原发性垂体促性腺功能低下闭经患者CD8+CD28+/CD8+CD28－T细胞平衡及其与性激素的关系

陈 必 郭赛群 杨佩娴

国外报道原发性闭经患病率约为5% ～10%;国内有资料显示原发性闭经发病率逐年上升，已达10%左右，其中25岁以下患者比例达25%［1］;且国内外均发现原发性闭经都有发病年轻化的倾向［2］。因此原发性闭经的病因及发病机制有待进一步研究。已有研究发现原发性闭经患者的CD8+T亚群数量明显升高［3－4］，且升高的程度与血清总睾酮(Tor)及雌二醇(E2)的水平含量呈相关性，这说明CD8+T亚群与原发性闭经患者的性激素代谢有密切关系。但CD8+T细胞分为CD8+CD28+杀伤性及CD8+CD28－抑制性两个亚群，且两者构成一个平衡，究竟原发性闭经与该平衡关系如何，与且该平衡与性激素是否存在相关性?目前均缺乏探讨。以此为创新点，笔者对原发性垂体促性腺功能低下导致闭经的患者进行研究，发现该类患者外周血CD8+CD28－抑制T细胞含量升高，后者与睾酮及促黄体生成素含量呈相关性，具体过程如下。

1 资料与方法

1.1 患者资料

选取2009年1月～2011年1月间我院妇产科的原发性闭经患者作为观察对象。采用国际原发性闭经协作组结合2006年中华医学会妇产科学分所推荐的诊断方案及相关标准，共入选原发性垂体促性腺功能低下导致闭经的患者32例，并选取32名同龄的健康女性作为对照组，两组的年龄无统计学差异。

1.2 流式细胞术检测

以上观察对象均于清晨空腹抽取肘静脉血［5］，随后使用Beckman Coulter Cell多色流式细胞仪，分别检测CD28分别为阳性及阴性的CD8+T所占的百分比，分别代表CD8+CD28+杀伤性T细胞及CD8+CD28－抑制性T细胞的数量;同法采用多色流式细胞仪，检测以上两类细胞内细胞因子IFN－γ及IL－4的百分的含量［6］。

1.3 性激素水平测定

使用放射免疫法检测外周血清E2、Tor、FSH及LH含量［7］。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 CD8+CD28+与 D8+CD28－T 细胞检测

两组的CD8+CD28+与D8+CD28－T细胞及其细胞因子，均呈显著梯度变化，其中CD8+CD28+T细胞及IFN－γ均以健康组含量最高，两组之间任意两者均有统计学差异;而D8+CD28－T细胞及IL－4的情况相反，以健康组最低(表1及图1)。

表1 两组CD8+CD28+与D8+CD28－T细胞及其胞内细胞因子的含量(±s)

表1 两组CD8+CD28+与D8+CD28－T细胞及其胞内细胞因子的含量(±s)

注:与健康组比较，1)p＜0.05

分组CD8+CD28+T细胞CD8+CD28－T细胞IFN－γIL－4健康组13.26 ±4.21 16.37 ±6.18 9.82 ±4.91 15.38 ±5.47原发性闭经患者 7.91±1.731)23.92±9.921) 4.01±2.871) 26.72±10.911)t 3.161 2.525 2.819 4.882 p 0.000 0.012 0.006 0.002

图1 两组CD8+CD28+与D8+CD28－T细胞流式细胞图

2.2 激素含量比较

与健康组比较，原发性闭经组患者的E2显著降低(P=0.000)，而 Tor及 LH则显著高于健康组(P=0.008及0.010)，但两组的FSH无统计学差异(P=0.066)，见表2。

表2 两组性激素含量比较(±s)

表2 两组性激素含量比较(±s)

分组 E2(pg/ml)Tor(nmol/L)FSH(IU/L)LH(IU/L)健康组165.82 ±53.28 2.24 ±0.87 6.65 ±2.97 9.39 ±3.92原发性闭经 71.38 ±26.34 3.18 ±0.93 9.59 ±3.13 18.28 ±7.28 t 10.382 －3.174 －1.022 －3.762 p 0.000 0.008 0.066 0.010

2.3 相关性分析

通过Pearson相关性分析发现:①CD8+CD28+T细胞与IFN－γ呈正相关性(P=0.016);②CD8+CD28－T细胞与IL－4、Tor及 LH三者均呈正相关性(P=0.021、0.023及0.016);③CD8+CD28+T细胞与CD8+CD28－T细胞呈显著负相关性(P=0.000)。

3 讨论

CD8+T细胞是重要的T细胞亚群。根据表达细胞因子的不同，可将CD8+T细胞分为Tc1及Tc2两个亚群，其中Tc1以表达IL－2及IFN－γ为主，以介导细胞免疫为主;而Tc2以表达IL－4、IL－8等细胞因子为主，以介导体液免疫为主。本研究发现，原发性垂体促性腺功能低下导致的原发性闭经患者的CD8+CD28+T细胞及IFN－γ含量降低，而CD8+CD28－T细胞及IL－4含量升高，本结果与宋玉霞［8］报道的卵巢早衰(POF)患者T细胞亚群变化有类似之处;该研究发现卵巢早衰致闭经患者的CD8+T细胞显著升高，并且发现POF患者外周血出现卵巢自身抗体(AoAb)滴度升高，提示与体液免疫相关。本研究发现原发性垂体促性腺功能低下闭经患者CD8+T细胞免疫平衡向CD8+CD28－抑制性T细胞倾斜，由于IL－4属于Tc2类细胞因子，所以该类免疫失衡属于体液免疫性质，与上述报道有一致性。由于体液免疫与内分泌激素代谢存在极为重要的联系，就两者的联系进一步讨论如下。

性激素是包含卵巢在内的性腺分泌的重要蛋白质，有研究发现闭经患者血清17β－E2水平明显下降、T明显升高、PRL值有所下降，说明性激素代谢紊乱是闭经的重要表现［9］。由于闭经所涉及的激素种类较多，本研究选取 E2、Tor、FSH及LH作为性激素的代表进行观察。我们发现，原发性闭经组患者的E2显著降低，而Tor及LH则显著升高，但两组的FSH无统计学差异，这与李滢［10］的报道的闭经患者E2降低、LH升高大体一致。本研究结果提示该类患者雌激素水平明显缺乏或不足，而雄激素含量升高，符合典型的闭经患者激素代谢特征［11］;但本研究与李滢报道有所不同的是，本研究发现原发性垂体促性腺功能低下闭经患者Tor升高，而李滢发现Tor与对照组无明显差异，可能是该研究入选的患者既包括原发性闭经患者，又包括继发性闭经患者，而本研究对象均属于原发性垂体促性腺功能低下闭经患者，这说明了Tor可能是鉴别不同闭经病因的重要指标，是原发性闭经患者的一个重要性激素代谢特征。

相关性分析结果显示，Tor及LH与CD8+CD28－T细胞及IL－4四者存在显著正相关性，亦即表现为四者呈平行升高，这预示Tor及LH与闭经患者的免疫学异常关系更为密切，故Tor及LH临床意义更为显著，因此我们认为，Tor及LH的水平可以作为该类闭经患者免疫学治疗疗效的重要内分泌学评价指标，而IL－4可作为重要的免疫学评价指标。

综合上述，本研究在一定程度上从免疫学及内分泌学角度阐述了原发性闭经患者免疫失衡与性激素代谢紊乱的关系，并发现CD8+CD28+T可能是原发性闭经患者治疗的一个靶细胞，且该类免疫失衡以Tc2类为主，其机制可能是CD8+CD28+T过度表达，导致细胞抑制功能过强，IL－4分泌过多，间接导致Tor及LH过度分泌增加，导致内分泌代谢紊乱，最终导致闭经。以上结果可为原发性垂体促性腺功能低下闭经患者免疫调节治疗提供一定的依据，笔者将在后续的研究中进一步该T细胞平衡与其它激素代谢的相关性。

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