1.2 仪器 电子天平(上海民桥精密仪器有限公司生产，型号:FA1104W);超声波清洗机(北京东西仪科技有限公司生产，型号:WH96/800);电热真空干燥箱(上海实验仪器厂生产，型号:OK072);高速离心机(华辰乐天生物实验设备有限公司生产，型号:HC－2062);BECKMAN全自动生化测定仪(美国贝克曼库尔特公司生产，型号:DXC800)。

1.3 动物 家兔，雌雄兼用，1.5～2.5kg(由泸州医学院实验动物中心提供)。

1.4统计学处理 实验数据均以xˉ±s表示，两组数据间比较采用SPSS16.0统计软件进行t检验，以P＜0.05表示显著性差异、以P＜0.01表示非常显著性差异、以P＜0.001表示极显著性差异。

2 方法与结果

2.1 提取方法

2.1.1 水溶性有效部位提取方法 称取干燥栀子粗30g加7倍量水浸泡30min后超声提取15min过滤，滤渣再加4倍量水超声提取15min过滤，最后再加4倍量水超声提取15min过滤，合并3次提取液加入1‰苯甲酸钠于55℃烘箱中浓缩至100mL。

2.1.2 70%醇溶性有效部位提取方法 称取干燥栀子水提药渣30g加入5倍量70%乙醇浸泡30min后超声提取20min过滤，再加4倍量70%乙醇超声提取20min过滤，最后再加入3倍量70%乙醇超声提取20min过滤，合并3次提取液于55℃烘箱中浓缩至100mL，加入1‰苯甲酸钠。

2.2 试验方法 实验动物分为9组:正常对照组(Normal)、巴中产栀子水溶性有效部位组(BZZZW)、江西产栀子水溶性有效部位组(JXZZW)、江津产栀子水溶性有效部位组(JJZZW)、湖北产栀子水溶性有效部位组(HBZZW);巴中产栀子70%醇溶性有效部位组(BZZZA)、江西产栀子70%醇溶性有效部位组(JXZZA)、江津产栀子70%醇溶性有效部位组(JJZZA)、湖北产栀子70%醇溶性有效部位组(HBZZA)。每组动物数均为5只。于试验第一日开始，给药8个组分别插管灌胃给予相应药物，剂量均为2.1g/kg;Normal组插管灌胃给予等量生理盐水。每日灌胃1次，连续3天。实验第四天灌胃给药一次后30min，于家兔耳缘静脉注射戊巴比妥钠30mg/kg(即3%戊巴比妥钠溶液1mL/kg)，麻醉后将动物背位固定于手术上，去毛后开腹，于家兔胆囊中抽取胆汁［5］，测定胆汁中TBIL和CHOL含量。

2.3 检测原理 肝胆疾病和溶血性疾病胆汁中CHOL和TBIL含量都有一定程度变化，本试剂盒能定量测定人体胆汁中二者的含量，所采用的反应原理:TBIL 反应原理(化学氧化法)［6］。

2.4 试验结果 见表1。结果可知，四个产地栀子无论是水溶性有效部位，还是70%醇溶性有效部位均具有非常显著降低正常家兔胆汁中总胆红素TBIL和总胆固醇CHOL含量的作用，尤其是醇溶性有效部位。

巴中产栀子水溶性有效部位BZZZW对正常家兔胆汁中TBIL和CHOL的含量降低作用比江西、湖北、江津产栀子水溶性有效部位更有优势，但无显著性差异(P ＞0.05)。

巴中产栀子70%醇溶性有效部位BZZZA对正常家兔胆汁中TBIL和CHOL的含量降低作用比江西、湖北、江津产栀子70%醇溶性有效部位更有优势，但无显著性差异(P＞0.05)。

栀子70%醇溶性有效部位对正常家兔胆汁中TBIL和CHOL的含量降低作用优于栀子水溶性有效部位，但是无显著性差异(P＞0.05)。总之从栀子对正常家兔胆汁中总胆红素TBIL和总胆固醇CHOL含量降低作用的研究结果证明:巴中产栀子品质更优，治疗黄疸产生的效果更佳。巴中产栀子在川产药材中的临床开发和利用方面占具优势。

表1 栀子提取物利胆作用结果(±s，n=5)

表1 栀子提取物利胆作用结果(±s，n=5)

注:与 Normal组比较※P ＜0.05，※※P ＜0.01，※※※P ＜0.001。

组别 给药剂量g/kg TBIL CHOL Normal － 73.17 ±11.09 1.03 ±0.49 BZZZW 2.1 37.90 ±25.27※ 0.43 ±0.34※JXZZW 2.1 65.62 ±46.76 0.54 ±0.16※JJZZW 2.1 46.50 ±25.96※ 0.55 ±0.15※HBZZW 2.1 72.07 ±53.89 0.55 ±0.18※BZZZA 2.1 30.00 ±10.07※※※ 0.34 ±0.22※JXZZA 2.1 33.98 ±20.20※※ 0.52 ±0.20※JJZZA 2.1 45.90 ±15.99※ 0.42 ±0.39※HBZZA 2.1 32.15 ±30.19※ 0.35 ±0.14※

3 讨论

3.1 研究结果表明，巴中产栀子提取物降低正常家兔胆汁中TBIL、CHOL的效应与江西、江津、湖北产栀子的比较有进一步降低趋势，提示巴中栀子提取物具有明显利胆退黄作用，在临床上黄疸发生时，可优选巴中产栀子，以达到更好的治疗效果。另根据传统的炮制经验，临床配方用栀子多采用烘干、麸炒、清炒等方法进行炮制后才能入药。故其炮制品对药效的研究有待深入。

3.2 本研究只采用栀子提取物对正常家兔胆汁中TBIL、CHOL含量的作用进行研究，而对栀子如何利胆退黄的机制还不够深入。下一步有待制备溶血性黄疸、肝细胞细胞性黄疸、阻塞性黄疸、胆汁淤积型黄疸等模型，再给家兔胆总管插管形成瘘管引流胆汁，观察栀子提取物对家兔胆汁分泌量的影响，测定家兔胆汁以及血清成分，观察栀子提取物对黄疸模型组家兔利胆退黄的效果。

3.3 栀子本身味苦、性寒，临床上不能大剂量长时间给药，但剂量太少给药时间太短都会影响治疗效果。本研究连续同剂量给药四天，最后各给药组之间结果无显著性差异，可能与给药时间相对过短有关。有待进一步研究给药剂量和给药时间对疗效的影响。

［1］徐国钧.中草药彩色图谱［M］.福州:福建科学技术出版社，1989:44.

［2］国家药典委员会.中国药典·一部［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:231.

［3］唐灿，王子雯，孙嘉婧.多指标综合评价巴中产栀子的品质［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18(24):115.

［4］陈明，龙子江，王靓.栀子提取物保肝利胆作用的实验研究［J］.中医药临床杂志，2006，18(6):610 －612.

［5］陈奇.中药药理研究方法学［M］.北京:人民卫生出版社，1994:451－454.

［6］中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程·第3版［S］.南京:东南大学出版社，2006.