柱前衍生HPLC法测定保山透心绿蚕豆中氨基酸的含量

张绍龙 刘超 杨丽英 梅丽宝

建立了柱前衍生高效液相色谱法同时测定保山透心绿蚕豆中16种氨基酸的方法。方法以异硫氰酸苯酯（PITC）为柱前衍生试剂，采用Diamonsil AAA氨基酸分析柱用二元梯度洗脱，于UV254 nm 波长下检测，60min 内16种氨基酸得到良好的分离。氨基酸浓度在0.1～0.5 umol/mL范围内其浓度与响应值具有良好的线性关系，相关系数均大于0.9997，样品的相对标准偏差在1.36%～5.43%之间，检出限为0.05umol/mL。相对其他柱前衍生测定氨基酸的方法而言，该方法快速、灵敏、准确，样品处理简便易行，可用于保山透心绿蚕豆及其他豆类中氨基酸的分析测定。

保山透心绿蚕豆属蚕豆中的稀有名贵品种，特产于云南保山，特殊的地理气候使其维生素、营养物质含量均比普通蚕豆高[1]，是高蛋白、富淀粉、低脂肪的豆类作物，含有人体必须的8种氨基酸、维生素和矿物质，被誉为云南高原特种绿蚕豆。氨基酸作为评价营养质量的一项重要指标，研究保山透心绿蚕豆中的氨基酸组成及其含量，对研究其营养价值和质量控制具有十分重要的意义。

测定氨基酸的方法很多[2-5] ，如氨基酸分析仪柱后衍生测定，但是氨基酸分析仪价格昂贵，分析时间长，且只能用于分析氨基酸，限制了氨基酸分析技术的广泛使用。七十年代以来，柱前衍生高效液相色谱法开始应用于氨基酸的测定[6]，特别是异硫氰酸苯酯（ PITC）柱前衍生法由于其产物苯基硫酸盐较稳定，该法是目前氨基酸分析中具有吸引力的分析方法之一。

本文以异硫氰酸苯酯（PITC）为柱前衍生剂，结合紫外检测器定量检测保山透心绿蚕豆中16种氨基酸含量。该方法快速、灵敏、准确，样品处理简便易行，可用于保山透心绿蚕豆及其他豆类中氨基酸的分析测定。

1实验部分

本研究建立了异硫氰酸苯酯（PITC）柱前衍生高效液相色谱法同时测定保山透心绿蚕豆中16种氨基酸的方法，该方法快速、灵敏、准确，可用于豆类中氨基酸的分析。同时，测定结果表明保山透心绿蚕豆氨基酸总含量为30.3%，处于蚕豆中含量的上端[7-8]，由此可见，保山透心绿蚕豆蛋白质含量较高，具有较高的营养价值，是值得推广的地方特色产品。

（作者单位：云南省保山市质量技术监督综合检测中心）