钩苞大丁草薄层鉴别研究

2014-10-22徐冰钰

云南中医中药杂志 2014年2期

徐冰钰

(昆明圣火药业集团有限公司, 云南昆明 650217)

钩苞大丁草(GerberadelavayiFranch.)为菊科大丁属植物。又名钩苞灯草、火草、小一支箭、大火草[1]。具有清热利湿，消积杀虫。主治痢疾，胃痛，消化不良，蛔虫症[2]。经文献检索，发现没有控制其药材质量的文献报道。采用薄层色谱法对其进行了薄层鉴别研究，对其质量控制有一定的意义。

1 仪器、试验材料、对照品、样品

仪器：赛多利斯BP221S万分之一电子天平；赛多利斯BS2000S百分之一电子天平；100×100 mm双槽薄层色谱展开缸；试验材料：乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、甲苯、氯仿、甲酸等试剂均为分析纯；硅胶G板、硅胶GF254板、硅胶H板(规格：50×100 mm、100×100 mm；厚度：0.20～0.25 mm)，青岛海洋化工厂出品。以上试验材料均购自昆明市化玻供应站；对照品：大丁苷，批号：20080501，化学组制备提供；样品：钩苞大丁草：批号：20070301、20080401、20080501，由昆明圣火药业(集团)有限公司提供；

2 方法与结果

2.1 试验条件的考察影响薄层鉴别的因素包括有效成分的提取方法、薄层板的种类、展开系统的组成、显色剂、点样量等。通过试验对以上因素进行了考察，便于获得理想的薄层色谱条件。

2.1.1 提取方法的考察方法一：取本品5.02 g，加浓度为95%乙醇50 mL，回流提取2 h，滤过，滤液挥干，残渣加浓度为95%乙醇5 mL使溶解，作为供试品溶液。

方法二：取本品5.07 g，加甲醇50 mL，回流提取2 h，滤过，滤液挥干，残渣加乙醇5 mL使溶解，作为供试品溶液。方法三：取本品4.97 g，加浓度为95%乙醇50 mL，回流提取2 h，滤过，滤液挥干，残渣加水25 mL分次洗涤，合并洗液，用氯仿25、25、25 mL萃取3，弃去氯仿液，水液用正丁醇50、25、25 mL萃取3，合并正丁醇液，置水浴上蒸干，放冷，残渣加95%乙醇乙醇5 mL使溶解，作为供试品溶液。

结论：对3提取方法进行比较，方法一、二斑点情况无明显差异，方法三、虽然能去除部分杂质，但在对大丁苷的分离无明显影响，鉴于以上情况，从简单可行、安全易得的方面考虑，确定方法一为供试品溶液的制备方法。

2.1.2 展开剂的选择采用(1)氯仿-甲醇-水(7：3：1)；(2)氯仿-甲醇-水(30：10：3)的下层溶液每5 mL加甲酸0.1 mL；(3)甲苯-醋酸乙酯-甲酸-乙醇(3：4：1)；(4)甲苯-醋酸乙酯-甲酸-乙醇(3：4：1：2)；(5)正丁醇-醋酸-水(4：1：1)等条件为展开剂展开，发现以(2)、(4)、(5)为展开剂所得色谱斑点圆整，Rf值适中，其中展开剂(2)的分离效果最佳，故展开剂定为：氯仿-甲醇-水(30：10：3)的下层溶液每5 mL加甲酸0.1 mL。

2.1.3 薄层板的选择采用硅胶G板、硅胶GF254板、硅胶H板作为固定相，发现硅胶G板、硅胶GF254板分离效果好，其中以硅胶GF254板为吸附剂所得色谱在紫外光365 nm、254 nm下均有荧光或暗斑。故吸附剂选择硅胶GF254，既能满足分离需要，又便于观察。

2.1.4 显色剂的选择曾采用氨熏、碘蒸气熏、重氮化试剂、异羟肟酸铁试剂、硫酸乙醇试剂、荧光观察进行考察，发现用氨熏、硫酸乙醇试剂能使大丁苷显色，但氨熏的供试品色谱中，由于其他物质也显色，背景干扰大，大丁苷与其他物质界线不明，而硫酸乙醇试剂无背景干扰，但斑点颜色(蓝紫色)较淡，退色快，经用不同浓度的硫酸乙醇进行考察，斑点颜色无明显改变。结合薄层板的选择情况，确定为在365nm荧光下观察。

2.1.5 点样量的选择选取本品5 g，加乙醇50 mL，回流提取2 h，滤过，滤液挥干，残渣加乙醇5 mL使溶解，作为供试品溶液。分别吸取2、5、10 μL点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿-甲醇-水(30：10：3)的下层溶液每5 mL加甲酸0.1 mL为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视，以5 μL点样量的斑点最清晰，圆整，故点样量定为5 μL。

2.1.6 阴性对照试验取大丁苷对照品、钩苞大丁草、阴性对照，制备对照药材溶液、供试品溶液、空白溶液进行薄层鉴别，结果表明空白无干扰。

2.2 试验结果根据以上实验结果，钩苞大丁草的鉴别方法定为：取本品5 g，加乙醇50 mL，回流提取2 h，滤过，滤液挥干，残渣加乙醇5 mL使溶解，作为供试品溶液。取大丁苷对照品，加乙醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典)版附录Ⅵ B)吸取上述两种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿-甲醇-水(30：10：3)的下层溶液每5 mL加甲酸0.1 mL为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。