氟尿嘧啶和奥沙利铂对消化道肿瘤的协同抑制作用

聂 磊，柏 帅，刘 卫，张志国

5－氟尿嘧啶(5－FU)和奥沙利铂(L－OHP)在消化道肿瘤的化疗中应用最为广泛，大部分的化疗方案中均有这两种药物。虽然消化道的胚胎来源和组织结构相同并且大部分都是腺癌(除食管癌)，但5－FU和L－OHP对胃癌、结肠癌、直肠癌的抑制作用以及联合用药是否优于单药，各文献报道相差较大［1－3］。因此，笔者收集了消化道肿瘤患者的肿瘤细胞进行体外培养，采用MTT法检测并计算各化疗药物对肿瘤细胞的抑制率，为临床医师选择化疗方案，实现个体化治疗提供依据。

1 资料与方法

1．1 仪器与试剂 超净工作台(苏净集团安泰公司);CO2细胞培养箱(Forma Scientific);倒置显微镜(上海长方光学仪器有限公司);MB－580多功能酶标分析仪(深圳市汇松科技发展有限公司);压力蒸汽灭菌器(沈阳利港净化设备有限公司);胎牛血清(Gibico);DMEM培养基(Hyclone);双抗(Hyclone);MTT(Sigma);二甲基亚砜(天津市广成化学试剂有限公司)。

1．2 标本 自2011－01—2011－10，笔者所在科消化道肿瘤患者58例，未经放化疗。术中切取新鲜消化道肿瘤标本，胃癌31例，结肠癌15例，直肠癌12例;男38例，女20例;年龄29～83岁，平均54岁。

1．3 化疗药物 奥沙利铂(浙江海正药业股份有限公司，批号120503)，5－FU(天津金耀氨基酸有限公司，批号1201131)。所用化疗药物均用培养基配成10倍血浆药物峰浓度的溶液，具体药物浓度为奥沙利铂51 μg/ml，氟尿嘧啶1000 μg/ml。

1．4 标本处理 手术室无菌操作取得癌组织，放入装有培养液的培养瓶内，超净工作台内取出肿瘤组织，于盛有DMEM的平皿清洗并修剪去除非肿瘤组织，用眼科剪剪成约1 mm3碎块，加入约2 ml 0．2%胶原酶，置于37℃培养箱内进行消化，1次/h取出吹打组织，使组织块尽量分散，用200目筛网过滤，滤液1500 r/min离心10 min，弃上清用完全培养液重悬制成单细胞悬液，活细胞计数并调整细胞浓度约为5×105个/ml。接种细胞于 96 孔板中，每孔 180 μl，5%CO2培养箱中培养24 h。取出培养板，设空白对照组(培养液)、细胞对照组(肿瘤细胞)以及化疗药物组(肿瘤细胞+化疗药)，各组设4个复孔，试验组分别加入各种抗肿瘤药物20 μl，对照组加20 μl培养基，将培养板置37 ℃，5%CO2培养箱中培养，24 h后，取出培养板，每孔加入5 mg/ml的MTT 20 μl，培养箱中继续培养 6 h。弃上清后，每孔加入100 μl DMSO，使紫蓝色甲瓒沉淀完全溶解，用酶标仪在570 nm波长处检测各孔的OD值计算抑制率，抑制率(IR)=(细胞对照孔平均OD值－加药孔平均OD值)/(细胞对照孔平均OD值－空白对照孔平均OD值)×100%。抑制率≥50%为高度敏感，30%≤抑制率＜50%为中度敏感，抑制率＜30%为耐药。

1．5 统计学分析 抑制率以平均值±标准差表示。采用SPSS12．0统计软件进方统计学分析，组间计量资料比较采用t检验。采用金正均法判断两种药物的相互作用［4］，该分析方法的公式为:q=IR(A+B)/(IRA+IRB－IRA×IRB)。其中，IR为药物对肿瘤细胞的抑制率，A和B分别指5－FU和LOHP，IRA和IRB分别是单用药的抑制率，IR(A+B)为联合用药的抑制率。q≥1．15表示两药合用时产生协同作用;q≤0．85表示两药合用产生拮抗作用。

2 结果

5－FU和L－OHP以及两药联用对肿瘤细胞的抑制率见表1。结果表明，5－FU和L－OHP联用对三种肿瘤细胞的抑瘤作用优于单一用药，两药具有协同作用。

表1 5－FU和L－OHP体外肿瘤细胞抑制率(±s，%)

表1 5－FU和L－OHP体外肿瘤细胞抑制率(±s，%)

注:与5－FU组比较，aP"0．05;与 L－OHP组比较，bP"0．05。

肿瘤名称n 肿瘤细胞抑制率5－FU L－OHP 5－FU+L－OHP q胃癌 31 39．8 ±13．6 14．4 ±3．4 55．1 ±12．0a，b 1．16结肠癌 15 40．7 ±15．4 13．6 ±3．1 61．25 ±16．4a，b 1．23直肠癌 12 59．6 ±14．5 45．6 ±19．4 67．2 ±19．4a，b 1．28

3 讨论

化疗在综合治疗消化道肿瘤中占有重要的地位，尤其在防止其复发方面作用显著。但肿瘤是一个异质性、多态性、分化不均匀的细胞群体，肿瘤对各种化疗药物的敏感性存在着明显的个体差异，这些都会影响消化道肿瘤化疗效果［5］。目前临床抗肿瘤药的应用都是经验用药，或者参照指南用药，存在很大的盲目性，疗效也不确切，因此，为了提高疗效、避免耐药性的产生和减少不良反应，化疗药物敏感性检测已成为提高疗效的重要手段。

5－FU是细胞S期特异性药物，是一种嘧啶类似物，在细胞内转化成不同的细胞毒性代谢产物，与DNA和RNA结合，最终通过抑制DNA合成导致细胞周期停滞和细胞死亡。L－OHP为第3代铂类抗肿瘤药物，以DNA为靶作用部位，阻断其复制和转录。在临床消化道肿瘤治疗药物的选择上，5－FU和L－OHP常作为一线用药，或联用或单用。MTT法简单、快速、处理样本量大、结果与临床化疗敏感和耐药具有高一致性高等优点，自20世纪90年代以来被用于大部分临床肿瘤细胞化疗药敏试验［6－8］。因此，笔者选择了5－FU和L－OHP两种化疗药物，采用MTT法进行了肿瘤细胞药物敏感性测定。实验结果表明，直肠癌细胞对5－FU和L－OHP都敏感，而胃癌和结肠癌细胞对5－FU敏感，但对L－OHP不敏感。联合用药后三种肿瘤细胞对药物都高度敏感，两药联用具有协同作用。

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