细野荞水提液清除活性氧的效果

邓琳琼+赵菲菲+张以忠

摘要：用NBT光化还原法、Fenton反应法、钼酸铵显色分光光度法对细野荞茎、叶水提液清除羟基自由基（·OH）、超氧阴离子自由基（ O-2· ）、过氧化氢（H2O2）的能力进行研究。结果表明：细野荞茎、叶水提液对·OH的最高清除率分别为93.62%、76.63%，平均清除率分别68.38%、39.37%；细野荞茎、叶水提液对 O-2· 的最高清除率分别为98.45%、73.32%，平均清除率分别79.04%、48.25%；细野荞茎、叶水提液对H2O2的清除作用相对较弱，最高清除率仅分别为31.44%、12.34%，平均清除率仅分别为20.19%、7.39%；且茎和叶对·OH、 O-2· 、H2O2的清除作用差异显著。

关键词：细野荞；活性氧；·OH； O-2· ；H2O2

中图分类号：R284.1 文献标志码：A

文章编号：1002-1302（2014）08-0298-03

活性氧（reactive oxygen species，ROS）是指生物体内有氧代谢过程中或在外界物理、化学因素诱导下产生的含有氧原子且氧化能力很强的多种物质总称^[1-3]，主要有超氧阴离子自由基（ O-2· ）、羟基自由基（·OH）、过氧化氢（H2O2）等。它们在生命活动的代谢过程中不断产生，与生物体衰老及许多疾病发生都有重要关系^[4-9]。现代医学研究证明，衰老、癌症、炎症等疾病与体内脂质过氧化和自由基有直接关系，因此应用抗氧化物质来保持人体健康和预防疾病的研究越来越受到科学家关注[4，7，10]。荞麦属于蓼科（Polygonaceae）荞麦属（Fagopyrum），种植适应性强，属于药食两用植物^[11-12]。因荞麦含有黄酮、蛋白质、原花青素、膳食纤维等功效分子，具有降糖、抗缺血、抗氧化、抗菌、抗癌、助睡眠等保健功能[11，13]。目前，对荞麦清除活性氧的研究较少，且主要集中在甜荞（F. esculentum Moench）和苦荞[F. tataricum（L.）Gaertn.]2个栽培种上。姚亚平等研究发现，甜荞和苦荞的乙醇提取物对DPPH自由基和羟自由基均有显著抗氧化作用，且呈剂量效应关系^[14]。何永艳等研究发现，甜荞和苦荞的乙醇提取物均有较强的抗氧化活性和明显的自由基清除效果^[15]。而对野生荞麦清除活性氧的研究还未见报道。本研究考察了野生荞麦细野荞[F. gracilipes （Hemsl） Dammer ex Diels]的茎、叶水提液对·OH、 O-2· 、H2O2等活性氧的清除作用，以期为荞麦食品、保健品、化妆品的开发利用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

供试细野荞于2012年7月采自贵州省毕节市七星关区鸭池镇。

1.2 方法

1.2.1 样品制备

取细野荞植株的茎、叶，用蒸馏水洗净，40 ℃ 下恒温烘干至恒重，打粉，称重。分别加干质量40、45倍的蒸馏水，80 ℃、140 r/min振荡1 h，过滤收集滤液，对残渣分别再加25倍蒸馏水，80 ℃、140 r/min振荡1 h，过滤收集滤液，合并2次滤液，即为细野荞茎、叶的水提取液，茎、叶提取液浓度分别为80、61.5 g/L，将其储存冰箱备用。

1.2.2 水提液对活性氧的清除试验 参照龚宁等的方法^[16-17]并稍加改动，测定水提液对活性氧的清除效果。

1.2.2.1 细野荞各器官水提液对·OH的清除试验

对样品的茎、叶均设5个浓度梯度处理（0.094、0.188、0.282、0.376、0.470 g/L），分别测定各浓度梯度处理下的清除率。反应体系总体积为3 mL，含pH值7.4的PBS 0.75 mL、2 mmol/L EDTA Na2-Fe（Ⅱ）1 mL、70 mg/L番红花红T 0.5 mL、不同浓度供试液0.25 mL、体积分数0.33%的H2O2 0.5 mL。将其充分混匀，置于37 ℃恒温水浴锅中保温 30 min，用723 N分光光度计于520 nm波长处测吸光度（D），加不同浓度供试液的体系吸光度为D样品，以提取介质代替供试液的体系吸光度为D空白，两者均以未加EDTA Na2-Fe（Ⅱ）（用蒸馏水代替）作对照，各自与其对照之差分别记为ΔD样品、ΔD空白。供试液对·OH的清除能力以清除率（E）表示：

点^[15]。目前已在栽培荞麦[12，14-15]、花叶开唇兰^[17]、南瓜^[21]、少花龙葵^[22]、葡萄^[23]、拳参^[24]、荔枝^[25]等植物上进行了相关研究，证明其提取物具有较强的清除活性氧作用，为寻找安全、清除活性氧的天然制剂提供了理论依据。

本研究首次对荞麦属野生荞麦细野荞不同器官清除活性氧（·OH、 O-2· 、H2O2）作用进行研究，结果发现，细野荞茎、叶水提液对·OH、 O-2· 均具有较强的清除作用，最高清除率分别为93.62%、76.63%和73.32%、98.45%；而对H2O2的清除能力相对较低，最高清除率仅分别为31.44%、12.34%。另外，细野荞不同器官水提液对自由基的清除能力不同。对于·OH和H2O2，细野荞茎水提液的清除率均显著高于叶；而对于 O-2· ，细野荞叶水提液的清除率显著高于茎。以往研究认为，·OH、 O-2· 、H2O2等自由基中，·OH是对生物体毒性最强、危害最大的自由基，对·OH的清除率是反映药物抗氧化作用的重要指标[15，26]，因此常用清除·OH的能力来评价一种物质对自由基的清除效果。本研究中细野荞茎、叶水提液对H2O2具有一定的清除作用，而对·OH和 O-2· 均具有较强的清除能力，表明细野荞茎、叶对自由基具有很好的清除效果。endprint

细野荞是荞麦属中一个野生种，广泛分布于我国，作为一种潜在的天然抗氧化制剂原料，具有很大的开发应用价值。本研究结果对于细野荞在保健品、化妆品及其深加工等方面均有一定的理论和实际意义。

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